1.pH指示劑的配制技術目錄/Contents1pH指示劑的配制技術分類物質的量濃度溶液的配制01pH指示劑的配制分類1．酸堿指示劑指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機弱酸或有機弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。01pH指示劑的配制分類2．金屬指示劑絡合滴定法所用的指示劑，大多是染料，它在一定pH下能與金屬離子絡合呈現一種與游離指示劑完全不同的顏色而指示終點。比如淀粉指示劑。01pH指示劑的配制分類3．氧化還原指示劑為氧化劑或還原劑，它的氧化形與還原形具有不同的顏色，在滴定中被氧化（或還原）時，即變色，指示出溶液電位的變化。如鉻黑T指示劑、鈣指示劑。02常見指示劑的配制1．甲基紫指示劑稱取甲基紫10mg，加水100mL溶解即得。本指示劑有三個變色范圍：第一變色范圍PH=0.13~0.5，顏色由黃至綠；第二變色范圍pH=1.0~1.5，顏色由綠至藍；第三變色范圍pH=2.0~3.0，顏色由藍至紫色。02常見指示劑的配制2．甲基橙指示劑稱取甲基橙0.1g，溶解于100mL水中。變色范圍pH=3.1-4.4，顏色變化由紅至黃色。3．溴甲酚綠（溴甲酚藍）指示劑此指示劑有兩種配制方法，一種是稱取溴甲酚綠0.1g，溶于100mL20%（體積分數）乙醇中；另一種是稱取溴甲酚綠0.1g，溶于100mL水中，加入0.05mol/L氫氧化鈉溶液2.9mL。變色范圍是pH=3.8~5.4，顏色由黃至藍色。02常見指示劑的配制4．溴甲酚紫指示劑稱取溴甲酚紫0.04g，0.01mol/LNaOH7.4g，加入蒸餾水92.6mL。溴甲酚紫pH5.2-5.6，顏色由黃變紫，常用濃度為0.04％。5．甲基紅指示劑稱取0.1g或0.2g甲基紅，溶于100mL60%（體積分數）乙醇中即可。變色范圍為pH=4.4~6.2，顏色由紅至黃色。02常見指示劑的配制6．酚紅指示劑稱取酚紅0.1g，溶于100mL20%（體積分數）乙醇中；第二種配制方法為：稱取酚紅0.1g溶于100mL水中，加入0.05mol/L氫氧化鈉溶液5.7mL。其變色范圍是pH=6.8-8.0，顏色由黃色至紅色。7．酚酞指示劑稱取酚酞lg，溶于100mL60%（體積分數）乙醇中。變色范圍pH=8.2-10.0，顏色由無色至紫紅。02常見指示劑的配制8．甲基紅溴甲酚綠混合指示劑量取1g/L溴甲酚氯乙醇溶液50mL，讓它再與1g/L甲基紅乙醇溶液10mL混合，所制得的混合液即是甲基紅溴甲酚綠混合指示劑。變色點PH=5.1，酸性色為酒紅色，堿性色為綠色。9．甲基紅亞甲基藍指示劑將2g/L的甲基紅乙醇溶液與1g/L的亞甲基藍乙醇溶液等體積混合，混合液即是甲基紅亞甲基藍指示劑。其變色點是PH=5.4，酸性色為紅紫色，堿性色為綠色。PH=5.2為紅紫色，PH=5.4為暗紫色，PH=5.6為綠色。02常見指示劑的配制10．5g/L的鉻酸鉀指示劑稱取鉻酸鉀5g，溶于100mL水即可。11．淀粉指示劑稱取1g可溶性淀粉，加入10mL冷水調成懸浮液，倒入正在沸騰的100mL水中，冷卻備用。12．鈣紅指示劑稱取鈣紅0.1g，加水100mL，或者鈣紅液與乙醇按1:1等體積溶解即得。02常見指示劑的配制13．麝香草酚藍指示劑稱取麝香草酚藍0.1g溶于100mL20%（體積分數）乙醇中；還有一種配制方法，即稱取麝香草酚藍0.1g溶于100mL水中，加入0.05mol/L氫氧化鈉溶液4.3mL。第一變色范圍pH=1.2~2.8，顏色由紅至黃；第二變色范圍pH=8.0~9.6，顏色由黃至藍色。02常見指示劑的配制14．麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得。變色范圍pH9.3~10.5g（無色→藍）。麝香草酚藍指示液取麝香草酚藍0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液4.3mL使溶解，再加水稀釋至200mL，即得。變色范圍pH1.2~2.8(紅→黃)；15．中性紅指示劑稱量中性紅0.04g，加入95％乙醇28mL，蒸餾水72mL，混勻即可。中性pH6.8~8顏色由紅變黃，常用濃度為0.04％。02常見指示劑的配制16．孔雀綠指示液取孔雀綠0.3g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。變色范圍pH0.0~2.0，由黃色變為綠色；PH11.0-13.5，由綠色變為無色。17．甲酚紅指示液取甲酚紅0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液5.3mL使溶解，再加水稀釋至100mL，即得。變色范圍pH7.2~8.8由黃變紅。02常見指示劑的配制18．剛果紅指示液取剛果紅0.5g,加10％乙醇100mL使溶解，即得。變色范圍pH3.0~5.0由藍變紅。19．蘇丹Ⅳ指示液取蘇丹Ⅳ0.5g,加氯仿100mL使溶解，即得。20．間甲酚紫指示液取間甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氫氧化鈉溶液10mL使溶解，再加水稀釋至100mL，即得。變色范圍pH7.5~9.2由黃色變紫色。02常見指示劑的配制21．茜素磺酸鈉指示液取茜素磺酸鈉0.1g，加水100mL使溶解,即得。變色范圍pH3.7~5.2由黃變紫。22．萘酚苯甲醇指示液取α-萘酚苯甲醇0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。變色范圍pH8.5-9.8（黃→綠）23．鉻黑T指示劑取鉻黑T0.1g，加氯化鈉10g，研磨均勻，即得。02常見指示劑的配制24．喹哪啶紅指示液取喹哪啶紅0.1g，加甲醇100mL使溶解，即得。變色范圍pH1.4~3.2由無色變成紅色。25．溴酚藍指示液取溴酚藍0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.0mL使溶解，再加水稀釋至200mL，即得。變色范圍pH2.8~4.6從黃色變為藍綠色。02常見指示劑的配制26．鄰二氮菲指示液取硫酸亞鐵0.5g，加水100mL使溶解，加硫酸2滴與鄰二氮菲0.5g,搖勻，即得。本液應臨用新制。27．鈣紫紅素指示劑取鈣紫紅素0.1g，加無水硫酸鈉10g，研磨均勻，即得。28．熒光黃指示劑取熒光黃0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得該指示劑。02常見指示劑的配制29．結晶紫指示劑取結晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。30．硫酸鐵銨指示劑取硫酸鐵銨8g，加水100mL使溶解，即得。31．鈣紫紅素指示劑取鈣紫紅素0.1g，加無水硫酸鈉10g，研磨均勻，即得。2.常見培養基的配方及其特點目錄/Contents1基礎培養基培養基鑒別和選擇培養基23加富培養基01基礎培養基（1）馬鈴薯葡萄糖培養基（簡稱PDA）（分離培養霉菌用）

馬鈴薯300g蔗糖（或葡萄糖）20g

瓊脂20g蒸餾水1000mLpH自然培養基的配制：將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL蒸餾水，煮沸10～20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，121℃高壓滅菌20min。01基礎培養基

（2）牛肉膏蛋白胨培養基（培養細菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化鈉10g瓊脂15~20gpH7.0~7.2水1000mL121℃滅菌20min。01基礎培養基（3）吲哚培養基（蛋白胨水）用于細菌靛基質試驗胰酪蛋白胨10g氯化鈉5gL-色氨酸0.5g蒸餾水1000mLpH7.4。121℃滅菌15min。（4）玉米粉瓊脂（培養真菌用）玉米浸粉7.0g瓊脂15.0gpH值6.0±0.201基礎培養基（5）月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG培養基胰蛋白胨20.0g氯化鈉5.0g乳糖5.0g磷酸氫二鉀2.75g月桂基硫酸鈉0.1g磷酸二氫鉀2.75gpH值6.8±0.2溫度25℃（6）改良山梨醇麥康凱(CT-SMAC)瓊脂蛋白胨20.0g山梨醇10.0g三號膽鹽1.5g氯化鈉5.0g中性紅0.03g結晶紫0.001g瓊脂15.0gpH值7.2±0.201基礎培養基（7）營養瓊脂斜面蛋白胨5.0g牛肉粉3.0g瓊脂15.0gpH值7.3±0.1（8）PSE瓊脂（用于糞鏈球菌的選擇性分離和計數（SN標準）蛋白胨20.0g酵母浸粉5.0g牛膽汁物10.0g檸檬酸鈉1.0g氯化鈉5.0g檸檬酸鐵銨0.5g疊氮化鈉0.25g七葉苷1.0g瓊脂15.0gpH值7.1±0.201基礎培養基（9）沙氏瓊脂培養基（用于真菌檢測）蛋白胨10.0g葡萄糖40.0g瓊脂20.0gpH值5.6±0.2（10）葡萄糖瓊脂胰蛋白胨10.0g酵母粉1.5g氯化鈉5.0g溴甲酚紫0.015g葡萄糖10.0g瓊脂12.0gpH值6.9-7.101基礎培養基（11）葡萄糖胰蛋白胨瓊脂胰酪蛋白胨10.0g葡萄糖5.0g瓊脂15.0g溴甲酚紫0.04pH值6.7±0.1（12）LB（Luria-Bertani）培養基蛋白胨10g酵母膏5g氯化鈉10g蒸餾水1000mLpH7.0。121℃滅菌20min。01基礎培養基（13）麥氏（Meclary）瓊脂（酵母菌）葡萄糖1g氯化鉀1.8g酵母浸膏2.5g醋酸鈉8.2g瓊脂15-20g蒸餾水1000mL113℃滅菌20min。（14）玉米粉蔗糖培養基玉米粉60g磷酸二氫鉀3g維生素B1100mg蔗糖10g七水合硫酸鎂1.5g水1000mL121℃滅菌30min，維生素B1單獨滅菌15min后另加。01基礎培養基（15）馬丁氏（Martin）瓊脂培養基（分離真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氫鉀1g七水合硫酸鎂0.5g1/3000孟加拉紅（rosebengal，玫瑰紅水溶液）100mL瓊脂15~20g蒸餾水800mLpH自然112℃滅菌30min。臨用前加入0.03%鏈霉素稀釋液100mL，使每毫升培養基中含鏈霉素30μg。01基礎培養基（16）查氏（Czapek）培養基（培養霉菌用）硝酸鈉2g磷酸氫二鉀1g氯化鉀0.5g硫酸鎂0.5g硫酸亞鐵0.01g蔗糖30g瓊脂15~20g水1000mLpH自然121℃滅菌20min。01基礎培養基（17）無氮培養基（自生固氮菌、鉀細菌）甘露醇（或葡萄糖）10g磷酸二氫鉀0.2g七水合硫酸鎂0.2g氯化鈉0.2g二水合硫酸鈣0.2g碳酸鈣5g蒸餾水1000mLpH7.0~7.2。113℃滅菌30min。01基礎培養基（18）營養肉湯（NB）（一般細菌培養,轉種,復壯,增菌等（GB標準）（19）乳糖蛋白胨培養液（“水的細菌學檢查”用）（20）煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）（用于大腸菌群、大腸桿菌的測定(GB2008、SN標準)）（21）BBL瓊脂培養基（用于雙岐桿菌分離培養（GB標準））（22）皰肉培養基基礎（加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(GB標準)）（23）檸檬酸鹽培養基（用于測定血清，血漿及相關液體等樣本）02鑒別和選擇培養基（1）伊紅美藍培養基（EMB培養基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氫二鉀2.0g瓊脂15.0g伊紅0.4g美藍0.065gpH值7.1±0.2培養基的配制：將已滅菌的蛋白胨水培養基（pH7.6）加熱熔化，冷卻至60℃左右時，再把已滅菌的乳糖溶液，伊紅水溶液及美藍水溶液按上述量以無菌操作加入。搖勻后，立即倒平板。乳糖在高溫滅菌易被破壞必須嚴格控制滅菌溫度，115℃滅菌20min。02鑒別和選擇培養基（1）伊紅美藍培養基（EMB培養基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氫二鉀2.0g瓊脂15.0g伊紅0.4g美藍0.065gpH值7.1±0.2培養基的配制：將已滅菌的蛋白胨水培養基（pH7.6）加熱熔化，冷卻至60℃左右時，再把已滅菌的乳糖溶液，伊紅水溶液及美藍水溶液按上述量以無菌操作加入。搖勻后，立即倒平板。乳糖在高溫滅菌易被破壞必須嚴格控制滅菌溫度，115℃滅菌20min。02鑒別和選擇培養基（1）伊紅美藍培養基（EMB培養基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氫二鉀2.0g瓊脂15.0g伊紅0.4g美藍0.065gpH值7.1±0.202鑒別和選擇培養基（2）復紅亞硫酸鈉培養基（遠藤氏培養基）（3）SS瓊脂（用于沙門氏菌，志賀氏菌的選擇性分離培養）（4）卵黃瓊脂培養基基礎（用于肉毒梭菌、產氣莢膜梭菌的分離培養（GB標準））(5)沙門氏菌顯色培養基（用于沙門氏菌的顯色培養，沙門氏菌顯紫色）03加富培養基（1）EEM培養基（用于致病性大腸桿菌的增菌培養和腸桿菌的增菌培養）（2）腸道菌增菌肉湯（EE）（用于腸道菌的增菌培養(GB標準)）（3）MEE肉湯（用于腸道菌的選擇性增菌培養(SN標準)）（4）THB培養基（用于鏈球菌增菌培養）（5）腸球菌肉湯（用于腸球菌增菌培養）（6）改良Giolitti-Cantobi肉湯（用于金黃色葡萄球菌的增菌培養）（7）普通肉湯培養基（用于金黃色葡萄球菌的增菌培養（SN標準））（8）胰蛋白胨大豆肉湯（增菌培養）常用培養基的制備目錄/Contents1配制培養基的準備工作培養基制備培養基制備的基本程序201配制培養基的準備工作（1）水和藥品的準備配制培養基用的水最好用蒸餾水，但精細的試驗需要使用重蒸餾水。化學藥品要用分析純或化學純，稱量要準確，每稱一種藥品都必須準確記載，以便事后查對。01配制培養基的準備工作（2）器皿和用具的準備器皿種類為：不同型號的試管、燒杯、錐形瓶、三角瓶、玻璃棒、滴管、平皿、培養瓶、培養基分裝器、移液管、容量瓶等。制備培養基所用的試管、燒杯、錐形瓶、三角瓶、玻璃棒、滴管、平皿、培養瓶等玻璃儀器在使用前，先要用肥皂水洗刷，再用清水反復沖洗干凈，最后用蒸餾水沖一遍，晾干或烘干備用。02培養基制備的基本程序（1）培養基配方的選定（2）培養基的制備記錄每制備一次培養基都要作記錄，包括培養基名稱，配方及其來源和各種成份的編號，還要記錄好pH值、消毒溫度、消毒時間和制備的日期及其制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制備好的培養基一同存放、以防發生混亂。（3）培養基成分的稱取（4）培養基各成份的混合和溶化02培養基制備的基本程序（5）培養基pH的初步調整用5%的NaOH或5%HC1將培養基pH調至所需范圍。（6）培養基的過濾02培養基制備的基本程序（7）培養基的分裝培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器總容積的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎。（8）培養基的滅菌一般培養基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。

（9）培養基的質量測試（10）培養基的保存將滅菌后的培養基放入37℃的恒溫培養箱內培養24h，再檢驗滅菌效果，無污染者方可使用。

3.常用染色液的配制目錄/Contents1常用染色液的配制染色液01常用染色液的配制1.呂氏堿性美藍染色液美藍0.3g95％乙醇30mL0.01％氫氧化鉀溶液100mL將美藍溶解于乙醇中，然后于氫氧化鉀溶液混合。染色時，先將涂片在火焰上固定，待冷卻后滴加染液，染1min~3min，水洗，待干，鏡檢。01常用染色液的配制2.奧爾特氏莢膜染色液（1）成分沙黃3g蒸餾水100mL用乳缽研磨溶解。01常用染色液的配制（2）染色法將涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加熱至產生蒸汽后，繼續染3min，水洗，待干，鏡檢。（3）結果炭疽芽孢桿菌菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（1）成分瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳缽研磨溶解01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（2）染色法①待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。②加入等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動玻片或采用其他方式混合，使磷酸鹽緩沖液與瑞氏染液混勻靜置；③再用蒸餾水從一端輕輕沖洗，待干燥后，鏡檢。01常用染色液的配制4.革蘭氏染色法（1）染色液①結晶紫染色液結晶紫1g95％乙醇20mL1％草酸銨水溶液80mL將結晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。01常用染色液的配制②革蘭氏碘液碘1g碘化鉀2g蒸餾水300mL將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，在加蒸餾水至300mL。01常用染色液的配制③沙黃復染法染色液沙黃0.25g95％乙醇10mL蒸餾水90mL將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。01常用染色液的配制（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗；②滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；③滴加95％乙醇脫色，約30s；或將乙醇滴滿整個涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s；④水洗，滴加復染液，復染1min，水洗，待干，鏡檢。（3）結果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。01常用染色液的配制5.耐酸性染色法（1）染色液①石炭酸品紅染色液堿性品紅0.3g95％乙醇10mL5％苯酚水溶液90mL將品紅溶解于乙醇中，然后與苯酚溶液混合。01常用染色液的配制②3％鹽酸-乙醇濃煙酸3mL95％乙醇97mL③復染液呂氏堿性美藍染色液01常用染色液的配制（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品紅染色液，徐徐加熱至有蒸汽出現，但切不可使沸騰。染液因蒸發減少時，應隨時添加。染5min，傾去染液，水洗；②滴加鹽酸-乙醇脫色，直至無紅色脫落為止，（所需時間視涂片厚薄而定，一般為1min~3min），水洗；③加呂氏堿性美藍染色液，復染30min，水洗，待干，鏡檢。（3）結果耐酸性細菌呈紅色，其他細菌、細胞等物質呈藍色。01常用染色液的配制6.柯氏染色法（1）染色液成分0.5％沙黃液0.5％孔雀綠液（2）染色法①將涂片在火焰上固定，滴加0.5％沙黃液，并加熱至出現氣泡，約2min~3min，水洗；②滴加0.5％孔雀綠液，復染40s~50s，水洗，待干，鏡檢。（3）結果布氏桿菌呈紅色，其他細菌及細胞呈綠色。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法（1）染色液的配制①甲液稱丹寧酸5g、氯化高鐵（FeCl3）1.5g，溶于100mL蒸餾水中，待溶解后加入1％的氫氧化納溶液1mL和15％的甲醛溶液2mL。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法②乙液稱2g硝酸銀溶于100mL蒸餾水中。在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液，到出現沉淀后，繼續滴加使其變為澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出現輕微霧狀為止（此為關鍵性操作，應特別小心）。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時，要邊滴邊充分搖蕩，染液當天配，當天使用，2d~3d后基本無效。01常用染色液的配制（2）染色法在風干的載玻片上滴加甲液，4min~6min后，用蒸餾水輕輕沖凈，再加乙液，緩緩加熱至冒汽，維持約半分鐘（加熱時注意勿出現干燥面），在菌體多的部位可呈深褐色到黑色，停止加熱，用水沖凈，干后鏡檢。菌體及鞭毛為深褐色到黑色。01常用染色液的配制8．考馬斯亮藍R-250染色液考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度,是利用蛋白質―染料結合的原理,定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。01常用染色液的配制8．考馬斯亮藍R-250染色液考馬斯亮藍R-250染色液的配置方法（1L的量）：（1）稱取1g考馬斯亮藍R-250，置于1L燒杯中。（2）量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。（3）加入100mL的冰乙醋酸，均勻攪拌。（4）加入650mL的去離子水，均勻攪拌。（5）用濾紙出去顆粒物質后，室溫保存。4.緩沖液的配制目錄/Contents1緩沖液的配制緩沖液01緩沖液的配制1．磷酸鹽緩沖液(簡稱PBS)磷酸鈉緩沖液是常用的一種阻礙溶液pH變化的緩沖溶液，其鹽溶液中含有氯化鈉，磷酸鹽，磷酸鹽，氯化鉀和磷酸鉀組成。（1）常規磷酸鹽緩沖液①成分磷酸二氫鉀34g，1mol/L氫氧化鈉溶液175mL，蒸餾水825mL01緩沖液的配制1．磷酸鹽緩沖液(簡稱PBS)②配置先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH為7.2后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。③稀釋液取儲存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL。分裝每瓶100mL或每管10mL，于121℃高壓滅菌15min，備用。01緩沖液的配制（2）改良磷酸鹽緩沖液①成分磷酸氫二鈉34g，山梨醇10.0g，磷酸二氫鈉1.2g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000mL，膽鹽1.5g。②制法將磷酸鈉及氯化鈉溶于蒸餾水中，再加入山梨醇及膽鹽，溶解后，校正PH值為7.6，分裝試管。于121℃高壓滅菌15min，備用。01緩沖液的配制（3）明膠磷酸緩沖液①成分磷酸氫二鈉4.0g，明膠2.0g，蒸餾水1000mL。②制法加熱溶解，校正PH為6.2，于121℃高壓滅菌15min。01緩沖液的配制（4）磷酸-三乙胺緩沖液取磷酸約4mL與三乙胺約7mL，加50％甲醇稀釋至1000mL，用磷酸調節pH值至3.2，即得磷酸-三乙胺緩沖液。01緩沖液的配制（5）PH值在2.0~8.0范圍內常用磷酸鹽緩沖液的配制方法①磷酸鹽緩沖液(pH2.0)：甲液:取磷酸16.6mL，加水至1000mL，搖勻。乙液：取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000mL。取上述甲液72.5mL與乙液27.5mL混合，搖勻，即得。②磷酸鹽緩沖液(pH2.5)：取磷酸二氫鉀100g，加水800mL，用鹽酸調節pH至2.5，用水稀釋至1000mL。01緩沖液的配制（5）PH值在2.0~8.0范圍內常用磷酸鹽緩沖液的配制方法③磷酸鹽緩沖液(pH5.0)：取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調節pH值至5.0，即得。④磷酸鹽緩沖液(pH5.8)：取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g,加水使溶解成1000mL，即得。01緩沖液的配制（5）PH值在2.0~8.0范圍內常用磷酸鹽緩沖液的配制方法⑤磷酸鹽緩沖液(pH6.5)：取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液15.2mL，用水稀釋至100mL，即得。⑥磷酸鹽緩沖液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液250mL，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液118mL，用水稀釋至1000mL，搖勻，即得。⑦磷酸鹽緩沖液(pH7.0)取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液29.1mL，用水稀釋至100mL，即得。01緩沖液的配制⑧磷酸鹽緩沖液(pH7.8)：甲液：取磷酸氫二鈉35.9g，加水溶解，并稀釋至500mL。乙液：取磷酸二氫鈉2.76g，加水溶解，并稀釋至100mL。取上述甲液91.5mL與乙液8.5mL混合，搖勻，即得。⑨磷酸鹽緩沖液(pH7.8-8.0)：取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使溶解成1000mL，即得。01緩沖液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-檸檬酸緩沖液母液A（0.2mol/L的Na2HPO4

溶液）：稱取143.256g的Na2HPO4?12H2O，用去離子水定容至2L。母液B（0.1mol/L的檸檬酸溶液）：稱取檸檬酸42.028g用去離子水溶解定容至2L。01緩沖液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-檸檬酸緩沖液母液A（0.2mol/L的Na2HPO4

溶液）：稱取143.256g的Na2HPO4?12H2O，用去離子水定容至2L。母液B（0.1mol/L的檸檬酸溶液）：稱取檸檬酸42.028g用去離子水溶解定容至2L。01緩沖液的配制2.醋酸鹽緩沖液：（1）醋酸-醋酸鈉緩沖液①醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH3.7)取無水醋酸鈉20g，加水300mL溶解后，加溴酚藍指示液1mL及冰醋酸60~80mL，至溶液從藍色轉變為純綠色，再加水稀釋至1000mL，即得。01緩沖液的配制2.醋酸鹽緩沖液：（1）醋酸-醋酸鈉緩沖液②醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH4.6)取醋酸鈉5.4g，加水50mL使溶解，用冰醋酸調節pH值至4.6，再加水稀釋至100mL，即得。01緩沖液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-檸檬酸緩沖液③pH6.6的緩沖液取727.5mL母液A，與272.5mL的母液B混勻即可。并將其放于4℃冰箱保存。01緩沖液的配制③醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)取醋酸鈉54.6g，加1mol/L醋酸溶液20mL溶解后，加水稀釋至500mL，即得。（2）醋酸-醋酸鉀緩沖液取醋酸鉀14g，加冰醋酸20.5mL，再加水稀釋至1000mL，即得pH=4.3的緩沖液。01緩沖液的配制（3）醋酸-醋酸銨緩沖液①醋酸-醋酸銨緩沖液（PH3.5）取醋酸銨25g，加水25mL溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38mL，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調節pH值至3.5(電位法指示)，用水稀釋至100mL，即得。01緩沖液的配制（3）醋酸-醋酸銨緩沖液②醋酸-醋酸銨緩沖液(pH4.5)取醋酸銨7.7g，加水50mL溶解后，加冰醋酸6mL與適量的水使成100mL，即得。01緩沖液的配制③醋酸-醋酸銨緩沖液(pH6.0)取醋酸銨100g，加水300mL使溶解，加冰醋酸7mL，搖勻即得。（4）醋酸-鉀鹽緩沖液(pH3.0)取冰醋酸50mL，加水800mL混合后，用氫氧化鉀調節pH值至3.0，再加水稀釋至1000mL，即得。01緩沖液的配制3．硼酸鹽緩沖液（1）硼酸-氯化鈣緩沖液(pH8.0)取硼酸0.572g與氯化鈣2.94g，加水約800mL溶解后,用1mol/L鹽酸溶液約2.5mL調節pH值至8.0，加水稀釋至1000mL，即得。01緩沖液的配制（2）硼酸-碳酸鈉緩沖液(pH=10.8~11.2)取無水碳酸鈉5.30g，加水使溶解成1000mL；另取硼酸1.91g，加水使溶解成100mL。臨用前取碳酸鈉溶液973mL與硼酸溶液27mL，混勻，即得。（3）硼酸-氯化鉀緩沖液(pH9.0)取硼酸3.09g，加0.1mol/L氯化鉀溶液500mL使溶解，再加0.1mol/L氫氧化鈉溶液210mL，即得。01緩沖液的配制4．檸檬酸鹽緩沖液取枸櫞酸4.2g，加1mol/L的20％乙醇制氫氧化鈉溶液40mL使溶解，再用20％乙醇稀釋至100mL，即得。（1）檸檬酸鹽緩沖液(pH6.2)取2.1％枸櫞酸水溶液，用50％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.2，即得所需溶液。01緩沖液的配制（2）檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液（PH2.2）

稱取210g檸檬酸（C6H8O7?H2O）84g氫氧化鈉NaOH，加水溶解，再用量筒量取160mL的濃鹽酸，混勻，加水定容至10L即得PH=2.2的緩沖液。使用時可以每升中加入1g酚，若最后pH有變化，再用少量50%氫氧化鈉溶液或濃鹽酸調節，冰箱保存。01緩沖液的配制（3）檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液取9.2mL0.1M檸檬酸和10.8mL0.1M檸檬酸鈉溶液混合，即得PH=4.8的緩沖液。（4）檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液（PH=5.0）取10.30mL0.2MNa2HPO4液和9.70mL0.1M檸檬酸混合，即得PH=5.0的緩沖液。01緩沖液的配制（5）檸檬酸－磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)甲液：取枸櫞酸21g或無水枸櫞酸19.2g,加水使溶解成1000mL，置冰箱內保存。乙液：取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000mL。取上述甲液61.45mL與乙液38.55mL混合，搖勻，即得。01緩沖液的配制5．巴比妥緩沖液（1）巴比妥緩沖液(pH7.4)取巴比妥鈉4.42g，加水使溶解并稀釋至400mL，用2mol/L鹽酸溶液調節pH值至7.4，過濾即得。（2）巴比妥緩沖液(pH8.6)取巴比妥5.52g與巴比妥鈉30.9g，加水使溶解成2000mL，即得。01緩沖液的配制5．巴比妥緩沖液（3）巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH7.8)取巴比妥鈉5.05g，加氯化鈉3.7g及水適量使溶解，另取明膠0.5g加水適量，加熱溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L鹽酸溶液調節pH值至7.8，再用水稀釋至500mL，即得。01緩沖液的配制6．三羥甲基氨基甲烷緩沖液（1）三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.0)取三羥甲基氨基甲烷12.14g，加水800mL，攪拌溶解，并稀釋至1000mL，用6mol/L鹽酸溶液調節pH值至8.0，即得。（2）三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.1)取氯化鈣0.294g，加0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液40mL使溶解，用1mol/L鹽酸溶液調節pH值至8.1，加水稀釋至100mL，即得。01緩沖液的配制（3）三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH9.0)取三羥甲基氨基甲烷6.06g，加鹽酸賴氨酸3.65g，氯化鈉5.8g，乙二胺四醋酸二鈉0.37g，再加水溶解使成1000mL，調節pH值至9.0，即得。01緩沖液的配制7．氨－氯化銨緩沖液（1）氨－氯化銨緩沖液(pH8.0)取氯化銨1.07g，加水使溶解成100mL，再加稀氨溶液(1→30)調節pH值至8.0，即得。（2）氨－氯化銨緩沖液(pH10.0)取氯化銨5.4g，加水20mL溶解后，加濃氯溶液35mL，再加水稀釋至100mL，即得。01緩沖液的配制8．甲酸鈉緩沖液(pH3.3)取2mol/L甲酸溶液25mL，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氫氧化鈉溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75mL，用水稀釋至200mL，調節pH值至3.25~3.30，即得。9．鄰苯二甲酸鹽緩沖液(pH5.6)取鄰苯二甲酸氫鉀10g，加水900mL，攪拌使溶解，用氫氧化鈉試液(必要時用稀鹽酸)調節pH值至5.6，加水稀釋至1000mL，混勻，即得。5.生化試劑制備目錄/Contents1糖（醇）類代謝試驗法生化試劑制備氨基酸和蛋白質代謝試驗法2呼吸酶類試驗3毒性酶類試驗401糖（醇）類代謝試驗法（1）試驗原理：不同的細菌對各種糖醇的分解能力及所產生的代謝產物各不同，有的能分解多種糖醇，有的只能分解1-2種糖醇，有的分解糖醇只產酸不產氣，有的分解糖醇能產酸產氣，通過這些特點，我們可以鑒別細菌。01糖（醇）類代謝試驗法糖發酵培養基主要有：液體糖發酵管、半固體糖發酵管、固體糖發酵管、雙糖(或三糖)高層斜面發酵管四類。01糖（醇）類代謝試驗法糖發酵試驗法的具體操作方法：采用無菌操作法，首先將已分離培養的純種細菌用接種針或者接種環移取，然后接種在糖發酵管中，如果是半固體培養基，則用接種針作穿刺接種。最后放置于36±1℃溫箱內培養，經過一定時間（數小時以至二周之間）的培養，培養過程中每天觀察結果，并與指示劑比對即可。01糖（醇）類代謝試驗法（3）葡萄糖氧化發酵培養基（O/F）的制備稱取蛋白胨2.7克，氯化鈉5.0克，0.2%溴麝香酚蘭0.03克，瓊脂3克，0.3克KH2PO4，葡萄糖10.0克，水1000毫升。加熱溶解，121℃高壓滅菌20min即可。01糖（醇）類代謝試驗法（2）V-P.試驗的試驗方法首先取3支葡萄糖蛋白胨水培養基，將它們一一編號，第1號接種大腸桿菌，第2號接產氣桿菌，第3支接未知菌；然后放入37℃培養箱中培養48h，之后加入40%KOH5-10滴，再加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振蕩；最后放入37℃溫箱中保溫30min，以加快反應速度；保溫期間注意觀察培養基的顏色變化：①當發酵管出現紅色者時，稱為陽性，記作V-P+②當發酵管為黃色或銅綠色時，稱為陰性，記作V-P-。01糖（醇）類代謝試驗法（2）V-P.試驗的制備方法制備方法：將3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生長物接種3%氯化鈉MR-VP培養基，36℃士1℃培養48h。取1mL培養物轉放到一個試管內，加0.6mL甲液，搖動。加0.2mL乙液，搖動。隨意加一點肌酸結晶，4h后觀察結果。陽性結果是呈伊紅的粉紅色。01糖（醇）類代謝試驗法

3．甲基紅（MR）試驗（1）試驗原理腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培養基pH值下降至pH=4.5以下，使甲基紅指示劑變紅，即為甲基紅試驗陽性；有的細菌使丙酮酸脫羧后形成酮、醇類中性產物，培養液pH＞5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，示為甲基紅試驗陰性。簡而言之，甲基紅試驗原理就是檢測不同細菌分解葡萄糖產酸的能力。01糖（醇）類代謝試驗法（2）試驗方法首先挑取少許新鮮的待測試驗培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養基中；然后放于36±1℃或30℃（以30℃較好）培養箱中培養3~5天；其中注意，從培養的第48h起，每天要取培養液1mL，加入甲基紅指示劑1~2滴，立即觀察結果。01糖（醇）類代謝試驗法（3）結果觀察與記錄①呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記MR+；②呈橘黃色或黃色為陰性，記MR-。從發現陰性并培養至第5天仍為陰性，即可判定結果。（4）試驗中所用培養基和試劑的制備①磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養基的制備稱取蛋白胨5g，葡糖糖5g，磷酸氫二鉀2g，加入蒸餾水1000mL，充分溶解后調pH7.0-7.2，過濾。分裝于試管中，每管10mL，121℃滅菌30min。01糖（醇）類代謝試驗法②甲基紅試劑稱取甲基紅（Methylred）0.04g，溶于60mL的95％乙醇中，再加入40mL的蒸餾水即可。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（1）原理某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可以用顯色反應來表現。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結合，形成玫瑰吲哚，此物質為紅色化合物。也就是說，這一試驗反應原理包括兩個過程，一個是色氨酸分解反應，一個是吲哚反應。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（2）試驗方法先找取3支胰蛋白水培養基，分別編號，1號接種大腸桿菌，2號接種產氣桿菌，第3支接未知菌；然后將三個培養基放于37℃培養箱中培養1~2天；培養完成后，沿試管壁滴加數滴吲哚試劑于培養物液面，觀察結果。若結果呈現玫瑰紅色，則為陽性反應，記吲哚試驗陽性；若結果無紅色者，則為陰性反應，記作吲哚陰性。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（2）試驗方法先找取3支胰蛋白水培養基，分別編號，1號接種大腸桿菌，2號接種產氣桿菌，第3支接未知菌；然后將三個培養基放于37℃培養箱中培養1~2天；培養完成后，沿試管壁滴加數滴吲哚試劑于培養物液面，觀察結果。若結果呈現玫瑰紅色，則為陽性反應，記吲哚試驗陽性；若結果無紅色者，則為陰性反應，記作吲哚陰性。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（2）試驗方法與結果①瓊脂穿刺法培養基為三糖鐵培養基、含硫酸亞鐵(或醋酸鉛)的半固體培養基兩種。操作方法：將試驗細菌用接種針沿著管壁穿刺接種到含醋酸鉛或硫酸亞鐵培養基中，經37℃培養24h-48h后，觀察結果。結果：培養基變成黑色則為陽性。當產生硫化氫量少時，為了便于觀察結果，在穿刺接種培養時，一定要沿培養基管壁進行。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（2）試驗方法與結果②醋酸鉛試紙法培養基為含胱氨酸的半固體培養基，還需要準備一個浸有醋酸鉛的濾紙條。操作方法：待檢菌穿刺接種培養基，懸掛醋酸鉛紙條，于37℃培養箱中培養24h-48h。結果：如果試紙呈現黑色，則為陽性。此方法比較敏感。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法3.尿素酶（Urease）試驗（2）試驗方法挑取大量培養18h~24h的待試菌，濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上，不要到達底部，留底部作變色對照。在培養2h、4h和24h三個時間點時，分別觀察一次結果。如果培養基變為粉紅色則為陽性，顏色不變者即為陰性。倘若初步判斷為陰性，則應該繼續培養至4天，作最終判定。02氨基酸和蛋白質代謝試驗法（3）尿素瓊脂培養基的制備①成分蛋白胨1g，瓊脂20g，氯化鈉5g，葡萄糖1g，磷酸二氫鉀2g，0.4%酚紅溶液3mL，20%尿素溶液100mL，蒸餾水1000mL。pH7.2±0.1②培養基的配制在蒸餾水或去離子水100mL中，加入上述所有成分（除尿素和瓊脂外），混合均勻并校正pH，121℃滅菌15min。冷至50～55℃，加入經除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%，最終pH應為7.2±0.1。03呼吸酶類試驗（三）呼吸酶類試驗1.氧化酶試驗（1）試驗原理氧化酶使細胞色素C氧化，氧化型細胞色素C再使鹽酸二甲基對苯二胺氧化，生成由玫瑰紅色變成暗紫色的醌類化合物，它再和α-萘酚結合生成吲哚酚藍。03呼吸酶類試驗（三）呼吸酶類試驗（2）試驗方法用滴管直接滴加1%鹽酸二甲基對苯二胺試劑在培養物上，滴加量為1-2滴；再加入1%α-萘酚-乙醇液1-2滴，于30秒內判定試驗結果。如果在30秒內呈現藍色反應，則為陽性，記作+；如果不變色或為粉紅色者，為陰性，記作-。03呼吸酶類試驗2.過氧化氫酶試驗（1）原理某些細菌能夠分泌過氧化氫酶，當加入過氧化氫以后，可將過氧化氫分解生成水和氧氣，產生氣泡，此為陽性反應。03呼吸酶類試驗2.過氧化氫酶試驗（2）試驗方法取下固體培養基上的新鮮菌落一環，放置在一個干凈玻璃片上或者試管上，向其上滴加3%過氧化氫液數滴，立即觀察結果。若產生氣泡，就是陽性，記為+，若不產生氣泡，則為陰性，記-。03呼吸酶類試驗3.硝酸鹽還原試驗（1）原理某些細菌具有還原硝酸鹽的能力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。在酸性條件下，亞硝酸鹽可以生成亞硝酸，亞硝酸與對氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，而重氮苯磺酸又與α-萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色反應，為陽性反應。03呼吸酶類試驗（2）試劑A試劑是對氨基苯磺酸試劑：將對氨基苯磺酸0.8g，溶解于2.5mol/L，乙酸溶液100mL中；B試劑是α-萘胺試劑：將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。03呼吸酶類試驗（3）試驗方法取新鮮的純培養物待檢菌，接種在硝酸鹽培養基上，于36±1℃培養箱中培養1~4天，每天取2mL培養液，加入等量的A、B試劑混合物各二滴，混和均勻，立即觀察結果。若結果是紅色，則為陽性，記+；若無紅色出現，即為陰性，記-。03呼吸酶類試驗4.氰化鉀試驗（1）原理氰化鉀是細菌呼吸酶系統的抑制劑，它能與呼吸酶作用，讓酶失去活性，從而抑制細菌的生長，但有的細菌在一定濃度的氰化鉀存在時，仍能生長，依此來鑒別細菌。03呼吸酶類試驗4.氰化鉀試驗（2）試驗方法取下1環已培養20h~24h的營養肉湯培養液，將其接種到對照培養基及氰化鉀培養基內，立即用橡膠塞塞緊，放置于36±1℃培養箱中，培養24h~48h，觀察結果。當對照管中有菌生長，同時試驗管也有菌生長時，為陽性，記作+；當對照管中有菌生長，而試驗管中無菌生長為陰性，記作-。04毒性酶類試驗1．溶血試驗（1）原理某些細菌在代謝過程中能產生溶血素，可使人或動物的紅細胞發生溶解，不同的細菌有不同的溶血反應，借此可鑒別細菌。（2）試驗方法方法有平板法和試管法兩種，這里只介紹試管法。先把待檢菌培養液與2%的羊血球等量混合，然后于36±1℃培養16h-18h，觀察其結果。如果溶血，培養液可出現透明狀，即為陽性，記作+；如果無溶血現象，則為陰性，記作-。04毒性酶類試驗2．血漿凝固酶試驗（1）原理致病性葡萄球菌能產生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉變成纖維蛋白，附著在細菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發生凝固現象，為陽性。04毒性酶類試驗2．血漿凝固酶試驗（2）試驗方法以試管法為主。即找滅菌小試管3支，向三個試管中各加入1:1體積的血漿－無菌水0.5mL，1支加入被檢菌株的營養肉湯培養液0.5mL；其余2支作對照管，其中一支加入金黃色葡萄球菌的營養肉湯培養液0.5mL作陽性對照；另一支加入0.9％氯化鈉溶液0.5mL作空白對照。將3個試管同時放在37℃恒溫箱或水浴中培養，每0.5h觀察一次，4h內無凝固現象者，觀察直至24小時。04毒性酶類試驗2．血漿凝固酶試驗（3）試管法的結果觀察與記錄空白對照管的血漿流動自如，陽性對照管血漿凝固。若試驗管血漿凝固，則為陽性；如果三管均無凝固現象，即為陰性。本試驗法所用到的試劑和培養基在血清學反應里介紹過，此處不再贅述。6.物質的量濃度溶液的配制目錄/Contents1物質的量濃度溶液的配制物質的量濃度溶液的配制01物質的量濃度溶液的配制（1）計算與稱量所稱固體質量或量取液體的體積，用托盤天平或電子天平稱量固體或用量筒量取液體。（2）溶解或稀釋在燒杯中溶解，并用玻璃棒攪拌。（3）轉移待溶液冷卻到室溫，將燒杯中的溶液沿玻璃棒注入容量瓶中。01物質的量濃度溶液的配制（4）洗滌用少量蒸餾水洗滌燒杯內壁和玻璃棒2~3次，并把洗滌液全轉移到容量瓶中。（5）定容向容量瓶中加入蒸餾水，在距離刻度2~3cm時，改用膠頭滴管滴加蒸餾水至凹液面的最低點與刻度線相平。（6）搖勻并貼簽蓋好瓶塞，把容量瓶倒轉和搖動多次，使得溶液混合均勻。貼好標簽，并注明溶液的名稱和濃度。01物質的量濃度溶液的配制物質的量濃度溶液的配制關鍵程序01物質的量濃度溶液的配制操作程序：以配制0.5mol·L－1的NaCl溶液250mL為例01物質的量濃度溶液的配制（4）洗滌用少量蒸餾水洗滌燒杯內壁和玻璃棒2~3次，并把洗滌液全轉移到容量瓶中。（5）定容向容量瓶中加入蒸餾水，在距離刻度2~3cm時，改用膠頭滴管滴加蒸餾水至凹液面的最低點與刻度線相平。（6）搖勻并貼簽蓋好瓶塞，把容量瓶倒轉和搖動多次，使得溶液混合均勻。貼好標簽，并注明溶液的名稱和濃度。01物質的量濃度溶液的配制3．誤差分析配制溶液時能引起誤差的一些操作7.血清學反應試劑制備目錄/Contents1基本概念pH指示劑的配制技術血清學鑒定2血清學反應常用試劑和培養基的制備301基本概念血清是指血液凝固析出的淡黃色透明液體。血清蛋白是指為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。血清學檢驗就是利用抗原-抗體反應的顯著特異性，進行細菌的鑒別和血清學定型。細菌菌體或鞭毛等抗原的特異性抗體的存在，使得人們可以建立一些快速方法來檢測以食品為載體的病原。01基本概念血清學檢驗指根據抗原與相應的抗體在適宜的條件下，能在體外發生特異性結合的原理，在體外用已知抗體（或抗原）檢測抗原（或抗體）。01基本概念

2.血清學反應的一般特點（1）抗原抗體的結合具有特異性，當有共同抗原體存在時，會出現交叉反應。（2）抗原抗體的結合是分子表面的結合，這種結合雖相當穩定，但是可逆的。01基本概念

2.血清學反應的一般特點（3）抗原抗體的結合是按一定比例進行的，只有比例適當時，才能出現可見反應。（4）血清學反應大體分為兩個階段進行，但其間無嚴格界限。反應速度慢，需幾分、幾十分以至更長時間。01基本概念3.血清學檢驗的類型血清學試驗可分為血清學鑒定和血清學診斷兩部分。血清學試驗既可定性，又可定量。用已知抗體（即含特異抗體的免疫血清或單克隆抗體等）檢測標本中或分離培養物中未知細菌的種、型或細菌抗原，稱為血清學鑒定；而用已知細菌或特異性抗原檢測患者血清中有無相應抗體及其效價的動態變化，作為某些感染性疾病的輔助診斷，稱為血清學診斷。02血清學鑒定1．凝集反應（1）直接凝集反應①玻片凝集法方法是取已知抗體（診斷血清）滴加在載玻片上，直接從培養基上刮取待檢菌混勻于診斷血清中，數分鐘后，如出現細菌凝集成塊或肉眼可見的顆粒，即為反應陽性。02血清學鑒定1．凝集反應（1）直接凝集反應②試管凝集法此法是一種定量試驗方法。多用已知抗原來檢測血清中有無相應抗體及其含量。常用于協助診斷某些傳染病及進行流行病學調查。02血清學鑒定（2）間接凝集反應法此反應法是指將可溶性抗原或抗體吸附于某種與免疫無關一定大小的顆粒載體表面，制成致敏載體，再與相應抗體或抗原作用，在電解質存在的適宜條件下，被動地使致敏載體凝集的反應。02血清學鑒定（2）間接凝集反應法間接凝集反應主要可分為正向間接凝集試驗