1、淺析兒童三種肺炎支原體檢測法的臨床應用【摘要】 目的 探討肺炎支原體（ MP）咽拭子快速液體培養法、咽拭子聚合酶鏈反應（ PCR）法和血清 MP被動凝集法（ MP-Ab）等方法在兒童 MP感染診斷治療過程中的敏感性。 方法 采用 3 種 MP檢測法對 362 例臨床擬診為呼吸道 （非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究， 每個患兒取咽拭子做快速培養和 PCR，同時取血清做 MP-Ab檢測，對 3 種方法的檢測結果與臨床診斷治療病例進行回顧性分析。結果 回顧臨床病例診斷 MP感染患兒 152 例。 MP快速培養法檢出陽性 78 例，陽性率為 %，病程為（±）天； PCR法檢

2、測出陽性 103 例，陽性率為 %，病程為（±）天；MP-Ab法檢測出陽性 127 例，陽性率 %，病程（±）天。結論 3 種 MP檢測法的敏感性與病程有相關性，臨床醫生應根據患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。【關鍵詞】 肺炎支原體；快速培養法；咽拭子聚合酶鏈反應；血清抗體；配對研究肺炎支原體（ mycoplasmapneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急性呼吸道感染的主要病原體之一，臨床上大多數表現為呼吸道感染綜合征，其中約3%10%可發展為支原體肺炎。 但只根據臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。

3、筆者采用3種MP檢測法對 362 例臨床擬診為呼吸道 （非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法， 以協助臨床準確做出診治。1 材料與方法對象 收集湖南省兒童醫院檢驗科20XX年 1 月 1 日 9 月 30 日在呼吸免疫科就診住院患兒，有呼吸道感染癥狀，已經初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象，其中男175 例，女 187 例；年齡為 2 個月 12 歲，病程為 190 天。方法 具體方法有：（1）用 MP快速培養法、 PCR法和 MP-Ab法等 3 種MP檢測法對 362 例研究對象同時進行檢測，記錄結果。 （ 2）通過研

4、究對象病歷回顧統計 MP感染的例數，并按年齡、病程和 3 種 MP檢測法結果進行統計學分析。臨床診斷 MP感染的診斷標準按文獻 1、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷即患兒經紅霉素治療有效，經青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實驗室檢查3 種檢測法至少有一種陽性。 病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。MP 快速培養法支原體分離鑒別培養液由珠海市浪峰生物技術有限公司提供。清晨患兒未洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說明書進行， 將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預溫的培養基中，37 培養；培養基液體顏色由紫紅色變為草綠色或嫩綠色且清

5、亮，并且在靜置時， 瓶底有藍色顆粒或物質沉淀為陽性， 5 天后培養基顏色不變或無藍色顆粒或物質沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供。應用PCR法檢測 MP-DNA，嚴格按試劑盒說明書進行，以在紫外燈下出現180 bp 擴增帶結果判為陽性。每次試驗均設陽性、陰性對照（陽性對照為MP質粒，陰性對照為無菌生理鹽水） ，由專人進行操作，質量控制。 MP-Ab法：試劑為日本瑞必歐株式會社MP-Ab檢測試劑SERODIAMYCO-凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結果以 140 判斷為陽性。每次試驗均設未致敏明膠顆粒、

6、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進行測定。統計學方法 計量資料用均數±標準差（ x±s）表示，各年齡組與 3 種檢測方法結果比較用 Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用 2 檢驗； 3 種檢測方法陽性結果與病程之間的比較用 q 檢驗。2 結果陽性樣本 經過回顧性診斷，在配對研究組 362 例研究對象中有 152 例符合 MP感染的診斷標準，即有 152 例確診病例，其中肺炎 45 例，支氣管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支氣管哮喘 2 例。 MP快速培養法檢測出 78 例陽性，PCR法檢測出 103 例陽性， MP-Ab法檢測出 127 例陽性。結果分析

7、 各確診病例的年齡分布，見表 1。表 1 顯示兒童 MP感染的年齡以 3 4 歲年齡段的病例最多，為 46 例，陽性率最高，為 %，與其余年齡組段比較 P。不同病程患兒 3 種檢測法的檢測結果， 見表 2，表 2 顯示 MP快速培養法為陽性的患兒病程均值較短為 （±）天，PCR法為陽性的患兒病程均值為 （±）天， MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為（±）天。 3 組之間兩兩比較，差異有統計學意義（ P<）。表 1 不同年齡組 MP感染確診病例和 3 種檢測方法結果對比分析注： 代表與年齡組 34 歲組段比較結果表 2 不同病程患兒 3 種檢測方法陽性結果

8、對比分析注：代表三組之間的兩兩比較3討論MP感染的臨床表現常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀： （ 1）發熱呈弛張熱或不規則熱。刺激性咳嗽非膿性痰， 偶帶血絲。（ 2）可有咽痛、 頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（ 3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。 （4）WBC正常或升高。（ 5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環內酯類抗生素有效。（6）實驗室 MP檢驗有 1 項或 1 項以上陽性具備以上 2 個條件或以上者可初步診斷為 MP感染。更多時候，臨床醫生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據患兒的癥狀、體征和病史做MP感染

9、的診斷性治療，但應與肺結核相互鑒別。近年來由于診斷技術的提高，MP感染報道日漸增多，一般認為MP感染以年長兒發病較多，本文表1 資料顯示， 28 歲年齡段是發病的高峰期2。占同期呼吸免疫科住院患兒的%，比有關文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發病的 10% 20%低。說明 MP感染的發病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現愈不典型。臨床實驗室檢測 MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷 MP感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響 3。本文采用配對資料研究，對疑為 MP感染的患兒進行 3 種 MP檢測法，以探討 MP快速培養法、 PCR法和 MP-Ab 法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的

10、敏感性。提示臨床醫生根據患兒不同的病程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。MP快速培養法是利用 MP生長代謝產物使培養基液體中指示劑顏色發生改變來判斷 MP生長；標本中的其他支原體和細菌則因培養基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結果可 48 h 檢出。結果顯示，培養法陽性率為 %（ 78/152 ），低于另外兩種方法的陽性率。 可能與在檢測前患兒已經用了 MP敏感藥物有關。表 2 結果顯示， 該法陽性病例病程最短。 提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。 MP培養是診斷 MP的金標準 4。咽拭子 PCR法檢測質粒核酸， 該法快速、 敏感和特異， 通過這一技術可從

11、患兒痰中檢測 MP-DNA。由于此方法相當敏感，易受污染，故實驗室操作時應特別小心。統計結果顯示，該法的陽性率為 %（103/152 ），高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的 MP不能通過快速培養法檢出的病例。表 2 結果顯示，該法陽性病例，病程為（±）天。詳細資料顯示，有病程在30 天以上的患兒經抗 MP治療，該法仍可為陽性，說明MP的生存力相當強，要系統化治療。血清 MP-Ab法陽性率是 3 種檢測方法中最高的，為 %（127/152 ），該法是檢測患兒血清中的 MP抗體，而非直截了當檢測 MP本身，因而陽性結果并不能確診是 MP感染。對患兒狀態的綜合評估應包括對患者臨床

12、癥狀和試驗結果的嚴謹分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些MP感染的患者不產生抗體或只產生少量的抗體， 高抗體滴度的樣品要出現前帶現象。 表 2 結果顯示，該法陽性病例，病程最長，這是由于發病初期，機體中尚未產生抗體而不能被檢測出，提示發病時間較長或經過多種藥物治療過的患兒選擇此方法有較高的陽性率。此檢測法結果往往受抗體出現的時相及患兒年齡、 機體免疫系統狀況等多方面的影響。綜上所述，臨床應根據患兒的不同病程、 不同年齡以及用藥情況來選取實驗室的檢測方法，以提高MP的陽性檢測率，以更好地結合臨床癥狀進行綜合分析，從而提高小兒MP感染診斷的準確率。【參考文獻】1檀衛平 . 聚合酶鏈反應及血清學檢測在肺炎支原體感染診斷中的意義. 廣東醫學， 1996， 17（4）： 218.