1、Axin蛋白表達與肝細胞癌發(fā)生及預(yù)后關(guān)系的研究 作者：董承偉曾勇丁怡莊冠一李森【摘要】 目的：明確Axin蛋白在正常肝組織、肝細胞癌組織、癌旁組織中的表達，探討Axin蛋白表達與肝細胞癌的發(fā)生及與預(yù)后影響因素間的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)方法(SABC法)檢測正常肝組織(15例)、肝細胞癌組織(40例)及其癌旁組織(21例)中Axin蛋白的表達及定位。結(jié)果：正常肝組織、肝細胞癌組織及癌旁組織中均有Axin蛋白表達，其陽性表達率分別為92.9%、57.5%和90.5%。Axin蛋白表達于陽性細胞胞質(zhì)中;正常肝組織與癌旁組織中Axin蛋白的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);正常

2、肝組織和癌旁組織中Axin蛋白表達與癌組織比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Axin的表達與肝細胞癌患者性別、年齡、腫瘤大小、AFP表達水平無關(guān)(P>0.05)，而與臨床病理分期、門靜脈癌栓形成相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：Axin蛋白表達減弱可能參與肝細胞癌的發(fā)生;Axin蛋白表達水平可作為肝細胞癌患者診斷和預(yù)后判斷的一項指標。 【關(guān)鍵詞】 癌，肝細胞·Axin蛋白·免疫組織化學(xué)【ABSTRACT】 Objective: To detect the expression and distribution of Axin in

3、 the normal liver tissue, paracarcinomatous tissue and primary hepatocellular carcinoma tissue and investigate the relationship between Axin expression and the genesis, and prognosisof HCC. Methods: The expression of Axin protein was evaluated in paraffin embedded tissues by immunohistochemical tech

4、niques (SABC) in 40 case of HCC, 21cases of paracarcinomatous tissue and 14 cases of normal liver tissue.And 5 case of normal stomach tissue and 5 cases of gastric carcinoma tissue were evaluated as a positive control. Results: The expression of Axin protein was observed in HCC tissues, paracarcinom

5、atous tissues and normal liver tissues. The positive expressions of Axin were 57.5%、90.5%、92.9% respectively. The brown granules of positive cell were mainly distributed in the cytoplasm. No significant difference in the expression of Axin was found between normal liver tissues and paracarcinomatous

6、 tissue(P>0.05), but not between the paracarcinomatous tissue and HCC(P<0.05). Axin protein expression were not related to age, sex, tumor size and the expression of AFP, but were significantly correlated with portal vein invasion and clinical pathological stage. In normal stomach tiss

7、ue, the expression of Axin is strong in the stem cells and weak in the mature cells. But its expression in normal liver tissue is well-proportioned. Conclusion： Axin expresses mainly in the stem-cells, and its expression is important to sustain the function of the stem-cell; Hepatitis B and liver ci

8、rrhosis have no influence to the expression of Axin;The reduced expression of Axin correlates with the genesis of HCC;The check of its expression can be used as an independently index to evaluate the biological behavior and prognosis of HCC.【KEY WORDS】 Carcinoma, hepatocellular·Axin·Immuno

9、histochemistry肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上10種最常見癌癥之一，同時也是人類最致命的惡性腫瘤之一，盡管近年來在HCC的診斷和治療方面都取得了很大進步，但其5年生存率仍然比較低。作為Wnt信號傳導(dǎo)途徑的抑制性因子，Axin被認為是一個抑癌基因。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤的發(fā)生與Axin基因異常表達有密切關(guān)系1-5，但蛋白水平表達的異常與HCC的發(fā)生及其臨床病理特征關(guān)系方面的研究至今未見報道。本研究旨在進一步明確HCC發(fā)生、發(fā)展的分子機制，進而為HCC患者的臨床治療及預(yù)后判斷提供指導(dǎo)。1資料與方法1.1一般資料選取四川大學(xué)華西醫(yī)院2004年8月2

10、005年2月手術(shù)切除的HCC標本40例，其中男35例，女5例，年齡1570歲，平均年齡48.4歲。所有患者術(shù)前均未使用放療或/和化療。癌旁組織取自腫瘤邊緣23 cm外肝組織。另外14例正常肝組織標本取自華西醫(yī)科大學(xué)傳染科實驗室。1.2方法所有組織10%中性甲醛固定，石蠟包埋。采用SABC免疫組織化學(xué)方法。兔抗人Axin(H-98)多克隆抗體為美國Santa Cruz Biotechnology公司生產(chǎn)，山羊抗兔SABC免疫組織化學(xué)試劑盒(SA1022)購自武漢博士德生物工程有限公司。切片常規(guī)脫蠟、水化后，采用微波爐進行抗原修復(fù)，嚴格按照試劑盒說明書操作，DAB顯色。采用正常胃黏膜組織作為陽性對

11、照，PBS液代替一抗作為陰性對照。1.3結(jié)果評判Axin染色陽性信號為棕黃色，定位于細胞質(zhì)內(nèi)，背景清晰，間質(zhì)無著色。根據(jù)細胞染色強度和染色細胞所占面積積分之和進行判定。染色強度積分：無染色為0分;輕度染色為1分;中度染色為2分;強染色為3分。染色面積積分：無細胞染色為0分，細胞染色<25%為1分;細胞染色25%50%為2分;細胞染色>50%為3分。兩項積分之和2為表達陽性，<2為表達陰性。1.4統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0軟件進行分析，組間比較采用2檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1Axin蛋白在正常肝組織、癌組織和癌旁組織細胞中的表達

12、情況免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示Axin蛋白主要分布在肝細胞胞質(zhì)中，分布較均勻。Axin蛋白在正常肝組織中表達比較強;在HCC旁組織細胞(乙型肝炎、肝硬化者)中的表達稍弱;在正常胃黏膜(陽性對照)的基底部細胞中表達較強，而在其表面細胞中表達很弱，黏膜肌層細胞中則無表達(圖1)。Axin蛋白在癌組織中的陽性表達率明顯低于正常肝組織和癌旁組織，癌組織與癌旁組織中Axin蛋白陽性表達率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。2.2Axin蛋白的表達與HCC臨床病理因素的關(guān)系A(chǔ)xin蛋白的表達異常與HCC的門靜脈癌栓形成、臨床TNM分期相關(guān)，而與患者的性別、年齡、腫瘤大小、包膜形成、AFP表達水平等無關(guān)(表2)。3討論大

13、量研究發(fā)現(xiàn)Axin蛋白不僅對Wnt信號途徑具有一定的抑制作用6，而且對JNK信號傳導(dǎo)途徑及p53蛋白有一定的激活作用7-8，還參與細胞凋亡的調(diào)節(jié)8，這提示Axin蛋白的異常表達可能與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。以前的研究結(jié)果顯示，Axin基因突變可以導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生1-5，野生型Axin基因可導(dǎo)致多種腫瘤細胞的凋亡2，進一步表明Axin蛋白的表達異常可能與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。資料表明Axin蛋白的表達異常與某些腫瘤的臨床病理學(xué)特征有一定的相關(guān)性5。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測正常肝組織、HCC組織和癌旁組織肝細胞中Axin蛋白的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Axin蛋白在癌組織的陽性表達率明顯低于正常肝組織和癌旁組

14、織，提示Axin蛋白表達異常與HCC發(fā)生有關(guān)，由此推測各種致癌因素可能通過下調(diào)Axin基因的蛋白表達導(dǎo)致腫瘤細胞的過度增殖和/或凋亡減少。本研究還發(fā)現(xiàn)正常肝組織與癌旁組織(存在乙型肝炎病毒感染及肝硬化者)的陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而乙型肝炎病毒感染及肝硬化者都是HCC的主要誘因，進一步說明Axin蛋白表達減少可能是導(dǎo)致HCC發(fā)生的重要途徑之一，同時也提示Axin蛋白表達量的改變可以作為HCC診斷的一個指標。本研究結(jié)果顯示，Axin基因表達異常與HCC的門靜脈癌栓形成以及臨床TNM分期有關(guān)，但是其表達水平與患者的性別、年齡、乙型肝炎肝硬化、腫瘤大小、AFP表達水平及是否存在包膜等無關(guān)，提示A

15、xin蛋白可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。推測Axin蛋白表達下調(diào)可以促進HCC的轉(zhuǎn)移，從而影響患者預(yù)后，具體機制有待于進一步深入研究。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)Axin蛋白在正常胃黏膜的基底部細胞中表達較強，而在其表面細胞中表達很弱，黏膜肌層細胞中則無表達，提示Axin蛋白主要在具有一定分化、增生能力的干細胞中表達。已有研究表明Axin蛋白的表達對維持干細胞的穩(wěn)定具有重要的意義，其過度表達可以促進干細胞的凋亡9，而表達減弱則可以誘導(dǎo)干細胞的過度增殖10。由此推測，Axin蛋白表達下調(diào)很可能與HCC的發(fā)生密切相關(guān)。Axin蛋白的穩(wěn)定表達對維持細胞的狀態(tài)具有重要的意義，其表達異常可能是參與HCC發(fā)生的重要因素，其

16、表達下調(diào)促進HCC的轉(zhuǎn)移，影響患者預(yù)后。Axin蛋白表達與HCC的轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)，為臨床診斷和判斷HCC患者的預(yù)后增加了新的依據(jù)。【參考文獻】 1 Webster MT, Rozycka M, Sara E,et al. Sequence variants of the axin gene in breast, colon, and other cancers: an analysis of mutations that interfere with GSK3 bindingJ.Genes Chromosomes Cancer,2000 ,28(4):443-453.2 Satoh S,

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