1、中藥化學實用技術教 案 首 頁課題模塊三 中藥中化學成分的色譜分離技術班級課時3課型綜合教學目標1.色譜法的概念及分類；2.吸附色譜的原理；3.吸附色譜的三要素及各要素之間的關系；4.吸附色譜的常用操作方法。德育滲透色譜法比較抽象，學習的難度比較大，同學們要注意學習方法，總結規律，深刻理解原理，從本質上認識色譜法。做人也一樣，要不畏艱難，知難而上，有勇于戰勝一切的勇氣，相信自己，相信自己克服困難的能力。教學方法講授法教學媒體新知識新技術或參考資料醫藥生物技術產業化的主要領域醫藥生物技術的產業主要集中在五個方面：生物技術藥品、生物技術營養保健品、生物技術診斷方法和試劑應用于生物技術的設備和生物技

2、術的信息化。從研究生產到投放市場這一過程所消耗的時間和財力上進行難易程度的分析，其順序如下（按由難到簡單排列）：生物技術藥品生物技術營養保健品生物技術診斷試劑設備生物技術信息化.雙語教學提取 distill 分離 abruption 鑒定 critical色譜法 chromatography 吸附層析 adsorption chromatography薄層層析 thin layer chromatography柱色譜 column chromatography教案授課人： 課題模塊三 中藥中化學成分的色譜分離技術時間地點教室教學目標1.色譜法的概念及分類；2.吸附色譜的原理；3.吸附色譜的三要

3、素及各要素之間的關系；4.吸附色譜的常用操作方法。學生情況班級：人數：出勤：教學設計教 學 內 容 及 過 程 色譜法(chromatography)色譜法又稱為層析法，層析技術的應用與發展，對于植物各類化學成分的分離鑒定工作起到重大的推動作用。如中藥丹參的化學成分在30年代僅從中分離到3種脂溶性色素，分別稱為丹參酮、。但以后進一步的研究發現除丹參酮為多種有效成分的混合物。色譜法又稱為層析法,是一種物理化學的現代高效分離分析技術，是分離和鑒定復雜混合物的有效方法。 1. 按原理可分為：吸附層析 分配層析 離子交換層析 凝膠過濾層析 2. 按操作形式分類：薄層層析（TLC ）柱層析（CC） 紙層

4、析（PC） 3. 按流動相種類分類：氣相層析 液相層析4. 按固定相種類分類：Al2O3層析 SIO2層析 聚酰銨層析時間教法教具10min10min教法：講授比較歸納教學設計教 學 內 容 及 過 程吸附色譜(adsorption chromatography） 一、原理：利用吸附劑對混合物中各成分吸附能力的不同進行分離。 原理圖解：混合物中含A、B兩成分。 說明：吸附劑對A、B的吸附力不同或A、B被吸附力不同,因此它們吸附、解吸附的頻率不同，B頻率高,下移較快。A頻率低,下移較慢。二者漸漸分離。 上述可知,吸附層析的三要素-被分離成分、吸附劑、洗脫劑,但我們仍不知道吸附劑為什么具有吸附力,

5、為什么同一吸附劑對不同的成分吸附力有大有小,洗脫劑為什么具有一定的洗脫能力。因此,我們有必要作進一步討論。 二、吸附色譜三要素（factor）1.吸附劑 常用的為氧化鋁及硅膠。條件: 具較大的表面積與一定的吸附能力； 與流動相和分離成分不發生化學反應。 1吸附機理：鋁羥基和硅醇基的氫鍵吸附。2吸附能力： 氧化鋁比硅膠強, 與含水量有關,含水量越高吸附力越小,反之越大, 據此將吸附劑分為五種活性級別(見課本)。 3活化與脫活化 活化: 加熱吸附劑除去一部分水使吸附力增強。 脫活化: 向吸附劑中加入水使吸附力減弱。 4種類與適用范圍 氧化鋁-分為堿性、中性、酸性,分別適用于各時間教法教具10min

6、20min教法：講授比較歸納教學設計教 學 內 容 及 過 程類成分的分離。硅膠-弱酸性,適于中性和酸性成份的分離。常用作流動相的溶劑及其極性大小-水 ,甲醇 ,乙醇 ,丙酮 ,乙酸乙酯 ,氯仿 ,乙醚 ,苯,極性逐漸減小。2.流動相 又稱為展開劑（TLC）和洗脫劑(CC)。條件-一般用”分析純”試劑,不能發生反應。溶劑的極性越大,洗脫能力越強,此規律只限于氧化鋁和硅膠層析。3.被分離成分 規律-成分的極性越大,被吸附力越強。 成分極性大小的判斷: （1）基團的極性越大,分子的極性越大。 （2）極性基團的數目越多,分子的極性越大。 （3）分子的對稱性越大,極性越小。 （4）分子量越大,極性越小

7、。 （5）具分子內氫鍵極性小于不具分子內氫鍵極性。 （6）雙健越多,共軛雙健越長,極性越大。4.如何選擇合適的流動相和吸附劑 1）原則: 被分離成分 吸附劑 流動相 極性大 活性小 極性大 極性小 活性大 極性小 2）具體選擇 未知物-小量摸索。 已知物-查文獻。時間教法教具20min10min20min教法：講授比較 歸納教學設計教 學 內 容 及 過 程三、吸附層析的操作形式 (一).薄層層析(thin layer chromatography) 特點-快速,簡便,微量。1.制板-軟板: 簡便、快速、不牢固、不易保存。 硬板: 牢固、易保存 ,操作復雜,需加粘合劑并活化才能使用。 2.點樣

8、-毛細管點加定性，微量注射器點加定量。原點要求-距底邊1.52 cm,小而圓,少量多次點加。3.展開-密閉,飽和后展開,方式有上行、下行、徑向、雙向。展開距離為1020 cm。4.顯色-有色成分：目測； 無色成分：紫外照射或噴顯色劑。顯色劑-通用顯色劑：濃硫酸乙醇液,碘蒸汽。 專屬性顯色劑：參照各類成份。5.Rf值(比移值)的計算 原點至色斑中心的距離Rf值= 原點至溶劑前沿的距離 討論：比移值的作用-在一定條件下,某成分可作為其物理常數,用于定性和分析,但它不穩定,受諸多因素的影響,重現性較差。 共薄層法在鑒定工作中的應用:該法是將檢品與對照品在相同條件下層析,優點在于克服了諸多因素對比移值

9、的影響,比較客觀地鑒定成份。 參考書：. 鑒別成份的純度2. 成分的定性定量分析3. 中藥材真偽優劣的鑒定4. 摸索柱層析的分離條件5. 少量分離-制備性TLC(二)柱色譜(column chromatography)裝柱-上樣-洗脫-收集洗脫液1.裝柱：分為干法和濕法。2.上樣：分為干法和濕法。3.洗脫4.合并同類項（三） 聚酰胺色譜(polyamide chromatography) 聚酰胺色譜屬于吸附色譜，包括三要素：一、吸附劑1.吸附機理：酰胺基團的氫鍵吸附。2.吸附能力：與被分離成分有關-對酚羥基，羧基，羰基，吸附力較強，對醇羥基無吸附能力。 與流動相種類有關，在水中吸附力最強，在有

10、機溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。二、流動相及其洗脫能力水甲醇，乙醇，丙酮稀氫氧化鈉，稀氨水甲酰胺三、被分離成分1. 酚羥基、羰基數目越多，被吸附就越強。2. 酚羥基在分子中比例越大，被吸附越強。3. 酚羥基的位置，對位間位鄰位。4. 具分子內氫鍵，被吸附減小。時間教法教具10min20min10min20min5. 芳香化程度越大，被吸附力也越強。課后小 結通過學習，學生掌握了.吸附色譜的原理、三要素及各要素之間的關系，同時掌握了吸附色譜的常用操作方法。參考文獻姚新生主編 天然藥物化學 人民衛生出版社 2002 第三版王憲楷主編 天然藥物化學 人民衛生出版社 1988肖崇厚主編 中藥化學 上海

11、科技出版社 1997楊其蘊主編 天然藥物化學 中國醫藥科技出版社 1996陳友梅主編 中藥化學 山東科技出版社 1988薄層層析在中草藥化學成分分析中的應用中藥化學實用技術教 案 首 頁課題分配色譜、離子交換色譜、凝膠過濾色譜班級課時1課型綜合教學目標1.紙色譜的概念及原理；2.紙色譜的三要素及它們之間的關系；3.紙色譜的操作步驟；4.其他色譜法概況。德育滲透紙色譜和聚酰胺色譜是最常用的色譜法，同學們不僅要掌握它們的原理，而且要學會它們的應用，能夠在實驗室進行常規操作，對被分析成分進行定性、定量分析。學以致用，是我們學習的目標。教學方法講授法教學媒體新知識新技術或參考資料生物技術藥品產業化的過

12、程生物技術藥品的研究、開發到市場投放劃分為7個階段：臨床前研究（如毒理、藥理、穩定性研究等）；期臨床； 期臨床期臨床注冊申報前研究(包括信息分析、 編篡和匯總申報注冊資料)；新藥注冊申報與評審；市場投放。資料分析表明，完成臨床前研究并已進入期臨床試驗的品種, 其市場投入成功率可增加1.8倍，而進入期臨床的品種10有9個可以成功地投入市場。雙語教學紙層析（PC） Paper chromatography離子交換層析 ion exchange chromatography凝膠過濾層析gel filtration chromatography教案授課人： 課題分配色譜紙色譜時間地點教室教學目標1.紙

13、色譜的概念及原理；2.紙色譜的三要素及它們之間的關系；3.紙色譜的操作步驟；4.聚酰胺色譜的原理及比移值的比較；5.其他色譜法概況。學生情況班級：人數：出勤：教學設計教 學 內 容 及 過 程紙層析（PC）（Paper chromatography）紙色譜是分配色譜最常用的方法。分配色譜(distribute chromatography)是以溶劑為固定相，再用一定的溶劑系統做移動相，利用被分離物質在兩相間的分配系數不同達到分離目的的色譜方法。 分配色譜原理同兩相溶劑萃取，但效率比兩相溶劑萃取法效率高，因為進行的是無數次的萃取，特別適合分配系數差值小的成分的分離。 一、分配色譜的三要素 （一）

14、支持劑-條件：可吸附一定量固定相液體，對成分無吸附力，使流動相通過固定相溶劑系統不發生改變。常用的有-硅藻土，硅膠，纖維素。 （二）固定相和流動相： 條件：不相混溶，使用前充分飽和，使其穩定。 常用-正相分配層析，即 固定相-水及堿水、酸水，甲乙醇，甲酰胺等親水性有機溶劑。 流動相-親脂性有機溶劑，苯，氯仿，石油醚，丁醇。（三）被分離成分-主要分離親水性強的成分。 如何選擇合適的固定相和流動相：極性相適應，多為混合溶劑組成。時間教法教具5min20min5min教法：講授比較歸納教學設計教 學 內 容 及 過 程二、紙色譜的基本操作 1.層析濾紙的選擇 2.點樣 3.展開（上行展開） 4.顯色與薄層相同，不能用腐蝕性顯色劑。 5.比移值的計算 6.用途(三)離子交換層析 (ion exchange chromatography)原理：通過離子交換進行分離。（四)凝膠過濾層析(gel filtration chromatogra