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文檔簡介
實驗室常用溶液的配制130%丙烯酰胺溶液(100ml)【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的蒸餾水中。加熱至37溶解之,補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45m孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于4溫度。【注意】丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸,因此大于1年的溶液應該被丟棄。240%丙烯酰胺(用于DNA測序,1L)【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L。置棕色瓶中保存于室溫。【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。30.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液(1ml)【配制方法】在0.8ml蒸餾水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0,用蒸餾水稀釋1ml【注意】分裝成小份保存于-70410mol/L乙酸銨溶液(1L)【配制方法】把770g乙酸銨溶解于800ml蒸餾水中,加水稀釋至1L后過濾除菌。在4C儲存。【注意】乙酸銨是熱不穩定的。不要高壓滅菌。510%過硫酸銨溶液(10ml)【配制方法】把1g過硫酸銨溶于8ml蒸餾水中,用蒸餾水補足體積至10ml。該溶液可在4保存數周。61mol/L CaCl2溶液(200ml)【配制方法】稱取54g CaCl26H2O并溶解在170ml蒸餾水中,用蒸餾水補足體積至200 ml。用0.22m濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20。【用法】制備感受態細胞時,將等分試樣解凍,用蒸餾水稀釋至100ml。通過Nalgene過濾器(0.45微米)過濾除菌,并在使用前冷卻至0。72.5mol/L CaCl2溶液(20ml)【配制方法】稱取13.5g CaCl26H2O并溶于15ml蒸餾水中,用蒸餾水補足體積至20ml。用0.22m濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20。8脫氧核苷三磷酸(dNTPs)溶液【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調節每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測),把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋,在給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度。堿基波長消光系數()(M-1cm-1)A2591.54104G2531.37104C2719.10103T2607.40103計算每個dNTP的實際濃度。對于路徑長度為1cm的比色皿,吸光度等于消光系數和摩爾濃度的乘積。然后用蒸餾水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分別分裝成小份貯存于-70。91mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液(20ml)【配制方法】稱取3.09g DTT,溶于15ml蒸餾水中,用0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)補足體積至20ml。通過0.22微米過濾器過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20。【注意】不要對DTT或含有DTT的溶液進行高壓滅菌。100.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液(1L)【配制方法】在800ml蒸餾水中加入186.1gNa2EDTA2H2O,在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒),然后稀釋至1L,分裝后高壓滅菌備用。在室溫下保存。【注意】EDTA二鈉鹽不溶于水,需加入NaOH將溶液的pH值調至接近8.0,才能完全溶解。分配適當的等分試樣并通過高壓滅菌消毒。11溴化乙錠(10mg/ml溶液)(100ml)【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于4C。【注意】小心:溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。使用后,這些溶液應進行凈化。有關如何執行此操作的詳細信息,請參閱機構指南。122HEPES緩沖鹽溶液(100ml)【配制方法】用90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO42H2O、0.2g葡萄糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調節pH值至7.05,再用蒸餾水稀釋至100ml。用0.22m濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20。131mol/l異丙硫基-D-半乳糖苷IPTG溶液(10ml)【配制方法】IPTG(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水稀釋至10ml,用0.22m一次性濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20。141mol/L乙酸鎂(MgOAc)溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解214.46g四水乙酸鎂,稀釋至1L過濾除菌。在室溫下保存。151mol/L MgCl2溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解203.4g MgCl26H2O,用水稀釋至1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。在室溫下保存。【注意】MgCl2極易潮解,應選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放。16酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L TrisHCl(pH7.6)萃取幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l TrisHCl(pH7.6)液層,保存于4。【注意】酚腐蝕性很強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡,穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。1710mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液(10ml)【配制方法】用10ml異丙醇溶解PMSF成1.74mg,分裝成小份貯存于-20。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。PMSF的水溶液在其已經變為堿性(pH 8.6)并在室溫下儲存幾小時后可以安全地丟棄。(PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25的失活速率高于4。pH值為8.0時,20mmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為35min。)181mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液(100ml)【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90ml蒸餾水中,用2mol/L乙酸調節pH值至7.5后稀釋到100ml,分裝成小份后保存于-20。193mol/L乙酸鈉(pH7.0)溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節pH值至5.2,稀釋到1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存。203mol/L乙酸鈉(pH5.2)溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節pH值至7.0,稀釋到1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存。215mol/L NaCl溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解292.2g NaCl加水稀釋至1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存2210%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液(1升)【配制方法】在900ml蒸餾水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68溶溶,加入幾滴濃鹽酸調節溶液的pH值至7.2,加水稀釋至1L,分裝備用。在室溫下保存。【注意】SDS的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區和天平上的SDS。10%SDS溶液無須滅菌。2320SSC(NaCl和檸檬酸鈉)溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉,加入數滴10mol/l NaOH溶液調節pH值至7.0,加水稀釋至1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存。2420SSPE溶液(鹽,磷酸鈉,EDTA)(1升)【配制方法】在800ml毫升水中溶解175.3g NaCl,31.2g NaH2PO42H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液調節pH值至7.4(約需6.5ml 10ml/L NaOH),加水稀釋至1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存。25100%三氯乙酸(TCA)溶液(500g TCA)【配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml蒸餾水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。在室溫下保存。261mol/L Tris溶液(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解121.91g Tris堿,加入濃HCl調節pH值至所需值。對于pH 7.4,加入70ml HCl; 對于pH為7.6加入60ml HCl; 對于8.0的pH,加入42ml HCl。加水稀釋至1L,分裝后高壓滅菌。在室溫下保存。【注意】如1mol/L溶液呈現黃色,應予丟棄并置備質量更好的Tris。盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值,但仍可向大多數廠商購得合適的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異,溫度每升高1,pH值大約降低0.03個單位,應使溶液冷至室溫后方可最后調定pH值。例如:0.05mol/L的溶液在5、25、和37時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。27Tris緩沖鹽溶液(TBS)(25mmol/l Tris)(1升)【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿,加入0.015g酚并用HCl調至pH值至7.4,用蒸餾水稀釋至1L,分裝后高壓滅菌(15 lb
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