1、尿素尿素co(nhco(nh2 2) )2 2 重要的農業氮肥。重要的農業氮肥。只有被土壤中細菌分解為只有被土壤中細菌分解為nhnh3 3才能被植物吸才能被植物吸收利用收利用脲酶脲酶課題背景課題背景co(nh2)2 + h2o co2 +2nh3（一一） 篩篩 選選 菌菌 株株 kh kh2 2popo4 4 1.4g 1.4g nahpo nahpo4 4 2.1g 2.1g mgso mgso4 4 h h2 2o 0.2go 0.2g 葡萄糖葡萄糖 10.0g10.0g 尿素尿素 1.0g1.0g 瓊脂瓊脂 15.0g15.0g 將上述物質溶解后，將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到用蒸餾水

2、定容到1000ml1000ml。 該培養基的配方中，為微該培養基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質？分別是什么物質？ 此配方能否篩選出產生脲酶此配方能否篩選出產生脲酶的細菌？為什么？的細菌？為什么？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素氮源：尿素能。只有產生脲酶的能。只有產生脲酶的細菌能利用尿素作為氮細菌能利用尿素作為氮源而生存。源而生存。能分解尿素的細菌的篩選能分解尿素的細菌的篩選 根據培養基配方，回答下列問題：根據培養基配方，回答下列問題：方法方法 運用運用稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法來來統計統計樣品中的樣品中的活菌活菌數。數。（二）（

3、二） 統計菌落數目統計菌落數目原理原理 1 1個菌落個菌落11個活菌個活菌為了保證結果準確，一般選擇菌落數為了保證結果準確，一般選擇菌落數在在3030300300的平板上進行計數。的平板上進行計數。為使結果接近真實值，需培養計算出為使結果接近真實值，需培養計算出三個或三個以上三個或三個以上的平板菌落的平板菌落平均數平均數。統計的菌落往往比活菌的實際數目統計的菌落往往比活菌的實際數目低低。注意事項注意事項 閱讀教材閱讀教材2222頁頁“（二）統計菌落數目（二）統計菌落數目”一段，并討論一段，并討論教材中提出的問題。教材中提出的問題。 甲：沒有甲：沒有重復實驗重復實驗（至少涂布（至少涂布3 3個平

4、板）個平板） 乙：乙：a a組結果誤差過大，不應用于計算平均值組結果誤差過大，不應用于計算平均值計算公式：計算公式：某同學在稀釋倍數為106 的培養基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml） ( )a. 2.34108b. 2.34109c. 234d. 23.4 b每克樣品中的菌株數每克樣品中的菌株數 =（cv）m（三）（三） 設設 置置 對對 照照 設置對照的主要目的是排除實驗組中非測設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。度。閱讀閱讀p22p2

5、22323頁頁“（三）設置對照（三）設置對照”一段討論教材中提出一段討論教材中提出的問題。的問題。菌落菌落計數計數制培養制培養基基樣品稀釋樣品稀釋涂布平板涂布平板土壤取樣土壤取樣 準備準備牛肉膏蛋白胨培養基牛肉膏蛋白胨培養基和和選擇培養基。選擇培養基。 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養基上生長的菌落相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養基上生長的菌落數目應明顯數目應明顯多于多于選擇培養基上的數目，因此，選擇培養基上的數目，因此，牛肉膏蛋牛肉膏蛋白胨培養基可以作為對照，用來判斷選擇培養基是否起白胨培養基可以作為對照，用來判斷選擇培養基是否起到了到了選擇選擇作用。作用。（1 1）制培養基）制培養基（2 2）

6、土壤取樣）土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去（鏟已經過消從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去（鏟已經過消毒處理）表層土毒處理）表層土3cm3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先滅菌左右，再取樣，將樣品裝入事先滅菌過的信封中。過的信封中。稀釋倍數為稀釋倍數為 10101 1 10106 6。每個稀釋度均用。每個稀釋度均用3 3個選擇培養基。個選擇培養基。（3 3）樣品稀釋涂布）樣品稀釋涂布 （4 4）微生物的培養與觀察）微生物的培養與觀察 1. 1.培養物中是否有雜菌污染以及選擇培養基培養物中是否有雜菌污染以及選擇培養基是否篩選出菌落是否篩選出菌落 對照的培養皿在培養過程中沒有菌落生長，對照的培

7、養皿在培養過程中沒有菌落生長，說明培養基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養基的菌說明培養基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養基的菌落數目明顯大于選擇培養基的數目，說明選擇培落數目明顯大于選擇培養基的數目，說明選擇培養基已篩選出一些菌落。養基已篩選出一些菌落。 2. 2.樣品的稀釋操作是否成功樣品的稀釋操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2個或個或2 2個以上菌落數目在個以上菌落數目在3030300300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數。菌落的計數。 3. 3.重復組的結果是否一致重復組的結果是否一致 如果各位同學選取的是同一種土樣，統計的如果各位

8、同學選取的是同一種土樣，統計的結果應該接近。如果結果相差太遠，則需要從各結果應該接近。如果結果相差太遠，則需要從各項操作過程中去分析、尋找可能的原因。項操作過程中去分析、尋找可能的原因。能分解尿素的細菌的鑒定能分解尿素的細菌的鑒定鑒定的原理：鑒定的原理： 細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，會使培養基的細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，會使培養基的phph升高。升高。鑒定方法：鑒定方法： 在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，利在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，利用此培養基進行細菌培養，觀察培養基的顏色變化。用此培養基進行細菌培養，觀察培養基的顏色變化。1.1.使用選擇培養基的目的是（使

9、用選擇培養基的目的是（ ） a.a.培養細菌培養細菌 b.b.培養真菌培養真菌 c.c.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 d.d.表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區別表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區別2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是別是( )( ) a.co a.co2 2和和n n2 2 b. b.葡萄糖和葡萄糖和nhnh3 3 c.coc.co2 2和尿素和尿素 d.d.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素c cd d3.3.下列說法不正確的是（下列說法不正確的是（ ）a.a.科學家從科學家從70708080度熱泉中分離

10、到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的taqdnataqdna聚聚 合酶。合酶。b.b.統計某一稀釋度的統計某一稀釋度的5 5個平板的菌落數依次為個平板的菌落數依次為m1m1、m2m2、 m3m3、m4m4、m5m5，以，以m3m3作為該樣品菌落數的估計值。作為該樣品菌落數的估計值。c.c.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度 d.d.同其他生物環境相比，土壤中的微生物數量最大，同其他生物環境相比，土壤中的微生物數量最大，種類最多。種類最多。4.4.為培養和分離出酵母菌

11、并淘汰雜菌，常在培養基中為培養和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養基中加入（）加入（） a.a.較多的氮源物質較多的氮源物質 b.b.較多的碳源物質較多的碳源物質 c.c.青霉素類藥物青霉素類藥物 d.d.高濃度食鹽高濃度食鹽b bc c 5、實驗測定鏈霉素對、實驗測定鏈霉素對3種細菌的抗生素效應，用種細菌的抗生素效應，用3種細種細菌在事先準備好的瓊脂塊平板上畫菌在事先準備好的瓊脂塊平板上畫3條等長的平行線（條等長的平行線（3條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置于條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置于37條條件下恒溫培養件下恒溫培養3天，結果如圖所示。從實驗結果分析以天，結果如圖所示。從

12、實驗結果分析以下敘述，不正確的是下敘述，不正確的是 a鏈霉素能阻止結核菌的生長鏈霉素能阻止結核菌的生長 b鏈霉素對結核菌比對霍亂菌更有效鏈霉素對結核菌比對霍亂菌更有效c鏈霉素對結核菌比對傷寒菌更有效鏈霉素對結核菌比對傷寒菌更有效 d鏈霉素可以用于治療傷寒病人鏈霉素可以用于治療傷寒病人d d 4 4、培養基、培養皿、接種環、實驗操作者、培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是方法依次是 ( )( ) 化學消毒化學消毒 灼燒滅菌灼燒滅菌 干熱滅菌干熱滅菌 紫外線消毒紫外線消毒 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 巴氏巴氏消毒法消毒法

13、a.a. b. b.c.c.d.d.解析：培養基用高壓蒸汽滅菌；培養皿能耐解析：培養基用高壓蒸汽滅菌；培養皿能耐高溫，需用干熱滅菌；接種環可用灼燒滅菌達到高溫，需用干熱滅菌；接種環可用灼燒滅菌達到迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學藥劑進行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用學藥劑進行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營養成分可采用巴紫外線消毒；牛奶為不破壞其營養成分可采用巴氏消毒法。氏消毒法。a a5、某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養基、滅菌、而進行了實驗。實驗包括制備培養基、滅菌、接種、培養及菌落觀察與計數。請