1、如有幫助，歡迎支持。 人D二聚體（D2D ）試劑盒使用方法 檢測范圍：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中D二聚體（D2D ）含量。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人D二聚體（D2D ）水平。用純化的人 D二聚 體（D2D）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入D二聚體（D2D）， 再與HRP標記的D二聚體（D2D ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D二聚體（D2D ）

2、呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下 測定吸光度（0D值），通過標準曲線計算樣品中人 D二聚體（D2D ）濃度。 試劑盒組成 1 30倍濃縮洗滌液 20ml X 1 瓶 7 終止液 6ml X 1 瓶 2 酶標試劑 6ml X 1 瓶 8 標準品（960pg/ml） 0.5ml X 1 瓶 3 酶標包被板 12孔X 8條 9 標準品稀釋液 1.5ml X 1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml X 1 瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml X 1 瓶 11 圭寸板膜 張 6 顯色劑B液 6ml X 1/瓶 12 密封袋 1個 標本要求 1 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后

3、應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于 -20 C保存，但應避免反復凍融 2. 不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。 480pg/ml 5號標準品 150 d 的原倍標準品加入150 d標準品稀釋液 240pg/ml 4號標準品 150 d 的5號標準品加入150 d標準品稀釋液 120pg/ml 3號標準品 150 d 的4號標準品加入150 d標準品稀釋液 60pg/ml 2號標準品 150 d 的3號標準品加入150 d標準品稀釋液 30p

4、g/ml 1號標準品 150 d 的2號標準品加入150 d標準品稀釋液 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50山,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40山, 然后再加待測樣品10 d （樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37 C溫育30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標

5、試劑 50 4，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 4，再加入顯色劑 B50 4，輕輕震蕩混勻，37 C避光顯色 15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50 4，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止 液后15分鐘以內進行。 操作程序總結： 準備試劑，樣品和標準品 加入準備好的樣品和標準品，3廠C反應30分鐘 3 計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用

6、標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。 2濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數（XnX 5）O 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物請避光保存。 7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. &所有