ICS65.020.30DB12B41天津市地方標準DB12/T987—2020鮮、凍畜禽肉中磺胺類、喹諾酮類和四環素類獸藥殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法Determinationofresiduesofsulfonamides,quinolonesandtetracyclinesinfreshandfrozenmeatoflivestockandpoultrybyliquidchromatography-tandemmassspectrometry天津市市場監督管理委員會發布DB12/T987—2020前言本標準依據GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由天津市農業農村委員會提出并歸口。本標準起草單位：天津市農業質量標準與檢測技術研究所、摩天眾創（天津）檢測服務有限公司。本標準主要起草人：李娜、林宏芳、邵輝、李輝、劉磊、張玉婷、郭永澤、繩慧珊、盧娜、馮兆欣、郝玉杰、潘喆。IDB12/T987—2020鮮、凍畜禽肉中磺胺類、喹諾酮類和四環素類獸藥殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法1范圍本標準規定了鮮、凍畜禽肉中磺胺類、喹諾酮類和四環素類獸藥殘留量的測定-液相色譜-串聯質譜法的方法提要、試劑和材料、儀器和設備、試樣制備與保存、測定步驟、靈敏度、準確度和精密度。本標準適用于鮮、凍畜禽肉中磺胺類、喹諾酮類和四環素類共28種獸藥殘留的測定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3方法提要試樣經酸化乙腈提取，提取液濃縮、甲醇定容后，用液相色譜-串聯質譜儀（LC-MS/MS）測定，基44.1基本要求1DB12/T987—20204.3.1氫氧化鈉溶液（1mol/L）：稱取4.0g氫氧化鈉，用水溶解并定容至100mL。4.3.2氫氧化鈉溶液（0.03mol/L）：稱取0.12g氫氧化鈉，用水溶解并定容至100mL。4.3.3Na2EDTA-McIlvaine緩沖溶液（0.1mol/L）：稱取12.9g檸檬酸，10.9g磷酸氫二鈉，37.2g乙二胺四乙酸二鈉，加900mL水溶解，用1mol/L氫氧化鈉溶液調pH值至4.0，加水定容至1000mL。4.3.40.1%甲酸水：移取0.1mL甲酸加入100mL水中，混勻。4.3.50.1%甲酸甲醇：移取0.1mL甲酸加入100mL甲醇中，混勻。4.3.6甲醇-0.1%甲酸（10:90，V:V）：移取10mL甲醇加入90mL0.1%甲酸水溶液中，混勻。4.4標準品磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺異惡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、麻保沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、二氟沙星、噁喹酸、氟甲喹、土霉素、金霉素、強力霉素標準品：純度≥98.0%；環丙沙星純度≥95.0%，(達氟)單諾沙星純度≥94.0%，沙拉沙星純度≥95.0%，四環素純度≥96.5%。4.5標準溶液配制4.5.1標準儲備溶液（1000mg/L）：準確稱取10mg各獸藥標準品，根據標準品的溶解性不同，磺胺類、四環素類獸藥用乙腈溶解并定容至10mL，喹諾酮類獸藥先用2mL氫氧化鈉溶液溶解，甲醇定容至10mL，于-18℃避光保存，有效期1年。4.5.2標準工作溶液：分別吸取28種獸藥標準儲備液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈稀釋并定容，配制成濃度為10mg/L的混合標準工作液，于4℃避光保存，有效期1個月。4.6.1十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）：40~60μm。氨基硅烷化硅膠（NH2）：40~60μm。4.6.3微孔濾膜（有機相）：0.22μm。56鮮、凍畜禽肉類樣品剔去毛、淤血、骨等，取縮分后樣品，用勻漿機搗碎成肉糜狀，混勻，裝入清潔容器內，密封并標識。用冷凍畜禽肉類樣品在室溫下自然解凍至稍微變軟，且凍水未流出待制備。2DB12/T987—20206.2試樣保存試樣應在-18℃條件下保存。7測定步驟7.1樣品前處理準確稱取試樣2.00g（精確至0.02g）于50mL聚丙烯塑料離心管中，加入2mL0.1mol/LNa2EDTA-McIlvaine緩沖溶液，3mL乙腈，渦旋2min，4000r/min離心5min，收集上清液于另一50mL離心管中，殘渣加5mL乙腈，渦旋2min，4000r/min離心5min，合并上清液于上述50mL離心管中。于上清液中依次加入200μL乙酸，1g氯化鈉，渦旋1min，4000r/min離心5min，取上層乙腈相2mL于10mL聚丙烯塑料離心管中，加入C18和NH2吸附劑各100mg，渦旋1min，4000r/min離心5min，取上清液，氮氣吹干。殘渣用1mL甲醇-0.1%甲酸水（10:90，V:V）定容，過0.22μm有機濾膜。7.2測定7.2.1液相色譜條件如下：——色譜柱：AcquityBEHRP18柱(2.1×100mm，1.7μm)；——流動相：A相：0.1%甲酸甲醇；B相：0.1%甲酸水；梯度洗脫條件見表1。——進樣量：10μL；——柱溫：30℃。表110111214a7.2.2質譜條件如下：——電離源：電噴霧正離子(ESI+)；——毛細管電壓：3.0kV；3DB12/T987—2020液相色譜-串聯質譜法對樣品定性確證須滿足以下要求：——待測樣品的保留時間在外標標準樣品的保留時間的±2.5%之內；——定性離子的信噪比大于3（S/N>3）；——與外標標準品相比，樣品的兩個特征離子相對豐度在表2規定的許可范圍內。28種獸藥的多反應監測（MRM）色譜圖參見附錄B。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度比（%）＞50允許的最大偏差（%）±20±25±30±50＞20～50＞10～20≤107.4定量采用外標法定量。用色譜數據處理軟件或按公式（1）計算試樣中的目標物含量（μg/kg）：AV3V..................................(1)1sAV2ms式中：ω——試樣中目標物的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；ρs目標物標準工作溶液的濃度，單位為微克每升（μg/L）；A試樣測定液中目標物定量離子的峰面積；As標準工作溶液中目標物定量離子的峰面積；V1提取溶液中乙腈的總體積（mL）；8靈敏度28種獸藥的檢測限在0.5μg/kg～3.0μg/kg之間。磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺異惡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、麻保沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、單諾沙星、環丙沙星、恩諾沙星、二氟沙星、沙拉沙星、噁喹酸、氟甲喹的定量限為5.0μg/kg，四環素、土霉素、金霉素和強力霉素的定量限均為10.0μg/kg。94DB12/T987—20209.1.1鮮、凍畜禽肉中磺胺類和喹諾酮類獸藥在5μg/kg～50μg/kg添加水平，回收率在70%～110%之間；9.1.2鮮、凍畜禽肉中四環素類獸藥在10μg/kg～50μg/kg添加水平，回收率在70%～110%之間。9.2精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。5DB12/T987—2020AA附錄A（資料性附錄）28種獸藥檢測表A.128種獸藥中英文名稱、保留時間、質譜檢測條件和定量限保留時間定性離子對定量離子對錐孔電壓碰撞能量檢測限定量限名稱(min)(m/z)(m/z)(V)(V)(μg/kg)(μg/kg)磺胺醋酰Sulfacetamide磺胺嘧啶215/155.8;215/104.154.524.874.995.385.385.946.036.176.156.636.826.776.82215/155.8251/155.8182525202530253030253025303012;2318;2815;1614;2120;1620;2319;2524;3116;2015;2520;2428;4525;2025;331.21.31.01.50.51.22.80.50.53.01.01.51.01.05.05.05.05.05.05.0107.7251/155.8;251/107.7Sulfadiazine磺胺吡啶250.2/155.8;250.250.2/155.Sulfapyridine磺胺噻唑2/1848256.2/107.8;256.256.2/107.sulfathiazole磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine麻保沙星2/155.8265/155.8;265/171.88265/171.8363.1/320.1;363.363.1/320.362/318.2;362/261.1Ofloxacin320.1/276.1;320.320.1/302.358.1/340.1;358.358.1/340.332.1/314.1;332.332.1/314.5.06DB12/T987—2020磺胺甲噻二唑Sulfamethizole二氟沙星271.2/107.8;271.271.2/155.6.807.377.8722353522;1325;2424;350.80.50.55.05.05.02/155.88400/382;400/356400/382Difloxacin沙拉沙星386/368;386/299386/368Sarafloxacin磺胺氯噠嗪285/155.8;285/107.7Sulfachloropyridazine8.13285/155.82420;301.25.0磺胺甲噁唑254/155.8;254/107.78.248.77254/155.8479/444253520;2520;250.83.05.010Sulfamethoxazole金霉素479/462;479/444Chlortetracycline磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine281/155.8;281/107.78.70281/155.83018;251.35.0磺胺異惡唑268.3/107.8;268.268.3/155.9.1611.4811.6011.7811.9212.0122252732282526;1320;3522;4325;3515;2520;370.82.51.21.01.00.55.010sulfisoxazole強力霉素3/155.88445/428;445/154445/428Doxycycline噁喹酸301/155.7;301/107.77DB12/T987—2020BB附錄B（資料性附錄）28種獸藥的多反應監測（MRM）色譜圖4.1215>155.8(SA)2.39e95%-2.02.02.02.04.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.012.012.012.04.1215>107.7(SA)1.49e9%-4.06.04.54.5251>155.8(SD)1.50e9%-4.04.06.006.00251>107.7(SD)1.89e9%-4.812.04.94.98DB12/T987—20209%-5.35.35.35.3265>171.8(SM1)1.63e2.04.04.04.04.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0265>155.8(SM1)1.09e9%-2.012.09%-5363.1>345(MAR)6.27e2.002.0012.09%-5363.1>320.1(MAR)8.14eTim6.012.05.9445>427(TC)5.40e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.05.98.08.08.08.010.010.010.010.012.0445>410(TC)1.01e9%-5.011.46.06.012.09%-5.59DB12/T987—20206.66.6320.1>302.1(NOR)3.43e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0320.1>276.1(NOR)1.98e9%-12.06.8358.1>340.1(DAN)2.63e9%-12.06.86.7358.1>81.6(DAN)2.48e9%-7.1Tim12.0332.1>314.1(CIP)2.29e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0332.1>288.1(CIP)1.03e6.76.89%-12.06.8281>155.8(SMP)2.82e281>107.7(SMP)3.44e10DB12/T987—20207.37.3400>382(DIF)3.79e9%-2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.010.010.010.012.012.012.012.0400>356(DIF)3.26e9%-8.07.8386>368(SAR)2.54e9%-8.07.8386>299(SAR)1.12eTim9%-2.02.02.02.02.04.04.04.04.04.06.06.06.06.06.08.010.010.010.010.010.08.1285>155.8(SCP)2.09e9%-8.012.08.1285>107.7(SCP)2.76e9%-8.012.08.2254>155.8(SMZ)1.43e9%-8.29%-9%-281>155.9(SMM)6.48e9%-281>107.8(SMM)1.67eTim9%-11DB12/T987—20209.19.1268.3>155.8(SIZ)2.69e9%-2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.08.08.010.010.010.012.0268.3>107.8(SIZ)7.41e9%-12.011.4445>428(DC)4.08e9%-12.011.4445>154(DC)2.74e8%-1Tim2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.08.08.010.010.010.012.012.0262>244.1(