第2節微生物的培養技術及應用

第1課時微生物的基本培養技術

課標內容(1)概述培養基的配制方法和微生物純培養的基本操作要求。(2)掌握無

菌技術的操作。(3)掌握酵母菌純培養的方法及步驟。

一?自主梳理?一

知識點1培養基的配制

1.培養基的概念、用途和類型

年、人們按照微生物對營養物質的不同需求,

用空k配制出供其生長繁殖的營養基質

加1嗪、用以培養、分離、鑒定、保存微生物或積

累其代謝物病彖—包上生生

........*冶，不能用普威塔,基來塔養

I按物/雌培養基不能梃仔

理性｛[(加入凝固劑，如睡4能量白磐

質分I固體培養基為物慶

2.培養基的配方

(1)主要營養物質：水、碳遮、氮源、無機鹽。

(2)其他條件：pH、特殊營養物質和氧氣。如下表:

厭氧微

微生物乳酸桿菌霉菌細菌

生物

特殊pH調至中性或

添加維生素pH調至酸性無氧

需求弱堿性

知識點2無菌技術

1.獲得純凈的微生物培養物的關鍵：防止雜菌污染。

2.消毒和滅菌

:消毒；：滅菌；

VV

較為溫和的物理、

強烈的理化方法

化學或生物等方法強度I

殺死物體表面或內殺死物體內外

部一部分微生物【程度1所有微生物

一般不能殺滅能殺滅

微生物培養的器

操作的空間、操作1適用

1皿、接種用具和

者衣著和雙手對象

1培養基等

濕熱滅菌、

煮沸消毒法、巴氏常用

1干熱滅菌、

消毒法等一、，方法」

▼------灼燒滅:菌等

還有化學藥物消毒法、箸外保通寺法—

3.注意事項

(1)實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。

⑵為了避免周圍環境中微生物的污染，接下來的許多操作都應在超凈工作臺上并

在酒精燈火焰附近進行。

知識點3微生物的純培養

1.純培養的概念

在微生物學中，將接種于培養基內，

［培養物卜在合適條件下形成的含特定種類微生

物的群體

I-----------

［純培養物卜由單一個體繁殖所獲得的微生物群體

［純.養卜獲得純培養物的過程

2.純培養的過程(以酵母菌為例)

包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟o

(1)制備培養基

「配制、

拼養基,稱取一煮沸一過濾一加瓊脂一定容

培養基:高壓蒸汽滅菌

cikx培養皿:干熱滅菌

電三度)一如下圖

通日均送入苗，防止粗D的微■生物污求培條塞

①拔出錐形

②將瓶

瓶的棉塞

口迅速

在酒精町通過火

火焰24r'、\炮

①②

-------3：-

③用拇指和食\

指將培養皿打

開一條稍大于④等待培養基冷卻

瓶口的縫隙,凝固后，將培養皿

將培養基(1。~鰻士放置J

20mL)倒入培養皿,立即蓋防止泠淤水■滴落以培

上皿蓋為基上引疾污策

(2)平板劃線法接種和分離酵母菌

__通過接種環在固體培養基表面連續劃線

篇度A的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到

小、培養基的表面。經數次劃線后培養，可

質自以分離得到單菌落

I步驟＞

①將接種環放②在火焰旁冷卻接③將試

在火焰上灼燒,種環。同時，拔出管口通

直到接種環的裝有酵母菌培養液過火焰

金屬絲燒紅的試管的棉塞

注意4、字充儂培梟界表面

⑥在火焰附近將培養皿打⑤將試管

④在火焰

開一條縫隙，用接種環在口通過火

培養基表面迅速劃三至焰，并塞附近用接

五條平行線，蓋上皿蓋上棉塞種環蘸取

一環菌液

以免接種環溫度太高，余見苗種V

⑦灼燒接種環，待其途卻后,從第一：

■諭次劃線的末端開始作第二次劃線。重：

談夕復以上操作，作第三、四、五次劃線i

“注意不累將最啟一次的訓保與第一次的對保相連：

(3)培養酵母菌

將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養箱中培養

24?48ho

國自查自糾,

(1)在固體培養基中加入少量水即可制成液體培養基。(X)

提示：固體培養基中添加了凝固劑，加少量水不能制成液體培養基。

(2)實驗室培養硝化細菌時，培養基無須加入有機碳源。(?)

提示：硝化細菌為自養型生物，可以二氧化碳為碳源合成有機物。

(3)滅菌相比消毒對微生物的殺滅更徹底(J)

(4)只要是沒有生物活性的材料均可進行高壓蒸汽滅菌(X)

提示：沒有生物活性的材料不一定要用高壓蒸汽滅菌法滅菌，如玻璃器皿可用干

熱滅菌法滅菌。

(5)倒平板時，將滅過菌的培養皿放在酒精燈火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養基

的錐形瓶，左手拔出棉塞。(J)

(6)進行平板劃線操作時，第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生

物污染培養物。(J)

-----?合作探究?-----

一、培養基的配制

【情境探疑】

1.下表是某培養基的配方，分析回答：

材料牛肉膏蛋白陳NaCl瓊脂水

用量5g10g5g20g定容至1000mL

(1)根據培養基的物理性質，該培養基屬于哪類培養基，理由是什么？

提示：固體培養基，因為該培養基的配方中含有凝固劑瓊脂。

⑵該培養基中提供碳源和氮源的物質是什么？屬于有機物還是無機物？為什么

培養基需要氮源？

提示：該培養基中牛肉膏和蛋白腺提供碳源和氮源。二者均屬于有機物。培養基

中的氮元素是微生物合成蛋白質、核酸等物質必需的。

⑶該培養基培養的微生物同化作用類型是理由是什么？

提示：異養型微生物該微生物的碳源和氮源是有機物。

2.培養微生物時，培養基中是否必須有碳源和氮源？

提示：不一定。例如，培養自養型微生物時，一般不需要添加碳源，微生物可以

利用空氣中的二氧化碳；培養固氮微生物時，一般不需要添加氮源，微生物可以

利用空氣中的氮氣。

3.下表是某微生物培養基的成分，請分析該培養基可用來培養哪種微生物？若除

去①，此培養基可用來培養圓褐固氮菌嗎？

編號①②③④⑤

(NH4)2SO4

成分KH2P。4FeSO4CaChH2O

含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL

提示：此培養基可用來培養自養型微生物。若除去①圓褐固氮菌雖可以固氮，但

其同化作用類型為異養型，培養基中必須提供含碳有機物，所以該培養基不能用

來培養圓褐固氮菌。

0歸納提升

1.幾種微生物的營養和能量來源

（微生物；:.碳源;；氮源::能源：

VVVV

|藍細菌〉

CO2NH：、NO;等光能

1

CO2NH3NH‘3的氧化

''->?氮微生物

|根瘤菌糖類等有機物N2有機物

顯5?饕后鼠蛋白質等有機物

1---------1質等有機物

2.巧記培養基的種類和作用

按物理狀態分類

:種類：（用途］

、____,

v▼V

不加凝固劑I液體培養基）工業生產

加凝固劑半固體觀察微生物的運動

（如瓊脂）培養基分類鑒定

微生物的分離、鑒

加凝固劑

［固體培養基）定，活菌計數，菌

（如瓊脂）

種保藏等

【典例應用】

例1下列有關培養基的敘述，錯誤的是（）

A.微生物的培養都需要提供水、有機碳源、有機氮源、無機鹽，缺一不可

B.微生物在固體培養基上生長時，可以形成肉眼可見的菌落

C.在培養細菌時，需要將培養基調至中性或弱堿性

D.培養基既能培養細菌，也能培養真菌

答案A

解析并非所有微生物的培養基中都必須含有碳源、氮源，培養自養型微生物不

需要有機碳源，固氮微生物不需要有機氮源，A錯誤。

例2（2023?江蘇徐州高二檢測）不同的微生物對營養物質的需求各不相同。下列有

關一種以CO2為唯一碳源的自養型微生物所需營養的描述中，錯誤的是（）

A.氮源物質為該微生物提供必要的氮元素

B.碳源物質也是該微生物的能源物質

C.無機鹽是該微生物不可缺少的營養物質

D.水是該微生物的營養要素之一

答案B

解析微生物生長繁殖需要氮源，氮源物質為該微生物提供必要的氮元素，A正

確；該碳源物質是CO2,屬于無機物，不能作為微生物的能源物質，B錯誤；無

機鹽是微生物生長繁殖不可缺少的營養物質，C正確；生物的生命活動離不開水，

水是該微生物的營養要素之一，D正確。

二、無菌技術

【情境探疑】

1.常用酒精擦拭雙手是預防新冠感染的日常防護措施之一，這是消毒還是滅菌？

體積分數為70%和95%的酒精，哪種效果更好？為什么？

提示：酒精擦拭屬于消毒。酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好。濃度過高，

使菌體表面蛋白質凝固成一層保護膜，酒精分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌

能力減弱。

2.對培養基、培養皿、接種環、實驗者的雙手、空氣和牛奶常采用的滅菌或消毒

方法分別是什么？

提示：分別為高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學藥物消毒、紫外線消毒、

巴氏消毒法。

3.消毒和滅菌的原理是什么？能否殺死所有的微生物？

提示：消毒和滅菌都是使微生物的蛋白質變性，借此殺死微生物。滅菌可殺死處

理材料中的全部微生物（包括芽抱和抱子），而消毒僅殺死部分微生物（一般不包括

芽抱和抱子）。

國歸納提升

消毒和滅菌的主要方法及應用范圍

項目主要方法應用范圍

63?65℃消毒30min或

牛奶、啤酒等不耐高溫的

巴氏消毒法72?76°C處理15s或

消液體

80—85°C處理10-15s

分

煮沸消毒法100℃煮沸5-6min家庭餐具等生活用品

接種室、接種箱或超凈工

紫外線消毒紫外線照射30min

作臺

用體積分數為70%~75%皮膚、傷口、動植物組織

化學藥物消毒的酒精、氯氣、苯酚或煤

酚皂溶液等處理表面消毒和空氣、水消毒

涂布器、接種環、接種針

直接在酒精燈火焰的充分

灼燒滅菌或其他金屬用具、試管口

滅燃燒層灼燒

或瓶口等

菌

耐ISJ溫的和需要保持干燥

160―170℃的熱空氣中

干熱滅菌的物品，如玻璃器皿、金

維持2?3h

屬用具等

高壓蒸汽滅菌100kPa、121℃維持15―

培養基及多種器材、物品

（濕熱滅菌）30min

【典例應用】

例3（2023?杭州高二檢測）在微生物的培養和分離實驗操作中，無菌操作是實驗成

功的關鍵，下列可能造成污染的措施是（）

A.實驗操作者雙手用體積分數為70%的酒精消毒

B.試管高壓蒸汽滅菌時加脫脂棉花

C.在超凈臺上完成操作

D.接種環需要灼燒滅菌

答案B

解析實驗操作者雙手用體積分數為70%的酒精消毒，可防止雜菌污染，A不符

合題意；試管用高壓蒸汽滅菌法滅菌前要加棉花堵塞，但不能用脫脂棉花，因脫

脂棉易吸水，容易引起雜菌污染，B符合題意；在超凈臺上完成操作，可防止雜

菌污染，C不符合題意；接種環需要灼燒滅菌，可保證接種時不會引起雜菌污染，

D不符合題意。

例4(多選)防止外來雜菌的入侵，獲得純凈的培養物，是研究和應用微生物的前

提。下列敘述錯誤的是()

A.實驗室里可以用紫外線或化學藥劑進行消毒

B.接種環、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌

C.在實驗室中，切記不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，防止被微生

物感染

D.使用后的培養基丟棄前一定要進行消毒處理，以免污染環境

答案BD

解析實驗室里可以用紫外線或化學藥劑進行消毒，A正確；灼燒滅菌應該在酒

精燈火焰的外焰部位灼燒，B錯誤；為防止被微生物感染，切記不可在實驗室中

吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，C正確；使用后的培養基丟棄前一定

要進行滅菌處理，以免污染環境，D錯誤。

三、微生物的純培養

【情境探疑】

1.結合倒平板的操作程序請探究：

圖一圖二

(1)如圖一所示，為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

提示：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。

(2)如圖二所示，從防止雜菌污染的角度思考，為什么培養基冷卻凝固后將平板倒

置？

提示：可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成雜菌污染。

(3)培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。可用什么辦法來

估計培養基的溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。

2.下圖是平板劃線操作的示意圖，據圖回答下列問題：

(1)用字母和箭頭表示平板劃線操作的正確步驟：

提不：d—b—f—a—e—c—h-go

⑵為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束

時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？請完善下方的表格。

灼燒時期目的

取菌種前殺死接種環上原有的微生物

殺死上次劃線時殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來源于上次

每次劃線前劃線的末端,從而使每次劃線時菌種數目逐漸減少,直至得到單個

細菌

接種結束后殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者

(3)在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

提示：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末

端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細

菌繁殖而來的菌落。

(4)接種結束后，為什么要將一個未接種的培養基和一個已接種的培養基放在一起

培養，未接種的培養基表面如果有菌落生長，說明了什么？

①②

將接種后的平板①和一個

未接種的平板②倒置，

放入28C左右的恒溫培

養箱中培養24~48h

提示：培養未接種培養基的作用是對照，若未接種的培養基在恒溫箱中保溫1?2

d后無菌落生長，說明培養基的制備是成功的。若有菌落形成，說明培養基滅菌

不徹底，或培養基被污染了，需要重新制備。

度歸納提升

1.倒平板操作的注意事項

(1)培養基滅菌后需要冷卻至50℃左右時才能倒平板。溫度過高會燙手，且培養

基凝固后皿蓋上凝結的冷凝水過多，易落入培養基造成污染；溫度過低，培養基

會凝固。

(2)將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養基。

(3)培養基冷卻凝固后，要將培養皿倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水落入培養基，

造成污染。

(4)在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平

板應棄用，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生。

(5)整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。

2.平板劃線操作的注意事項

(1)蘸取菌液前及每次劃線后都需灼燒接種環，劃線操作結束后仍需灼燒接種環，

每次灼燒的目的不完全相同。

(2)灼燒接種環后，要等其冷卻后才能伸入菌液中或進行劃線，以免溫度過高而殺

死菌種。

(3)最后一次的劃線不要與第一次的劃線相連，否則無法達到純化效果。

(4)劃線時的力度大小應適宜，防止因用力過大而將培養基劃破。

(5)接種環蘸取菌液前后，要將試管口通過火焰；劃線操作全程都要在酒精燈火焰

旁進行。

3.實驗結果的分析

(1)若未接種的培養基表面有菌落生長，則說明培養基被污染，應該重新制備；若

無菌落生長，則說明未被污染。

（2）在接種酵母菌的培養基上可觀察到獨立的菌落，這些菌落在顏色、形狀和大小

上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。

（3）若在培養基中觀察到不同形態的菌落，原因可能是菌液中混入了其他雜菌，或

在實驗操作過程中被雜菌污染。

【典例應用】

例5（多選）（2023?江蘇南京調研）下圖為實驗室培養和純化大腸桿菌過程中的部分

操作步驟，下列說法正確的是（）

①②③④

A.步驟①后需將培養基滅菌并調節pH

B.步驟①②③操作時需要在酒精燈火焰附近進行

C.步驟③到④的過程中，接種環共灼燒處理了6次

D.圖中步驟①結束后需倒置平板，④結束后不需要

答案BC

解析步驟①表示倒平板，培養基需要先調節pH后滅菌，冷卻后倒平板，A錯

誤；接種環在每次接種前和接種結束后都要通過灼燒來滅菌，所以步驟③到步驟

④的過程中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結束后還需灼燒滅菌1次，防止

造成污染，由此可見，步驟③到步驟④的過程中共需灼燒接種環6次，C正確；

步驟④操作結束后需在培養皿的底上做好標記并倒置后放入培養箱中進行培養，

D錯誤。

例6（2023?四川綿陽高二期中）在分離純化大腸桿菌實驗中，劃線接種（甲）、培養

結果（乙）如圖所示。有關敘述錯誤的是（）

甲乙

A.甲中a區域為劃線的起始位置

B.接種前應對培養基進行高壓蒸汽滅菌

C.接種過程中至少需要對接種環灼燒5次

D.連續劃線的目的是獲得單個細菌，以便形成單菌落

答案A

解析乙圖呈現的培養結果是：從d區域到a區域菌落逐漸減少，而形成單菌落

的區域是劃線的末端，所以a區域應為劃線的終點位置，A錯誤；在培養微生物

時必須進行無菌操作，培養基可通過高壓蒸汽滅菌來保證無菌，B正確；劃線前

后都要對接種環灼燒，共劃線4次，所以需要灼燒5次，C正確；平板劃線法是

分離單菌落的常用方法，劃線將細菌分散，到劃線的末端可以獲得單菌落，D正

確。

例7（2023?江蘇無錫高二期末）下列關于“酵母菌的純培養”實驗的敘述，錯誤的

是（）

A.馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養成分

B.接種環滅菌時，頂端的環和環后的部分柄均需通過火焰灼燒

C.平板劃線時，接種環應在固體培養基表面輕輕地連續劃線

D.完成平板劃線后，應將平板立刻倒置培養以免污染培養基

答案D

解析完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，再將平板倒置培養，D錯誤。

題后反思

1.培養基中微生物數目過多或連成一片的原因可能是什么？

提示：（1）菌液濃度過高。

（2）培養過程中被雜菌污染。

（3）利用接種環劃線時，每次劃線前未灼燒滅菌。

2.污染的培養基能否經過滅菌再次使用？

提示：不能，因為這可能導致營養物質發生變化，從而使培養基失去營養價值。

課堂小結?-

思維導圖晨讀必背

1.獲得純凈的微生物培養物的關鍵是防止雜菌污染。

2.消毒是指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死

物體表面或內部一部分微生物。滅菌是指使用強烈的理化

液體培養基虐消孑懸刎彼法?

固體培恭基陽培苗」毒、巴氏消毒法

源*:無咫西機機宮等*等卜養基1?S基i本r術S]干干「熱涉熱滅滅菌菌方法殺死物體內外所有的微生物，包括芽抱和抱子。

在劃線法1接種]馥L純培養灼燒火苗3.由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養物，獲

稀釋涂布平J-分離一~

板法

得純培養物的過程就是純培養。

4.菌落是分散的微生物在適宜的固體培養基表面或內部

繁殖形成的肉眼可見的，有一定形態結構的子細胞群體。

隨堂檢測

L關于培養基的配制，下列說法錯誤的是（）

A.在配制培養乳酸桿菌的培養基時，需加入維生素

B.微生物的適應性強，配制培養基時可以不考慮pH

C.雖然各種培養基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機鹽

D.配制培養基時要注意各種養分的濃度和比例

答案B

解析培養基除需要滿足碳源、氮源、水和無機鹽等幾種營養物質外，還需要滿

足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的需求，如培養乳酸桿菌時需要在培

養基中添加維生素，A正確，B錯誤；雖然各種培養基的具體配方不同，但一般

都含有碳源、氮源、水和無機鹽，C正確；不同微生物的生長對各種營養物質的

需求不用，配制培養基時要注意各種養分的濃度和比例，D正確。

2.（2023?山東濰坊高二檢測）下列關于培養基的敘述，正確的是（）

A.培養基是為微生物的生長繁殖提供營養的基質

B.培養基都含有水、碳源、氮源、無機鹽等

C.牛肉膏蛋白陳培養基屬于合成培養基，營養全面

D.微生物在培養基上生長，都需要將pH維持在中性

答案A

解析培養基是為微生物的生長繁殖提供碳源、氮源、水和無機鹽等營養的基質，

A正確；微生物培養基的主要營養物質有碳源、氮源、水和無機鹽等，有的自養

型微生物的碳源是二氧化碳，固氮菌的氮源是氮氣，此時培養基中不需要加碳源

或氮源，B錯誤；牛肉膏蛋白腺培養基屬于天然培養基，營養全面，C錯誤；不

同微生物生長的最適pH不同，如霉菌一般適合在酸性環境中生長，細菌一般適

合在中性或弱堿性環境中生長，D錯誤。

3.下圖為實驗室中酵母菌純培養的部分操作步驟，下列說法錯誤的是（）

①②③④

A.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行

B.步驟①中待倒入的培養基冷卻后蓋上培養皿的皿蓋

C.步驟③中，每次劃線前后都需對接種環進行滅菌處理

D.劃線接種結束后，將圖④平板倒置后放入培養箱中培養

答案B

解析由圖可知，①是倒平板，②是用接種環蘸取菌液，③是進行平板劃線，

④是培養。①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行，以防止雜菌污染，A正

確；倒完平板后應立即蓋上培養皿的皿蓋，冷卻后將平板倒過來放置，B錯誤；

第一次劃線前灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養基，除

第一次劃線外，每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘

留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而

通過增加劃線次數，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到單菌落，最后

一次劃線后也需要對接種環進行滅菌處理，C正確；劃線接種結束后，將平板倒

置后放入培養箱中培養，可以防止培養皿皿蓋上的水珠落入培養基造成污染，D

正確。

4.（多選）滅菌和無菌操作是獲得微生物純培養物的基礎，在接種、培養、分離酵母

菌時，下列操作錯誤的是（）

A.用浸泡在體積分數為70%的酒精中的涂布器直接涂布

B.將接種后的培養皿倒置在恒溫培養箱中培養酵母菌

C.為了防止污染，接種環經火焰灼燒滅菌后應趁熱快速挑取菌落

D.倒平板時，應將培養皿的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上

答案ACD

解析將浸泡在體積分數為70%的酒精中的涂布器拿出后還需要經過灼燒滅菌及

冷卻后才能進行涂布，A錯誤；將接種后的培養皿倒置在恒溫培養箱中培養酵母

菌，B正確；接種環經火焰灼燒滅菌之后還需要冷卻后才能挑取菌落，C錯誤；

倒平板時，用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養基（10?20

mL）倒入培養皿，立即蓋上培養皿的皿蓋，D錯誤。

課時精練

（時間：30分鐘）

【基礎對點】

知識點1培養基的配制

1.在制備牛肉膏蛋白腺固體培養基的過程中加入瓊脂這一理想的凝固劑，下列關

于瓊脂的說法，錯誤的是（）

A.不被所培養的微生物分解利用，對所培養的微生物無毒害作用

B.在微生物生長溫度范圍內保持固體狀態

C.瓊脂凝固點低，有利于微生物的生長

D.瓊脂在滅菌過程中不會被破壞，透明度好，凝固力強

答案C

解析瓊脂不會被微生物利用且對微生物無毒害作用，在滅菌過程中不會被破壞，

透明度好，凝固力強，A、D正確；瓊脂在水中加熱至98℃時開始熔化，溫度降

至44℃時才開始凝固，微生物生長最適宜的溫度范圍為16?30℃,所以瓊脂在

微生物生長溫度范圍內保持固體狀態，B正確；瓊脂的凝固點相對于微生物生長

的溫度較高，凝固劑的凝固點不能太低，否則不利于微生物的生長，C錯誤。

2.（2023?武漢高二期中）關于培養基的配制的說法，錯誤的是（）

A.配制培養基時要注意各種養分的濃度和比例

B.合適的培養基可實現分離、鑒定微生物等不同目的

C.在培養尿素分解菌的培養基中，尿素既是氮源也是碳源

D.不同培養基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和無機鹽

答案C

解析配制培養基時，要注意各種營養物質的濃度和比例，A正確；培養基有選

擇培養基、鑒別培養基和加富培養基等，可實現分離、鑒定微生物等不同目的，

B正確；在培養尿素分解菌的培養基中，尿素是唯一的氮源，培養基中添加葡萄

糖，葡萄糖作為碳源，c錯誤；微生物的營養物質主要包括碳源、氮源、水和無

機鹽等，D正確。

3.（2023?河北衡水中學高二檢測）下表是某同學培養微生物時配制的培養基，關于

此培養基的說法，錯誤的是（）

編號①②③④⑤

(NH4)2SO4

成分KH2P。4FeSO4CaChH2O

含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL

A.此培養基可用來培養自養型微生物

B.此表中的營養成分共有三類，即水、無機鹽、氮源

C.表中各成分的質量按照所培養的微生物的營養需要來確定

D.若除去①，此培養基可用于培養大腸桿菌

答案D

解析由表中成分可知，該培養基中未添加有機碳源，故此培養基可用來培養自

養型微生物，A正確；分析表格可知，表中的營養成分共有三類，即水、無機鹽、

氮源，B正確；培養基中各成分的質量按照所培養的微生物的營養需要來確定，

C正確；大腸桿菌是異養型生物，且不能固氮，因此培養大腸桿菌還需要添加有

機碳源，D錯誤。

知識點2無菌技術

4.（2023?江蘇南通高二期末）許多生物學實驗十分重視無菌操作，防止雜菌污染。

下列操作正確的是（）

A.對無菌室、超凈臺和實驗員可采用紫外線殺菌

B.家庭制作酸奶時，要將容器和鮮牛奶進行滅菌

C.加入培養基中的指示劑和染料不需要滅菌

D.灼燒滅菌法殺死微生物的營養體和芽抱

答案D

解析對無菌室、超凈臺可采用紫外線殺菌，對實驗員可用酒精擦拭雙手進行消

毒，A錯誤；家庭制作酸奶時，要將容器煮沸消毒，鮮牛奶不進行滅菌，B錯誤；

加入培養基中的指示劑和染料也需要滅菌，否則可能會污染培養基，C錯誤；灼

燒滅菌法可殺死物體內外所有的微生物（包括微生物的營養體、芽抱和抱子），D

正確。

5.（2023?湖北黃岡高二檢測）下列哪項不屬于無菌技術（）

A.將培養皿、接種工具和培養基進行滅菌

B.實驗操作應在酒精燈火焰附近進行

C.避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸

D.操作者的衣著和雙手用純凈水洗干凈

答案D

解析為保證不被雜菌污染，應將培養皿、接種工具和培養基等進行滅菌，A不

符合題意；酒精燈火焰附近可以形成一個相對無菌區，為避免周圍環境中微生物

的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行，B不符合題意；周圍物品可能含有

雜菌，為防止污染，實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接

觸，C不符合題意；對實驗操作的空間，操作者的衣著和雙手，需進行清潔和消

毒，僅用純凈水洗干凈不屬于無菌技術，D符合題意。

6.獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術圍繞著如何避免雜菌

污染展開。請分析下列操作中錯誤的是（）

A.倒平板后，對空白培養基進行培養，可檢測培養基是否被污染

B.接種箱或超凈工作臺在使用過程中，可用紫外線照射30min,進行消毒

C.若培養皿的皿蓋和皿底之間濺有培養基，則不宜用此培養基培養大腸桿菌

D.高壓蒸汽滅菌時，不能直接關閉排氣閥進行加熱滅菌

答案B

解析實驗室中檢測培養基是否被污染，一般在倒平板后，對空白培養基進行培

養，A正確；接種箱或超凈工作臺在使用前，可用紫外線照射30min,進行消毒，

B錯誤；空氣中的微生物可能在培養皿的皿蓋和皿底之間的培養基上滋生，因此

若培養皿的皿蓋和皿底之間濺有培養基，則不宜用此培養基培養大腸桿菌，C正

確；高壓蒸汽滅菌時，剛開始加熱滅菌鍋時，要打開排氣閥，使水沸騰一段時間

后再關閉排氣閥，這樣操作的目的是排盡鍋內冷空氣，使鍋內溫度能上升到要求

的溫度（121℃）,達到良好的滅菌效果，D正確。

知識點3微生物的純培養

7.下圖為純培養酵母菌的一個操作環節，下列相關敘述中，錯誤的是（）

A.該操作步驟是接種，方法是平板劃線法

B.除第一次劃線外，以后的每一次劃線的起點是上一次劃線的末端

C.圖中酵母菌密度最小的是5處

D.該接種方法適用于酵母菌的計數

答案D

解析平板劃線法只能用于微生物的分離、培養，不能用于計數，D錯誤。

8.下列有關平板劃線操作的描述，錯誤的是（）

A.將接種環放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環燒紅

B.接種環在平板上劃線的位置是隨機的

C.在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰

D.最后一區的劃線不能與第一區的劃線相連

答案B

解析將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他的金屬用具，直接在酒精

燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，A正確；接種環在平板上劃線

時，采用分區劃線，每個區要劃3?5條平行線，而不是隨機劃的，B錯誤；在挑

取菌種前和接種完畢后的試管口均要通過酒精燈火焰，以防止雜菌污染,C正確。

9.（2023?貴州高二月考）如圖是倒平板的操作，下列相關敘述錯誤的是（）

甲乙丙丁

A.正確的操作順序是丙一乙一甲一丁

B.甲應在酒精燈火焰附近進行

C.此培養基不可能為液體培養基

D.完成甲后應快速進行丁操作

答案D

解析等待所倒的平板冷卻凝固后，再進行丁的操作，D錯誤。

【綜合提升】

10.（2023?浙江寧波高二檢測）微生物培養過程中，要十分重視無菌操作，現代生物

學實驗中的許多方面也要進行無菌操作，以防止雜菌污染。請分析下列操作，錯

誤的是（）

①煮沸消毒可以殺死微生物的細胞和部分芽抱②接種操作要在酒精燈火焰附近

進行③培養基要進行高壓蒸汽滅菌④加入培養基中的指示劑和染料不需要滅

菌⑤紫外線消毒可以對接種室、接種箱、超凈工作臺和操作人員進行消毒，以

殺死物體表面或者空氣中的微生物⑥在接種過程中，試管口、瓶口等易被污染

的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌

A.①②B.⑤⑥

C.③⑤D.④⑤

答案D

解析100℃煮沸5?6min可以殺死微生物的細胞和一部分芽抱，①正確；酒精

燈火焰附近存在一個相對無菌區，為防止雜菌污染，接種操作要在酒精燈火焰附

近進行，②正確；培養基的滅菌方法通常采用高壓蒸汽滅菌，該方法應注意將壓

力達到預定要求，③正確；指示劑和染料可能混有微生物，故也需滅菌，④錯誤；

接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用紫外線消毒，但不能對操作人員

進行紫外線消毒，⑤錯誤；將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他金屬

工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接

種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰灼燒來滅菌，

⑥正確。

11.（多選）（2023?沈陽高三模擬）大腸桿菌是寄生于人和動物腸道中的細菌，利用其

代謝產物能與染料伊紅一亞甲藍反應，使菌落呈深紫色并帶有金屬光澤，從而將

其鑒別出來。下表是其培養基配方。下列相關敘述錯誤的是（）

0.5%美

蛋白磷酸二2%伊紅

成分乳糖X蒸儲水藍

月東氫鉀水溶液

水溶液

含量10g10g2g20~30g1000mL20mL13mL

A.培養基配方中X的成分不能是瓊脂

B.該培養基中蛋白陳提供的主要營養有碳源、氮源和維生素等

C.可采用干熱滅菌法對該培養基滅菌

D.可利用培養基上菌落的特征來判斷和鑒別大腸桿菌的存在

答案AC

解析鑒別培養基將產生深紫色菌落的大腸桿菌鑒別出來，需要使用固體培養基,

則培養基配方中X的成分可以是瓊脂，A錯誤；該培養基中，蛋