1、大學生科技園地鄰苯二甲酸二異辛能對雄性小鼠主要臟器及生殖功能的影響于樂云'，王腺夏2,秦棟媛二郭 義七徐 揚，豐慈根二井長勤二美建義'(l新鄉醫學院根底醫學院2005級.河南 新鄉453003: 2新鄉醫學院三全學院2005級.河南 新鄉453003： a新 多醫學院生命科學技術系2005級，河南 新鄉453003;4.新鄉醫學院生命科學技術系教研室，河南 新多453003)摘要：目的 觀察鄰呆二印酸二異辛能(dehp)對堆性小鼠土要臟器及生殖功能的影響.方法 將56朋雄性 小依24只隨機分為4組.每級6只.對照組不做任何處理.低劑量坦皮卜注射dehp 100 mg 板'

2、;.中劑量組皮f注射 dehp300mg-kg 劑ht組皮下注射dehp500mg kg 每日1次，連續20 d,停止給藥3 d后全部頊推脫臼處死。 測定小瓦體質量、主要朋管重量、柚子活動率、粒子存活率及甜子畸形率。結果 低劑量組,中劑量狙小ix肝臟系數勺 對照組比擬差異顯著(p<0 05),高劑吊組小鼠肝臟系數與對照組比擬差異極顯著(/><0 01):低劑瞄、中劑址組、 高劑此組的精子活動率和存活率隨劑威的增加仃明顯卜降趨勢.低劑此組、中劑柄組、高劑量組蹬形數目隨劑量的增 加逐漸增多。結論 dehp能明顯引起小威肝臟及生用功能受損，關鍵訶:尊苯二甲酸二異辛能:雄性小鼠:臟器

3、:生殖功能中圖分類；: r965文獻標識碼：a文章編1004-7239(20xx)05-0505-03efrect of cir( 2-etliylhexyl) phthautc on ma h organ and reproductive hinctihi or male m reyu lc-jun1 .wangmeng-xia2 .q in l i-yuan2. et al(i. gmdc 2005. colley of basicm alii me xiktw/ix rjirn/ college, x inxujng 453003. china: 2 gnule 2005, sanqua

4、n colley xmxiang college. xinxiting 453003. china)abstract: o hjeetke 1b in*estiga(e the effect of di-(2-eihylbexyl) phthalale (dehp) on main organ and 呷mduciive liinctbn of male mice m cthods iwcnty-four male mice were ninckinly divided inm 4 gmup s. 6 mice for each giwup. contrcil gioup do nothing

5、 lov dosage group.iniddle dose gmup and high dose gmup werv injected dehp loomg kg 1,300 mg kg 1 and 500 mg kg 1 with hjpodem ic. rcjpcctiwly once mx> day for 20 days on the thinl day after stopping giving medicine, killed (he m ice wi(h ceivical disbcalbn hie weight of m ice and main oim, (he iv

6、aclivit)1 and survival ni(to of jpesiudma. die rale of tcraldjpciii ia were detected results ccmpared with contwl gioup. (here was difference of liver cocfficient in bw dose gk>up and iniddle do* gioup< p <q 05). and (here was significantly ditlerence in high dose gwup (p <0 01). the rea

7、ctivity and sur vival mtb of *pcmiar»a decreased obvbusfy when the d(isc of di-(2-cthylkxyl) phthahic increased the nun her of tcran?pcr m ia was higher when (he dose of dr(2-e(hylbcxyl) phthalate incmiwd conclusion dh1p can aiuse lhe danage of ral's livvr and rcpkxiuciivv funcibnkev words:

8、 dr(2wcthylhcxyl) phthahtc: male m ice: organ; irpductivc functbn近兒年，發現人群中精子數普遍降低，科學家們 疑心與環境中某些干擾物可能有關,提出了叫:境 內分泌干擾物的概念對于這方面的研究有 壬基附如鄰苯二甲酸二辛骼和鄰苯二甲酸二丁 函及氯乙烯等。鄰苯.甲酸:異辛酯di(2- ethyhhexyl)phthalate,dehp倔鄰苯二甲酸酯類 是一種無色黏性液體微有氣味.常用做氣相色誥固 定液、不飽和化合物及含氧化合物的增型劑。鄰苯 二甲酸酯類對動物造成的影響目前研究多通過灌胃枚 khjw：20d8-05- 14基金項h ：荷鄉

9、醫學院大學牛.科研立項資助課題<2006>作者簡介:于樂云(1986.)女舸南伊川人，新鄉醫學浣基it醫學院 本科2003竣指導老師洋憊根1963 "男.河向海鄉人.教授.碩土生導師.研 究方向：而理遺傳學. 方式進行染毒，由丁日常生活中人類大多通過皮膚 接觸本類藥品.因此木實驗采用皮下注射染毒方式 研究dehp對小副主要臟器、生死系統的發育和粘 子活動率、存活率、畸變率的影響。以驗證人們日常 使用的含有dehp的化裝品、塑料用品等是否對人 類的不孕不育有影響，同時也為今后這方面的研究 和生活川品的制備提供一些可以參考的數據。1材料與方法l 1實驗動物 錐性他康昆明種小鼠

10、24只，56 周齡.體質量(2& 0 ±2 0)go由新鄉醫學院實驗動 物中心提供。l 2實驗試劑與儀器 dehp,純度99%.上海化 學試劑公司生產；dkp81型水浴箱 慶津市泰斯特儀器）.1dl80-2b型離心機（i：海安亭科 學儀器廠）yst00型顯微鏡（chinirn ikon）。l 3實駛方法l a 1動物處理 隨機將24只小覦分為4組.每 組6只，對照組不做任何處理，低劑筮組皮卜注射 dehp 100 mg kg ',中劑量組皮下注射dehp 300mg-kg 高劑域組皮下注射dehp 500 mg kg'1，除對照組外，其他各組小鼠皮卜注射 備劑

11、量組藥物溶液或者稀釋溶劑，2日1次，連續 20 d.并且每天在相同的時間稱體質量,在停止染毒 后的第3大將小國全部頸椎脫臼處死。l3 2主要臟器的測定 將處死小鼠的肝臟，腎 臟、脾臟、翠丸、附睪立即取出，稱濕重并計算臟器系 數（m器系數=臟器濕重砌物體質胃）.l33精子懸液的制備 將稱完濕重的右側附睪 立即放入盛有5 ml 37 p生理鹽水的平皿中，用眼 科財縱向苗開79個切li,讓精了自由游出，放入 37 w溫水浴箱中30 min.川1層擦鏡紙過濾除去 附睪組織制得結子懸液。l a4精了活動率 將制備好的精子懸液取i2 滴滴于清潔的載玻片上.在（20五）笆的室溫下 用普通光學顯微鏡，在10

12、x10倍鏡下肉眼觀察每只 鼠500個精子的活動力，在10min內完成，精子活 動狀態按精子游泳狀態分為4級'乃，【級：運動活 潑.宜線游動：i級:運動欠活潑，直線運動：m :原地 旋轉；1也加忌無活動力。精子活動率（%）=（殷+1【 級+11級）梢子數目/（跋+ ii級*1呦+iw）精 了數 li xi00% °l a5精子存活率的計算精子存活率的計算參 照文獻戚。吸取0 5ml粘子懸液放入干凈試管中. 再加質量分數q 4%臺盼藍染液（1 5 ml用吸管輕輕 吹打混勻，染色2 min,然后制片，顯微鏡檢查，計數, 染為藍色的為死細胞,透明未染色的是活細胞,隨機 計數100個，

13、計葉出死活細胞的比例，重復計數1次, 以2次觀察結果的平均值作為活細胞的百分比值。l a6藉子形態學觀察精子形態學觀察方法參 照文獻|9°將稱完質量的左側附睪立巴放入盛有（n =6, x ±05 ml 37姓理鹽水的平皿中用眼科剪剪碎放入 37c水浴箱中溫育20 min,使其充分游離，然后將 精子懸液通過4層擦鏡紙過濾，除去組織塊，將濾液 以1 000 rmin '離心5 min后.棄去上清液后與沉 淀混勻，滴片（每只小制制片2張）待玻片自然f燥 后,用體積分數35%的甲醇固定5 min.再用體積分 數2%伊紅染色1 h,自來水沖去玻片上多余的染 液，晾干后高倍鏡卜

14、觀察，每片檢查精了 200個o 1.4統計學處理實驗數據以均數切；準任切 表示.組間比擬用方差分析.粘了畸形率的比擬采用 x檢驗。2結果2 1 dehp對小刷精了活動率和存活率的影響 低劑量組、中劑量組、高劑量組的精活動率和精子 存活率與對照組相比均有明顯差異（p <0.（）1）,且 精子的活動率和存活率隨劑的增加有明顯下降趨 勢,見表l表i各組小鼠精子活動率和精子存活率的比擬（n=6,7 k%）tah i comparison of reacth ity and survival rath of sp«r- matoz<ki of mtsamong each group

15、s ( n =6, x ±x. %>tlvm精子活動座.精子存活率對照組82 97 ±1. 386 39 ±1 32低劑m組4a 648552 17 ±15. 2妒中劑仙組32 24 ±j. 6146 36 ±1& 78*命補捋iix 54 y 6r1抵 79 +12 70*與 wstai 比坦別owttffft琢丸附攀對照組中劑量組q 044 53001 73q 060 84 10 009 57*q 056 24 也 007 55"q 072 32 壩 020 29bq 003 w 也 001 73q 006

16、 21 也 003 73(i 009 27 dfl 004 61(i 010 99 坦 009 38q 018 48 do 001 99q <)17 21 do 001 59a 017 13 ±1 001 63a <)19 71 也(mil 41q 007 71 4ft (x)l 55q 007 01 4ft (m)l 09(1 006 16 4£l (x)l 790 006 79 坦 <x)i isq 018 ii ifl 000 59q 002 25 4ft <xx> 29(1 002 23 ifl <xx> 61(1 (km)

17、 s9 廿i <xx» 27表2備狙雄性小鼠臟器系數的變化tah 2 comparison of male rats oran coefficient among each group ( n =6, x ±5)2 2 dehp對小鼠主要脫器的影響 低劑量組、中 劑量組小敝肝臟系數與對照組比擬差異顯著（p < 。05）,高劑屆組小鼠肝臟系數與對照組比擬差異 極顯著（p<q 01）o低劑量組、中劑量組、高劑量組 小散的脾臟系數和腎臟系數與對照組比擬差異無統 計學意義，但隨著劑量的增加有升高趨向低劑房 組、中劑量組、高劑最組小鼠的睪丸臟器系數和附睪 的臟器系數

18、與對照組比擬均無統計學意義，但附睪 臟器系數隨劑量的升高逐漸降低。見表2.與對顧比擬” v。05?p<q 012 3 dehp對小鼠精子畸形率的影響 低劑量組 0.（）5）。中劑量組畸形率和對照組比擬差異顯著 畸形率和對照組比擬差異無統計學意義（p >（pv0.05）,高劑撾組畸形率和對照組比擬差異極顯著(p<q 01).精畸形的構成比中尼折花所占形數目隨劑量的增加逐漸增多。具體畸形構成比及比例最大，低劑會組6& 42%,中劑量組71.50%,高數據見表3。劑量組61. 31%。低劑量組、中劑量組、高劑量組畸表3小肽粘子畸形率和各類魅子畸形構成比(n=6)tuh 3

19、the mte of lenttopenn ii unci the constituent netb of every khd of (cmtopenn ii of rats ( n =6)受檢軸了數(個)楊子畸形數 f個)時形率舂便形4類料f瞪形的構詼比)(%)無鉤胖無定形足折泠無頭m對照坦2 400316ia 76a 68s 15& 091. 4772 80& 09q 74低2 40047619 38q 94a 224. 68s 266& 42& 48q 00中劑量坦2 4()056725 651r 001. 75a 506 2571. 50& 50

20、q 502 4007343(1 ssb11. 435 454. 096 8161. 311q 63q 28與對照fh比擬jr<a 05.bp<a oi3討論dehp是鄰苯二甲酸酯類中的一種,部苯二甲 酸惜類普遍用做驅蟲劑和殺蟲劑的載體和化裝品， 涂料,農藥的溶劑.dehp用量較大占鄰苯：甲酸酣 類用雖的25%,本實驗通過觀察dehp對雄性小鼠 主要臟器重破的影響及生殖功能的影響o dehptij 以使小版肝臟重量變大在較低劑量即可引起肝臟 重量變大，由于肝臟是動物的主要解毒器官，因此 dehptij能有毒性可以使肝細胞內水分增多，肝細 胞變性壞死頃。dehp不能引起成年小敝翠丸和

21、附睪重量明顯變化，但隨假設劑筌的加大有明顯降低 的趨勢。有研究報道dehp能誘導未成年大鼠的睪 丸毒性處于發育期的雄性大版明顯高于成年維性 大鼠”，訶能是由于dehp會影響生殖系統的發 育。由于本次實驗采用的是成年小鼠,因此對于未 成年小m的發育毒性還有待后期實驗進一步研究。 dehpt以降低精了的活動率和存活率，由于其內 分泌干擾作用山，可降低睪丸內睪耐水平，從而干 擾了下丘腦垂休性腺軸進而影響精子正常 存活所需的的類導致精了的活動率和存活率降 低。dehp高于100mgl '可能導致所有組織器 官形態發育異常叫.dehp具有抗雄激素作用,，!, 可以誘導精了發生突變，增高精子畸形率

22、。經皮f 注射吸收后的代謝產物目前不是十分清是，因此其 干擾粘子的機制還有待進一步研究o本實驗顯示大劑雖dehp能明顯影響小鼠生k 發育，較小劑反即可導致生毗功能的下降，提示人們 在日常生活中盡量少使用含dehp的塑料用品及化 妝品，同時為提高生育質量和降低出生缺陷提供理 論依據。參考文獻：(1)鄧茂先.陳祥貴.環境內分泌擾物研斌展ul田外醫學： 衛生學分刪、2000.27，6邱&21 guud in r.murzin p、roberta.b h i：4i i mon ioring of occu*patbnal exposure r» di( 2-e(hylhcxyl> phthalate sun” of wotkers oposed t> phsliiols( j ). inta n-h ocatp environ health, 2007. 81 (8):959-96613)馬金祥任洋善點向山.等.壬基酚對小米葉恥壯微站構的影 響【j .新多醫學院學報.2006.23(3).229-23q14 i鬧云國.瑞軍秀.徐田蜂礙.