1、目 錄 摘 要 第3頁(yè)1. 前 言 第4頁(yè)2. 材料與方法 第6頁(yè)3. 結(jié) 果 第11頁(yè)4. 討 論 第15頁(yè)參考文獻(xiàn) 第17頁(yè)致 謝 第19頁(yè)MAF-1基因的時(shí)空差異表達(dá)研究學(xué)生：伍鳳 導(dǎo)師：付萍講師【摘要】 家蠅體內(nèi)豐富的抗細(xì)菌肽、抗真菌肽等是其免疫防御機(jī)制中不可或缺的部分。家蠅抗真菌肽-1（Musca domestica antifungal peptide-1,MAF-1）是從家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中所提取的，并采用固相萃取結(jié)合反相高效液相色譜(RP-HPLC)的方法分離到的一種新發(fā)現(xiàn)的抗真菌肽。為了進(jìn)一步研究該基因在家蠅幼蟲(chóng)各個(gè)部位以及各個(gè)齡期的表達(dá)是否存在著差異，我們采用了Real Tim

2、e-PCR技術(shù)研究了該基因在不同的發(fā)育時(shí)期(卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)以及雌雄)和幼蟲(chóng)不同的部位(脂肪體、腸道、體壁、唾液腺)的表達(dá)量，結(jié)果顯示MAF-1基因在所選的不同時(shí)期個(gè)部位都有所表達(dá)。其中幼蟲(chóng)期間的表達(dá)量比較高，而不同部位中，唾液腺、脂肪體表達(dá)量較高。而且，在整個(gè)家蠅的生長(zhǎng)發(fā)育階段，MAF-1基因的表達(dá)量是呈現(xiàn)下降趨勢(shì)的。進(jìn)一步肯定了抗菌肽在家蠅的免疫防御體系和生長(zhǎng)發(fā)育期間，尤其是幼蟲(chóng)期間發(fā)揮著重要作用。為其下一步更深入探索其免疫機(jī)制的研究，豐富對(duì)昆蟲(chóng)天然免疫的認(rèn)識(shí)及新一代抗真菌生物制劑的研制奠定了理論基礎(chǔ)。【關(guān)鍵詞】家蠅 抗菌肽MAF-1 Real Time-PCR

3、時(shí)空表達(dá)Abstract Inside the house antimycobacterial peptides, rich of antifungal peptide immune defenses such is the indispensable part. Domestica antifungal Musca domestica peptide - 1 (Musca domestica antifungal peptide-1, MAF - 1) domestica larva in from blood lymph extracting, and by solid-phase ext

4、raction combined with reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) method of RP - a new separation to discovery of antifungal peptides. In order to further study the gene domestica larva each place and all periods of expression whether there is any difference between, we use the Real

5、 Time-PCR technology research the genes in the different developmental stages (eggs, larvae, 2 age 1 year, 3rd instar larvae grubs and pupa, adult and male and female) and different parts (fat body, the intestinal tract, the body wall, salivary gland) expression and Results showed that in re-ligion

6、MAF - 1 genes in different periods of a site have expressed. The expression of larvae quantity taller during, and different parts of salivary glands, fat body, express high. And, in the whole growth stage, the domestica MAF - 1 gene expression of the quantity is the downward trend. Further affirmed

7、domestica antibacterial peptides in the immune defense system and growth plays an important role. For its next more in-depth study of exploring the immune mechanism of insects, rich natural immune awareness and a new generation of antifungal biological preparation research laid a theoretical foundat

8、ion. Keywards：Musca domestica antifungal peptide AF-1 RT-PCR Temporal and spatial expression 前言 昆蟲(chóng)是世界上最大的生物種群。為適應(yīng)各種不同的生態(tài)環(huán)境，它們形成了獨(dú)特的免疫系統(tǒng)，即缺乏B、T淋巴系統(tǒng)，不能產(chǎn)生免疫球蛋白和補(bǔ)體。昆蟲(chóng)特別是蠅類能夠有效的抵御病原微生物的入侵, 而本身不受感染. 天然免疫是它們對(duì)抗各種微生物入侵的一線防御系統(tǒng), 這和哺乳動(dòng)物有一定的相似性, 這說(shuō)明了它們之間有一定的進(jìn)化關(guān)系1,2.近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)昆蟲(chóng)體內(nèi)許多活性物質(zhì)，具有高等動(dòng)物免疫分子類似的功能，如抗菌肽便是典型的代表。白

9、1974年Boman等首次從惜古比天蠶蛹誘導(dǎo)分離純化出第一種天然抗菌肽天蠶素(cecropin)以來(lái)，昆蟲(chóng)抗菌肽逐漸成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。目前研究表明, 以cecropins, attacins, drosomicins 等抗菌肽產(chǎn)物為基礎(chǔ)的天然免疫是昆蟲(chóng)抵御病原體和寄生蟲(chóng)的重要防線.近年來(lái), 人們也開(kāi)始在蠅類中探索免疫系統(tǒng)的起源和進(jìn)化, 為研究昆蟲(chóng)天然免疫和人類的天然免疫的相關(guān)性提供證據(jù).。家蠅(Musca domestica)屬昆蟲(chóng)綱、雙翅目、環(huán)裂亞目、家蠅科，是我國(guó)大部分地區(qū)最常見(jiàn)、數(shù)量最多的一種媒介昆蟲(chóng)。在自然界中，家蠅是傳播疾病的重要媒介害蟲(chóng)，它能給人、畜傳染多種疾病，但自身并

10、不染病，即使在高密度人工飼養(yǎng)的條件下也不會(huì)發(fā)生大規(guī)模傳染病而死亡。家蠅對(duì)惡劣環(huán)境具有極強(qiáng)的適應(yīng)能力和獨(dú)特的免疫防御機(jī)制(王繼恒等，2000)，預(yù)示家蠅體內(nèi)含有豐富的抗菌物質(zhì)。目前，家蠅的高效抗病能力的研究受到了廣泛的關(guān)注(崔曉江，劉枝俏，1995；Okada，Natori，1984；孫剛等，1995；賴凡等，1999)。家蠅體內(nèi)外具有多種抗菌物質(zhì)是其在雜菌橫生的環(huán)境中得以生存的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)家蠅抗菌活性物質(zhì)的進(jìn)一步研究具有十分重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。有關(guān)學(xué)者已在地中海實(shí)蠅Ceratitiscapitata、4果蠅Drosophilam elanogaster5和廄赦蠅Stonxoxyspo

11、 regrinn6中分離到具有不同生物活性的抗菌膚。在棕尾別麻蠅Sarcophagaperegrina和伏蠅Phormia terranova。體內(nèi)分離到了sarcotoxinI 7.8.9和diptericin等 具有抗菌活性的蛋白。而在家蠅血淋巴中既分離到了分子量較小的生物活性膚/蛋白，又分離到分子量較大的凝集素溶菌酶等多種抗菌膚。這些抗菌膚抗細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)，更引人注目的是它們還能殺傷多種腫瘤癌細(xì)胞和病毒，而對(duì)正常的體細(xì)胞無(wú)毒副作用。抗革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，如金黃色葡萄球菌、白葡萄球菌、綠膿假單胞菌、大腸桿菌等。還抗植物細(xì)菌性病害如水稻白葉枯病菌，大白菜軟腐病菌和引起人類疾病的痢

12、疾桿菌、肺炎桿菌。對(duì)一些真菌如白念珠菌和白僵菌也有很好的生物活性，也對(duì)令人畏懼的腫瘤癌細(xì)胞有活性。邱曉燕等分離到分子量為4 kDa和9.6 kDa的抗菌膚，較低濃度下能有效抑制人胃癌細(xì)胞MGC80-3和BGC-823、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7以及人肺癌細(xì)胞SPC-A-1的體外增殖。11還抑制病毒侵染和繁殖，陳艷等用蠅蛆組織勻漿液處理流感病毒表現(xiàn)出非常好的防效。12這些抗菌膚活性濃度在ug/mL級(jí)，其抑菌效果與傳統(tǒng)抗生素相當(dāng)甚至超過(guò)之。有報(bào)道表明蒼蠅抗菌膚的抗菌活性超過(guò)了青霉素13，與目前廣泛使用的抗生素及農(nóng)用殺菌劑不產(chǎn)生交互抗性，不誘導(dǎo)病原菌產(chǎn)生抗性突變，因此有望開(kāi)發(fā)成為新一代優(yōu)秀抗癌、抗病毒或

13、抗病菌藥物。M 家蠅抗真菌肽-1（Musca domestica antifungal peptide-1,MAF-1）是從家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中所提取的，并采用固相萃取結(jié)合反相高效液相色譜(RP-HPLC)的方法分離到的一種新發(fā)現(xiàn)的酸性抗真菌肽。在家蠅防御體系中發(fā)揮著重要作用。那么，究竟此抗真菌肽是如何發(fā)揮免疫作用，乃至此抗真菌肽在整個(gè)免疫系統(tǒng)中是如何表達(dá)。換言之，是否此抗真菌肽在家蠅從卵到成蟲(chóng)的各個(gè)齡期都有所表達(dá)。是否存在雌雄的表達(dá)差異。是否于幼蟲(chóng)的各個(gè)部位都有所表達(dá)，即是否存在著組織分布的特異性。這一系列的問(wèn)題，都有待著我們進(jìn)行深入的研究。于是，本文采用了Real Time-PCR技術(shù)對(duì)該基因

14、在不同的發(fā)育時(shí)期(卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)以及雌雄)和幼蟲(chóng)不同的部位(脂肪體、腸道、體壁、唾液腺)的表達(dá)情況進(jìn)行研究分析。材料與方法1.材料1.1 實(shí)驗(yàn)蠅株來(lái)源 實(shí)驗(yàn)室蟲(chóng)室常規(guī)養(yǎng)殖。溫度（25）相對(duì)濕度（80%）光照（12H/D）1.2 MAF-1序列來(lái)源 前期從家蠅幼蟲(chóng)分離到的MAF-1蛋白的N端序列，通過(guò)RACE技術(shù)獲得了MAF-1的部分cDNA序列，已登錄到GenBank，獲得登錄號(hào)，登錄號(hào)HM178948。1.3 主要生物信息學(xué)分析網(wǎng)站，軟件和引物設(shè)計(jì)軟件 家生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站（National center for biotechnology informatio

15、n,NCBI）；瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)網(wǎng)站（Expert protein analysis system,EXPASY）； DNAMAN軟件；PRIMER PREMIER 5.0; Oligo 6.01.4 主要試劑、試劑盒逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（ABI公司）；PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser；SYBR Premix Ex TaqTM ；限制性內(nèi)切酶（以上均為大連寶生物公司）；Trizol試劑；質(zhì)粒提取試劑盒；無(wú)RNasc的DNase ；Taq DNA聚合酶；PCR引物；DNA Marker；1.5 主要溶液01DEPC水：lmlDE

16、PC加入1L三蒸水中，振蕩過(guò)夜后15psi高壓滅菌。Hepes saline 0.15mol/l NaCl,10mmol/l hepes,調(diào)節(jié)PH=7.0 。20umol/l腺苷HS液 1.336mg 腺苷溶于250ul HS5xTBE電泳緩沖液 tiis堿54g、硼酸27.5g、0.5mol/l EDTA(ph8.0)加三蒸水至900ml,充分溶解，定容1000ml.使用時(shí)，稀釋10倍至0.5 X TBE1.6 主要實(shí)驗(yàn)儀器 ABI 7300 Real-TimePCR system PCR擴(kuò)增儀（德國(guó) Eppengorf公司）；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司）；顯微解剖鏡（尼康）；穩(wěn)壓穩(wěn)流

17、電泳儀（美國(guó)GE公司）；紫外分光光度計(jì)（美國(guó)GE公司）；5415型冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppengorf公司）；PB203-E型電子精密天平（上海梅特勒托利多儀器公司）；微量加量器（10ul 20ul 100ul 1000ul德國(guó) Eppengorf公司） 2. 方法2.1 總RNA的提取 1）于顯微鏡下，解剖家蠅三齡幼蟲(chóng)，提取其體壁、腸道、脂肪體、唾液腺，另取家蠅不同的發(fā)育時(shí)期(卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)以及雌雄)組織約30ug，分裝于EP管中。采用TRIZOL試劑提取總RNA。 2)提取物浸于1000ul Trizol 中；震蕩混勻，避光，反復(fù)凍融3次；3)加400ul Tri

18、zol,室溫放置5分鐘，加入100ul氯仿，漩渦震搖15s，靜置5min，4，12000rpm離心15min。4)仔細(xì)吸取上層水相，移至另一新的離心管仲，加等體積異丙醇，上下顛倒混勻。5)室溫放置10min，然后于4，12000rpm離心20min沉淀RNA，棄去上清。6)加入lml 75乙醇，輕輕震搖，充分洗滌RNA沉淀，4，12000rpm離心7500g，5分鐘，棄上清，除去乙醇。7)室溫干燥RNA，重溶RNA于100ul RNase-free水中，65水浴10min以助溶。2.2 瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA的完整性 對(duì)消化后的RNA樣品用瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，檢測(cè)RNA分子的完整性。 l)

19、用0.5 X TBE 100ml溶解1g瓊脂糖。配置1%瓊脂糖凝膠，微波爐加熱至完全融化后，室溫冷卻至60度左右，加入 5ul EB，混勻，倒入插好梳齒的制膠槽中冷卻制膠。2)將制好的膠塊浸沒(méi)于裝有0.5 X TBE 電泳緩沖液的電泳槽中。3)取1ul RNA樣品，加入1ul 10 X loading buffer 混勻后上樣。4)100V電壓下電泳。5)電泳結(jié)束后，紫外燈下觀察，鑒定RNA分子的完整性。 2.3 總RNA定量 用98ul Milli-Q水將 2ul RNA 原液稀釋50倍后，利用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定其在 260nm 和 280nm 波長(zhǎng)處的吸光度（OD260 和 OD 28

20、0）通過(guò)下述公式計(jì)算RNA的濃度。同時(shí)，計(jì)算OD260 和OD280 的比值（OD260/OD280），當(dāng)兩者的比值在1.82.2時(shí)，說(shuō)明提取的RNA純度高，無(wú)蛋白質(zhì)和DNA的殘余。 2.4 總RNA去除DNA基因組 1)在微量離心管中分別加入下列成分試劑使用量5 X gDNA Raser Buffer2ulgDNA Eraser1ulTotal RNA1ugRNase Free DH2OUp to 10ul 2)42反應(yīng)2分鐘2.5 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA1) 向PCR小管中分別加入下列成分試劑使用量5 X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)4ul Prime

21、Script RT Enzyme Mix 11ulRT Primer Mix 1ul2.4的反應(yīng)液10ulRNase Free dH20Up to 20ul2) 37 15 min3) 85 5 sec4) -20 保存。2.6 設(shè)計(jì)引物利用Primer premier 5.0 和 Oligo 6.0 軟件設(shè)計(jì)引物。引物由TAKARA公司合成。MAF-1 Forward: 5'-TGCTGTCTTCAGTGCCATCC-3' Reverse: 5'-CCCTCAATCCAGACCTTCAT-3' GAPDH Forward: 5'-CATCATCTCCG

22、CTCCATC-3' Reverse: 5'-AAGCCATACCAGTGAGTTTACC-3'2.7 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析MAF-1基因的時(shí)空表達(dá)差異樣品為家蠅卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)（雌、雄)和家蠅幼蟲(chóng)脂肪體、腸道、體壁、唾液腺所提取的總RNA所反轉(zhuǎn)錄的模板cDNA。熒光定量PCR反應(yīng)體系如下試劑使用量終濃度SYBR Premix Ex TapTM(2x)25ul1xPCR Forward Primer (10uM)2ul0.4uMPCR Reverse Primer (10uM)2ul0.4uMROX Reference Dye(50x)

23、01ul1x模板（cDNA）溶液10uldH2O10ulTotal50ul使用ABI 7300熒光定量PCR儀：95 30秒。95 5 秒、60 34秒：40 cycles.每個(gè)模板設(shè)立3個(gè)復(fù)孔，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，獨(dú)立重復(fù)3次。 3.0 結(jié)果 3.1 MAF-1 總RNA的提取分別對(duì)家蠅的卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)（雌、雄)和脂肪體、腸道、體壁、唾液腺的總RNA進(jìn)行提取的11個(gè)樣品的RNA瓊脂糖凝膠電泳圖（圖3.1）結(jié)果顯示可見(jiàn)清晰的28S和18S兩條帶，表明RNA完整性較好，無(wú)降解。經(jīng)分光光度計(jì)檢測(cè)，其OD260 OD280比值均在2.0左右，介于1.82.2之間，說(shuō)明RNA的純

24、度較高。3.2 熔解曲線分析在PCR擴(kuò)增后進(jìn)行熔解曲線分析，結(jié)果見(jiàn)下圖。從熔解曲線看出， 目標(biāo)基因和參照基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別在84和88達(dá)到峰值， 無(wú)非特異產(chǎn)物和引物二聚體， 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程沒(méi)有污染，目標(biāo)基因和參照基因表達(dá)穩(wěn)定。MAF-1基因熔解曲線圖：GAPDH基因熔解曲線圖：3.3 MAF-1基因在各個(gè)時(shí)期和不同部位的表達(dá)差異3.2.1 MAF-1基因在家蠅不同時(shí)期的表達(dá)差異，以卵為參照組，結(jié)果如下表。 樣品 GAPDH基因Ct值均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 樣品基因Ct值均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 Ct Ct 2-Ct 卵17.129±0.49424.475±0.190 7.

25、346 0 11齡幼蟲(chóng) 18.006±0.57918.049±1.9290.043-7.303157.915 2齡幼蟲(chóng)18.257±0.907 19.007±0.831 0.750 -6.596 96.737 3齡幼蟲(chóng)18.742±0.76124.275±0.7655.533-1.8133.514蛹18.659±0.65727.437±0.2858.7781.4320.371雄蠅17.483±0.72325.851±0.7428.3681.0220.492雌蠅 18.375±0.941

26、28.310±1.8569.9352.5890.166將相對(duì)表達(dá)值轉(zhuǎn)化為以lO為底的對(duì)數(shù)，在Excel中作圖，得到MAF-1基因在家蠅從卵到成蟲(chóng)的各個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段中的表達(dá)對(duì)比。如下圖3.2.2 MAF-1基因在家蠅幼蟲(chóng)各個(gè)部位的表達(dá)差異，以體壁為參照組，結(jié)果如下表。 樣品 GAPDH基因Ct值均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 樣品基因Ct值均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 Ct Ct 2-Ct 體壁19.358±0.465 24.214±0.877 4.896 0 1 唾液腺19.622±0.473 20.933±0.991 1.311 -3.585 12.001

27、 脂肪體19.690±0.30121.198±0.2011.508 -3.388 10.469 腸道 21.133±0.562 25.873±1.5214.740-0.1561.114將相對(duì)表達(dá)值轉(zhuǎn)化為以lO為底的對(duì)數(shù)，在Excel中作圖，得到MAF-1基因在家蠅幼蟲(chóng)各個(gè)部位的表達(dá)對(duì)比。如下圖4.0結(jié)論與討論基因表達(dá)是調(diào)控生命活動(dòng)的重要機(jī)制, 不同發(fā)育階段、不同生理狀態(tài)下基因的表達(dá)決定了整個(gè)生命過(guò)程, 包括發(fā)育和分化、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、對(duì)逆環(huán)境的反應(yīng)等, 因此比較不同發(fā)育階段的基因表達(dá)可為分析生命活動(dòng)過(guò)程提供重要信息。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)常常用于對(duì)基因

28、mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行分析，結(jié)果非常可靠，具有可比性和重復(fù)性。本文通過(guò)半定量RT-PCR技術(shù)，研究了家蠅抗真菌肽-1（Musca domestica antifungal peptide-1,MAF-1）在家蠅不同生長(zhǎng)發(fā)育階段（卵、1齡幼蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)、3齡幼蟲(chóng)、蛹、成蟲(chóng)以及雌雄)和幼蟲(chóng)不同的部位(脂肪體、腸道、體壁、唾液腺)的表達(dá)情況，結(jié)果顯示MAF-1基因在所選的不同時(shí)期各部位都有所表達(dá)。其中幼蟲(chóng)期間的表達(dá)量比較高，而不同部位中，唾液腺、脂肪體表達(dá)量較高。而且，在整個(gè)家蠅的生長(zhǎng)發(fā)育階段，MAF-1基因的表達(dá)量是呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)的。這一系列結(jié)果其原因可能是：抗菌肽基因在家蠅卵期缺乏轉(zhuǎn)錄活性其表達(dá)

29、的可能為母源性轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。所檢測(cè)到的可能是母體的遺留，故呈低水平表達(dá)整個(gè)家蠅幼蟲(chóng)期抗菌肽基因表達(dá)呈下降趨勢(shì)，在1齡幼蟲(chóng)期達(dá)到最大轉(zhuǎn)錄活性可能是隨著幼蟲(chóng)的不斷發(fā)育其免疫防御機(jī)制逐漸完善同時(shí)也表明抗菌肽在家蠅幼蟲(chóng)發(fā)育中具有重要的作用；完全變態(tài)的昆蟲(chóng)在蛹期對(duì)外界具有較強(qiáng)抵抗力。而家蠅蛹期抗菌肽基因表達(dá)呈低水平。蛹期的發(fā)育前期齡幼蟲(chóng)期與蛹期的發(fā)育后期成蟲(chóng)期表達(dá)均明顯趨高，說(shuō)明家蠅蛹期抗菌肽轉(zhuǎn)錄途徑較復(fù)雜同時(shí)也說(shuō)明在家蠅免疫體系中抗菌肽可能不是惟一的防御免疫分子，同時(shí)也表明抗菌肽在家蠅幼蟲(chóng)發(fā)育中具有重要的作用;家蠅成蟲(chóng)期抗菌肽表達(dá)量降低。大概因?yàn)榇似诩蚁壝庖呦到y(tǒng)發(fā)育成熟所致，另一方面也是家蠅成蟲(chóng)期活動(dòng)范圍

30、增大，受外界刺激的幾率大大增加機(jī)體自身免疫系統(tǒng)適應(yīng)進(jìn)化的結(jié)果。這也是昆蟲(chóng)適應(yīng)防御微生物入侵的主要方式。唾液腺、脂肪體的高表達(dá)量可能與抗菌肽合成分泌有關(guān)。本文采用實(shí)時(shí)定量PCR 的方法, 研究抗菌肽MAF-1為基因在家蠅不同發(fā)育期及家蠅幼蟲(chóng)不同部位的表達(dá)情況。所呈現(xiàn)的研究數(shù)據(jù)進(jìn)一步肯定了抗菌肽在家蠅的免疫防御體系和尤其是幼蟲(chóng)期間的生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮著重要作用。參考文獻(xiàn)1. GraczykT .K .，KnightR .，GilmanR .H .，GranfieldM .R .Mic ro bes I nfec.,2001,3:231一235.2. Sukontason K.，BunchooM .，K

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