1、食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗（三） 5.5.1 抗原的預備 普通采納1.2%1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集實驗用的抗原。o血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的(如2%3%)培養(yǎng)基上再檢查；假如是因為vi抗原的存在而阻擋了o凝集反應時，可挑取菌苔于1ml生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。h抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.55%0.65%半固體瓊脂平板的中心，俟菌落擴散生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3%0.4%半固體瓊脂的小玻管1次2次，自遠端取菌培養(yǎng)后再檢查。 5.5.2 多價菌體抗原(0)鑒定 在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測

2、菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體(o)抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對比。再用無菌的接種環(huán)或針分離將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min,并對著黑暗背景舉行觀看，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應。 5.5.3多價鞭毛抗原(h)鑒定 同5.5.2。 5.5.4 血清學分型(選做項目) 5.5.4.1 0抗原的鑒定用af多價o血清做玻片凝集實驗，同時用生理鹽水做對比。在生理鹽水中自凝者為粗糙形菌株，不能分型。被af多價o血清凝集者，依次用o4；o3、o10；o7；o8；o9；o2和o11因子血清做凝集實驗。按照實驗結果，判定o群

3、。被o3、o10血清凝集的菌株，再用o10、o15、o34、o19單因子血清做凝集實驗，判定e1、e2、e3、e4各亞群，每一個o抗原成分的最后確定均應按照o單因子血清的檢查結果，沒有o單因子血清的要用兩個o復合因子血清舉行核對。 不被af多價o血清凝集者，先用9種多價o血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的o群血清逐一檢查，以確定o群。每種多價o血清所包括的o因子如下： 5.5.4.2 h抗原的鑒定 屬于af各o群的常見菌型，依次用表6所述h因子血清檢查第1相和第2相的h抗原。 表6 af群常見菌型h抗原表 不頻繁的菌型，先用8種多價h血清檢查，如有其中一種或兩種血清凝集，則再

4、用這一種或兩種血清所包括的各種h因子血清逐一檢查，以第1相和第2項的h抗原。8種多價h血清所包括的h因子如下： 每一個h抗原成分的最后確定均應按照h單因子血清的檢查結果，沒有h單因子血清的要用兩個h復合因子血清舉行核對。 檢出第1相h抗原而未檢出第2相h抗原的或檢出第2相h抗原而未檢出第1相h抗原的,可在瓊脂斜面上移種12代后再檢查。如仍只檢出一個相的h抗原，要用位相變異的辦法檢查其另一個相。單相菌不必做位相變異檢查。 位相變異實驗辦法如下： 小玻管法：將半固體管(每管1ml2ml)在酒精燈上融化并冷至50,取已知相的h因子血清0.05ml0.1ml,加入于融化的半固體內(nèi)，混勻后，用毛細吸管吸

5、取分裝于供位相變異實驗的小玻管內(nèi)，俟凝固后，用接種針挑取待檢菌，接種于一端。將小玻管平放在平皿內(nèi)，并在其旁放一團濕棉花，以防瓊脂中水分蒸發(fā)而干縮，天天檢査結果，待另一相細菌解離后，可以從另一端挑取細菌舉行檢查。培養(yǎng)基內(nèi)血清的濃度應有適當?shù)谋壤^高時細菌不能生長，過低時同一相細菌的動力不能抑制。普通按原血清1:2001:800的量加入。 小倒管法：將兩端開口的小玻管(下端開口要留一個缺口，不要平齊)放在半固體管內(nèi),小玻管的上端應高出于培養(yǎng)基的表面，滅菌后備用。臨用時在酒精燈上加熱融化，冷至50,挑取因子血清1環(huán)，加入小套管中的半固體內(nèi)，略加攪動，使其混勻，俟凝固后，將待檢菌株接種于小套管中的半固體表層內(nèi)，天天檢查結果，待另一相細菌解離后，可從套管外的半固體表面取菌檢查，或轉種1%軟瓊脂斜面，于37培養(yǎng)后再做凝集實驗。 簡易平板法：將0.35%0.4%半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取因子血清1環(huán)，滴在半固體平板表面，放置片刻，待血清汲取到瓊脂內(nèi)，在血清部位的中心點種待檢菌株，培養(yǎng)后，在形成擴散生長的菌苔邊緣取菌檢查。 5.5.4.3 vi抗原的鑒定用vi因子血清檢查。已知具有vi抗原的菌型有：，,。 5.5.4.4 菌型的判定按