1、姜黃素對單側輸尿管梗阻后腎間質纖維化的調節    【摘要】  目的： 研究姜黃素在單側輸尿管梗阻(UUO) 大鼠模型中能否減少腎間質中轉化生長因子1（transforming growth factor-1,TGF-1）和結締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）的表達。 方法: 將30只大鼠隨機分為3組，每組10只：假手術組、模型組、姜黃素組。模型組和姜黃素組行右側輸尿管接扎術，假手術組只游離不

2、接扎。術后第14天處死各組中的大鼠，檢測血液尿素氮（BUN）、血清肌酸酐（Scr）。用免疫組織化學方法測定TGF-1、CTGF的表達情況，同時采用Masson染色，觀察腎臟病理情況。結果: 姜黃素降低了BUN、Scr的含量，同時姜黃素顯著減少了大鼠腎間質TGF-1、CTGF的表達，并有效改善了腎臟的病理學損傷。 結論: 姜黃素可以減少輸尿管梗阻后TGF-1、CTGF的表達，從而改善UUO所致的腎臟損傷，提示姜黃素可能有延緩慢性腎臟疾病纖維化進程的潛能?！娟P鍵詞】  輸尿管梗阻； 纖維化； 姜黃素； 免疫組織化學；&

3、#160;大鼠，Spragua-Dawley； 腎間質    Abstract Objective: To verify if curcumin can decrease the expression of transforming growth factor-1(TGF-1) and connective tissue growth factor (CTG

4、F) in unilateral ureteral obstruction (UUO)rat models during the process of renal interstitial fibrosis caused by unilateral ureteral obstruction (UUO).Methods: The experiment was succe

5、ssfully conducted from May to August, 2007 in Union Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology. Thirty Sprague-Dawley rats 

6、were randomly divided into three groups: sham operated group，UUO model group, and curcumin-treated group (10 in each group). The rats in the UUO model group and curcumin-

7、treated group underwent UUO surgery. Rats in curcumin-treated group were given water suspension of curcumin powder (200 mg·kg -1·d -1) orally, while those in UUO mod

8、el group and sham operation group were given water only instead. All of the rats were killed in 14 days after surgery. The levels of blood urea nitrogen (BUN)&#

9、160;and serum creatinine (Scr) were measured, histological changes were observed with Masson stain method, and Immunohistochemistry was performed on renal tissue to detect TGF-1 an

10、d CTGF. Results: In the obstructed kidneys，there were significant renal interstieial fibrosis and interstitial space expansion. Immunohistochemical staining showed that the expression of

11、0;TGF1 and CTGF was significantly increased in the obstructed kidneys. In comparison with the model group，BUN and Scr levels,  interstitial volume, and the expression of 

12、TGF-1 and CTGF in curcumin-treated group were significantly decreased. Conclusions: The results indicate that curcumin can down-regulate the expression of TGF-1 and CTGF in UUO

13、0;rats, through which curcumin might mitigate the pathological changes of the UUO renal tissue. It's suggested that curcumin can be used to slow down the progression 

14、of chronic renal disease.    Key words ureteral obstruction; fibrosis; curcumin; immunohistochemistry; rats,Sprague-Dawley; renal inerestitum    腎間質纖維化幾乎是所有慢性腎臟疾病進行性發展的共同最終通路，延緩腎間質纖維化的發展，可降低終末期腎病(ESRD

15、)的發生率1。姜黃素是姜黃中提取的一種植物多酚，也是姜黃發揮藥理作用最重要的活性成分。近年來的研究不僅證明了姜黃的傳統作用，而且還揭示出一些新的藥理作用，如抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人類免疫缺陷病毒、保護肝臟和腎臟、抗纖維化以及防癌抗癌等作用，而且無明顯的毒副作用2。2007年58月研究了姜黃素抑制腎間質纖維化的作用機制，其中重在研究姜黃素對在單側輸尿管梗阻（UUO）模型大鼠中腎間質中轉化生長因子1（transforming growth factor-1,TGF-1）、結締組織生長因子（connective tissue growth f

16、actor，CTGF）的影響，希望在臨床上研制出有效藥物。    1  材料與方法    1.1  材料    雄性、無特定病原體動物級（specific pathogen free, SPF）、Sprague-Dawley大鼠同濟醫學院動物中心提供，生產許可證：SCXK（鄂）2004-002830只，7 w齡，體重(180.2±8.35)g。動物房飼養環境為每籠6只，每24 

17、h換1次墊料，喂以正常飲食，自由進水，溫度為（24±2），相對濕度為（45±3）%。姜黃素純度為95%（美國Sigma公司）；兔抗大鼠TGF-1、CTGF 多克隆抗體及SP免疫試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。    1.2  方法    1.2.1  造模  適應性飼養1周后，按照完全隨機設計方法，以體重由輕到重的順序編號用隨機排列表法分為假手術組、模型組、姜黃素組各10只。假手術組和模型組每天給予蒸餾水2 

18、ml灌胃，姜黃素組將姜黃素粉末（200 mg·kg-1·d-1）混懸于2 ml蒸餾水中灌胃，術前1 d開始給藥。造模方法：模型組和姜黃素組行右側輸尿管結扎術，質量濃度為20 g/L戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉后，行正中豎切口打開腹腔，分離右側輸尿管并行雙結扎，假手術組只分離但不結扎。于術后第14天處死所有大鼠，處死前下腔靜脈取血3 ml做血生物化學檢驗并行腎原位灌流去除血細胞。取右側腎臟，縱切為兩部分，一部分用體積分數為4%的多聚甲醛溶液浸泡24 h做病理及免疫組織化學檢測，另一部分速凍于-

19、70 冰箱。1.2.2  BUN、Scr檢測  采用自動生化分析儀(Beckman CX3 Delta)進行BUN、Scr的檢測。    1.2.3  免疫組織化學檢查  SP法檢測腎組織中的TGF-1、CTGF表達，按SP試劑盒說明書進行。每張切片不含腎小球的腎小管間質區域，隨機選取8個高倍鏡視野（400倍），用免疫組織化學分析軟件系統HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統（同濟醫學院清屏影像公司）對所選視野內的棕黃色陽性信號進行圖像

20、分析，計算各組大鼠腎組織TGF-1、CTGF的平均陽性表達率，即棕黃色陽性信號占整個視野的百分比。    1.2.4  腎組織病理檢查  右側腎組織行Masson染色，光鏡觀察腎間質纖維化情況。間質纖維化定量分析也借助HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統，取Masson染色切片，每張切片觀察8個不含腎小球，互不重疊的間質高倍鏡視野（400倍），計算每張切片腎間質綠染面積占整個視野的百分比。    1.3  統計學方法  &#

21、160; 采用SPSS13.0統計軟件處理數據，計量數據采用(x±s)表示，組間比較用單因素方差分析和兩兩比較用q檢驗，P0.05為差異具有統計學意義。    2  結果    2.1  血生化檢查    模型組和假手術組比較BUN、Scr都顯著升高（P0.01），姜黃素組和模型組比較，BUN、Scr都顯著降低（P0.01）。見表1。    2. 2 

22、60;免疫組化TGF1、CTGF的表達    模型組與假手術組比較，TGF1、CTGF的表達都顯著上調（P0.01），而姜黃素組與模型組比較都顯著抑制了其表達（P0.01）。見表1、圖1和圖2。    2.3  腎組織病理改變    3  討論    腎小管間質病變程度決定了10年腎臟存活率，比腎小球病變的嚴重程度更為重要3 。延緩腎間質纖維化的進展,可降低ESRD的發生率。UUO是一個

23、成熟的腎纖維化實驗模型，其特點是進行性小管萎縮及間質纖維化，早期腎小球相對不受影響，但最終導致整個腎臟結構的破壞4。在梗阻腎的小管間質中細胞外基質（extracellular matrix, ECM）的產生增加和（或）降解減少均可導致ECM異常積聚，在腎間質纖維化發生和發展具有重要的意義。TGF-1在UUO模型腎臟纖維化的作用已被公認，TGF-1的下調能有效延緩纖維化的進展5。CTGF 除可促進腎小球硬化外,與腎小管-間質纖維化的發生和發展也有十分密切的關系，同時CTGF 是TGF-1介導的腎間質纖維化的重要下游效應因子6。  

24、60; 近年研究表明姜黃素能夠促進大鼠系膜細胞凋亡并抑制氧化低密度脂蛋白（oxidation of low density lipoprotein，OX-LDL）的促增殖作用，顯著誘導FAP-1 和bag-1表達7。還可抑制糖尿病大鼠腎臟NF-B p65的核轉導從而改善腎臟病理變化8。Kuwabara N等9發現在UUO模型大鼠14 d時姜黃素可以抑制核轉錄因子-B的活性，對激活蛋白-1卻沒有明顯的作用。本研究重在觀察姜黃素對UUO模型大鼠中的TGF-1、CTGF的影響，結果證明了實驗前的假想：即姜黃素可

25、以下調梗阻性腎病中TGF-1、CTGF的表達，還同時降低了BUN、Scr，抑制了腎間質的纖維化。    總之，本研究結果提示姜黃素能夠改善UUO模型病理損傷，從而達到其對腎間質纖維化的阻抑作用。由于姜黃素具有價格便宜、不良反應小等特點，因而它對于延緩慢性腎臟疾病向終末期腎病的發展是一種很有前途的藥物。【參考文獻】  1 EL Nahas AM. Pathways to renal fibrosisJ.Exp Nephrol, 1995（2）:71

26、-75.2 鮑華英，陳榮華.姜黃素的研究進展J.國外醫學兒科學分冊,2003(5):254-256.3 Alexopoulos E,Papagianni A.Papadimitriou M.Is membranous nephropathy only a glomerular diseaseJ.Renal Failure, 1998（1）:1-6.4 Gerth J H, Kriegsmann J, Tri

27、nh TT, et al. Induction of p27KIPI after unilate ral ureteral obstruction is independent of angiotensin J. Kidney Int , 2002(1) :68-79.5 Wright EJ,McCaffey TA. Robertson AP, et al. Chronic unilateral ureteral