階段檢測卷（三）

（時間：75分鐘滿分：100分）

一、選擇題（本題共15小題，每小題2分，共30分。每小題給出的四個選項中，

只有一個選項是最符合題目要求的）

1.下列各項中能說明目的基因完成了在受體細胞中表達的是（）

A.棉花細胞中檢測到細菌的抗蟲基因

B.大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及其mRNA

C.山羊乳腺細胞中檢測到人生長激素基因的序列

D.酵母菌細胞中提取到人干擾素

答案D

解析酵母菌細胞中提取到人干擾素，說明目的基因（人干擾素基因）在受體細胞

中完成了表達，D正確。

2.限制酶及加HI和Bg/n是兩種常見的工具酶，它們的識別序列及切割位點依次

為GIGATCC和AIGATCTo研究中用BamHI切割DNA獲得目的基因，用

Bg/n切割質粒，并連接得到重組質粒，下列相關敘述錯誤的是（）

A.酶切過程中，需控制好酶濃度、溫度和反應時間等因素

B.目的基因經BamHI切割后形成的黏性末端是一GATC

C.分別用這兩種限制酶切割，保證了目的基因定向插入質粒

D.經這兩種酶處理得到的重組質粒不能再被這兩種酶所識別

答案C

解析影響酶促反應的因素有溫度、pH、酶濃度、底物濃度等，因此酶切過程中，

需控制好酶濃度、溫度和反應時間等因素，A正確；根據題意可知，限制酶及解HI

的識別序列及切割位點為GIGATCC,因此目的基因經BamHI切割后形成的黏

性末端是一GATC,B正確；分別用這兩種限制酶切割目的基因和質粒，由于形

成的黏性末端相同，不能保證目的基因定向插入質粒，C錯誤；經題述兩種酶處

理得到的重組質粒，之前兩種酶的識別序列不再存在，故不能再被這兩種酶所識

別，D正確。

3.科學家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，并以質粒為載體，采用轉基因方

法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種，下列有關說法正確的是（）

A.質粒是基因工程中唯一的載體

B.將抗枯萎基因連接到質粒上，用到的工具酶是DNA聚合酶

C.基因的“剪刀”指的是限制酶，該酶作用于氫鍵

D.通過該方法可以定向改造生物的性狀，實現了基因重組

答案D

解析質粒是基因工程中常用的載體，基因工程的載體還可以是動植物病毒、噬

菌體等，A錯誤；將抗枯萎基因連接到質粒上，除了用到DNA連接酶，還需要

采用限制酶，B錯誤；基因的“剪刀”指的是限制酶，該酶作用于磷酸二酯鍵，

C錯誤；基因工程可以按照人們的意愿定向改造生物的遺傳性狀，從而創造出更

符合人們需要的新的生物類型和生物產品，實現基因重組，D正確。

4.科研人員利用農桿菌轉化法將抗病基因C導入番木瓜，培育出轉基因抗病番木

瓜，Ti質粒結構模式圖如圖所示。下列敘述正確的是（）

基因C

插入位點

四環素

T-DNA抗性基因

卡那霉素

抗性基因

Ti質粒

A.農桿菌的T-DNA與番木瓜基因發生重組

B.質粒上的抗性基因有利于篩選含目的基因的細胞和促進目的基因的表達

C.含重組Ti質粒的農桿菌具有四環素抗性

D.轉基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性

答案A

解析質粒上的抗性基因有利于篩選含目的基因的細胞，但不會促進目的基因的

表達，B錯誤；抗病基因C的插入位點位于四環素抗性基因內部，插入抗病基因

C后，重組Ti質粒的四環素抗性基因被破壞，含重組Ti質粒的農桿菌不具有四

環素抗性，C錯誤；轉基因抗病番木瓜含有卡那霉素抗性基因，故轉基因抗病番

木瓜具有卡那霉素抗性，D錯誤。

5.下列生物技術操作對遺傳物質的改變，不會遺傳給子代的是（）

A.將腺昔酸脫氨酶基因轉入淋巴細胞后回輸患者進行治療

B.將花青素代謝基因導入植物體細胞，經植物組織培養獲得花色變異的植株

C將腸乳糖酶基因導入奶牛受精卵，培育出分泌低乳糖乳汁的奶牛

D.將含胰島素基因的重組質粒轉入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌

答案A

解析將腺甘酸脫氨酶基因轉入淋巴細胞后回輸患者進行治療時不會改變其他細

胞的基因組成，且淋巴細胞不能進行減數分裂產生配子，所以不會遺傳給子代，

A符合題意；將花青素代謝基因導入植物體細胞，經植物組織培養獲得花色變異

的植株，說明花青素代謝基因可表達，花色變異的植株細胞中都含花青素代謝基

因，因而能遺傳給子代，B不符合題意；將腸乳糖酶基因導入奶牛受精卵，培育

出的產低乳糖乳汁的奶牛細胞中都含腸乳糖酶基因，能遺傳給子代，C不符合題

意；將含胰島素基因的重組質粒轉入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌，重組質粒

能隨細菌分裂而遺傳給后代，D不符合題意。

6.（2023?湖南岳陽期末）如圖表示pBR322質粒和人生長激素基因所在片段的結構

信息，欲將二者構建的重組質粒導入受體菌并進行篩選。下列敘述正確的是（）

A.應選擇的限制酶組合是酶E和酶G

B.應選擇含有A/7和7y基因的受體菌

C.用含四環素的培養基能篩選出含重組質粒的受體菌

D.同時用三種限制酶處理圖中質粒，電泳后可得到4個條帶

答案D

解析為避免切割后DNA片段的自身環化，又保留質粒上的標記基因，切割時

應選擇的限制酶組合是酶F和酶G,A錯誤；所選用的受體菌不能含有A/7和7y

基因，以便于對成功導入目的基因的受體菌進行選擇，B錯誤；四環素抗性基因

會被酶F和酶G破壞，所以用含氨羊青霉素的培養基能篩選出含重組質粒的受體

菌，C錯誤；由圖可知，同時用三種限制酶處理圖中質粒，因酶E有兩個切割位

點，故將質粒切割成了4個DNA片段，電泳后可得到4個條帶，D正確。

7.（2023?山東聊城期末）大腸桿菌經溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會纏繞在

細胞壁碎片上，靜置一段時間，質粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得

質粒DNA。用限制酶I和限制酶n處理提取的產物，電泳結果如圖所示。下列關

于質粒的粗提取和鑒定的敘述錯誤的是（）

-1：限制酶I處理

=-2：限制酶n處理

=.."3：限制酶1+限制酶11處理

123

A.提取DNA時可加入酒精，使不溶于酒精的DNA析出

B.將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺試劑進行鑒定

C.分別用限制酶I和限制酶H處理提取產物的電泳結果說明未提取到質粒

D.溶菌酶能溶解大腸桿菌細胞壁，但對DNA沒有影響

答案C

解析DNA不溶于酒精，某些蛋白質溶于酒精，提取DNA時加入酒精，是為了

讓DNA析出，A正確；將提取的DNA溶于2moi/LNaCl溶液后，可用二苯胺試

劑經沸水浴后進行鑒定，B正確；分別用限制酶I和限制酶H處理提取的產物，

均只得到一條大小相同的條帶，說明提取物是環狀DNA,即提取物為質粒，C錯

誤；溶菌酶能溶解大腸桿菌細胞壁，但對DNA沒有影響，D正確。

8.（2023?江蘇泰州高二期末）下列有關酶的敘述，正確的是（）

A.DNA連接酶以DNA的一條鏈為模板，將單個脫氧核甘酸連接起來

B.DNA聚合酶可將兩個DNA分子片段間的縫隙連接起來

C.逆轉錄酶是以RNA為模板指導核糖核甘酸連接合成DNA的酶

D.限制性內切核酸酶識別特定的核甘酸序列并在特定位點切割DNA分子

答案D

解析DNA連接酶連接的是兩個DNA片段，不需要模板，A錯誤；DNA聚合酶

只能將單個脫氧核甘酸加到已存在的脫氧核甘酸片段上，將兩個DNA分子片段

間的縫隙連接起來的是DNA連接酶，B錯誤；逆轉錄酶是逆轉錄過程中需要的

酶，逆轉錄的結果是合成DNA,故該酶是以RNA為模板，以脫氧核甘酸為原料

合成DNA,C錯誤；限制性內切核酸酶可以識別特定的核昔酸序列并在特定位點

切割DNA分子，D正確。

9.（2023?重慶九校聯盟聯考）下列關于基因工程的應用的敘述，正確的是（）

A.將藥用蛋白基因注射入牛的乳腺細胞，即可從牛乳汁中獲得所需的藥品

B.基因工程改造后的個體與未經改造的同種個體之間已產生生殖隔離

C.利用基因工程生產的甜味劑對人體無害，在食品中可以大量添加

D.基因工程可以改良動植物品種，提高作物和畜產品的產量

答案D

解析將藥用蛋白基因與乳腺中特異表達的基因的啟動子等調控元件重組在一起,

導入哺乳動物的受精卵中，最終培育的轉基因動物進入泌乳期后，才可以通過分

泌的乳汁生產所需要的藥品，A錯誤；基因工程的原理是基因重組，經過基因工

程改造的個體與未經改造的同種個體之間只有一個或少數幾個基因不同，一般不

會產生生殖隔離，B錯誤；過量甜味劑對人體會產生危害，不能在食品中大量添

加，C錯誤；基因工程技術已被廣泛用于改良動植物品種、提高作物和畜產品的

產量等方面，如抗逆性作物的出現以及改善畜產品的品質等的應用，D正確。

10.（2023?福建泉州期中）科學家通過基因工程的方法，能使馬鈴薯塊莖含有人奶的

主要蛋白。以下有關基因工程的敘述錯誤的是（）

A.在基因工程中，PCR技術可用于任何基因的獲取，且能迅速獲得大量目的基因

B.啟動子對于目的基因在塊莖中的表達是不可缺少的

C.利用PCR技術可以檢測轉基因馬鈴薯植株中目的基因是否存在及其是否轉錄

D.用同種限制酶分別處理質粒和含有目的基因的DNA后，再用DNA連接酶連接

可以形成重組DNA

答案A

解析在基因工程中，用PCR技術獲取目的基因需要已知目的基因的核甘酸序列,

而并非所有基因的核昔酸序列都是已知的，A錯誤；基因表達載體中的啟動子能

驅動基因轉錄出mRNA,進而表達出相應蛋白質，因此啟動子對于目的基因在塊

莖中的表達是不可缺少的，B正確；利用PCR技術可以檢測轉基因馬鈴薯植株中

目的基因是否存在及其是否轉錄，C正確；用同種限制酶分別處理質粒和含有目

的基因的DNA后可產生相同末端，再用DNA連接酶連接可以形成重組DNA,D

正確。

11.（2023?山東濟寧期中）一種雙鏈DNA分子被三種不同的限制酶切割，切割產物

通過電泳分離，用長度已知的DNA片段的電泳結果作為分子量標記（圖中左邊第

一列）。關于該雙鏈DNA,下列說法錯誤的是（）

分子量

q

w

rEu

?

跚

4

不\

<

N

IC

A.呈環狀結構

B.長度為10kb

C.有一個限制酶NotI和兩個限制酶EcoRI切割位點

D.其限制酶N。/1切割位點與限制酶EcoRI切割位點的最短距離為2kb

答案D

解析單用限制酶EcoRI處理和利用限制酶EcoRI和Notl雙酶切時產生的結

果不同，說明該DNA序列中含有限制酶NotI的切割位點，用限制酶NotI處理

只產生了一個10kb的片段，所以說明該分子一定是環狀的，且長度一定是10kb,

A、B正確；用限制酶No/1處理只產生了一個10kb的片段，說明該環狀DNA

上含有一個限制酶NotI的切割位點，單用限制酶EcoRI處理產生了4kb和6kb

兩個片段，說明該環狀DNA上含有2個限制酶EcoRI的切割位點，C正確；用

限制酶EcoRI處理后產生的4kb的片段，進一步被限制酶NotI切割成為3kb和

Ikb的兩個片段，可知限制酶NotI切割位點與限制酶EcoRI切割點的最短距離

為Ikb,D錯誤。

12.下列關于基因工程的敘述，正確的是（）

A.因動植物間存在生殖隔離，故動物細胞的基因不可以用于改良植物的遺傳性狀

B.目的基因和受體細胞均可來自動物、植物或微生物

C.若檢測培育的抗蟲棉花是否成功，可用相應的病菌侵染棉花植株進行個體水平

的鑒定

D.載體上的抗性基因有利于檢測目的基因是否插入受體細胞的染色體上

答案B

解析動物細胞的基因可以用于改良植物的遺傳性狀，A錯誤；基因工程的目的

基因和受體細胞均可來自動物、植物或微生物，B正確；若檢測培育的抗蟲棉花

是否成功，可用相應的害蟲侵染棉花植株進行個體水平的鑒定，C錯誤；載體上

的抗性基因有利于檢測重組質粒是否導入受體細胞，但不能檢測目的基因是否插

入受體細胞的染色體上，D錯誤。

13.（2023?江蘇蘇州期末）下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，正確的是

（）

A.可以用菜花、洋蔥、豬血、豬肝等作為實驗材料粗提取DNA

B.在研磨液中加入等體積預冷的體積分數為95%的酒精可以溶解DNA

C.粗提取得到的DNA（白色絲狀物）可用玻璃棒沿一個方向攪拌卷起

D.使用二苯胺試劑能有效測定不同提取液中DNA的純度差別

答案C

解析豬血中成熟的紅細胞沒有細胞核和細胞器，DNA含量少，一般不作為粗提

取DNA的材料，A錯誤；DNA不溶于酒精，B錯誤；粗提取得到的DNA可用

玻璃棒沿一個方向攪拌卷起，C正確；使用二苯胺試劑可鑒定DNA的存在（在一

定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現藍色），其不能用于測定不同提取液中DNA

的純度差別，D錯誤。

14.（2023?江蘇徐州期中）基因疫苗是將編碼外源性抗原的基因插入質粒，然后將重

組質粒直接導入機體內，使其在宿主細胞中表達抗原蛋白，進而誘導機體產生免

疫應答。下列敘述正確的是（）

A.接種基因疫苗只能預防特定微生物的感染

B.疫苗經注射進入人體后，可被人體的漿細胞識別

C.利用蛋白質工程生產的蛋白質疫苗就是基因疫苗

D.基因疫苗的機理是機體能識別特定的基因，從而產生免疫反應

答案A

解析基因疫苗的機理是使機體受到刺激進而產生抗體作用于相應的抗原，屬于

特異性免疫，因此接種基因疫苗只能預防特定微生物的感染，A正確、D錯誤；

漿細胞無識別抗原的功能，B錯誤；結合題意分析可知，基因疫苗是通過基因工

程生產的，利用蛋白質工程生產的蛋白質疫苗不是基因疫苗，C錯誤。

15.（2023?廣州高三一模）下圖為我國新型冠狀病毒（RNA病毒）核酸檢測的基本流

程，采用的是“實時熒光定量RT-PCR”技術，1?2h內即可得到檢測結果。其

基本原理是DNA的復制，過程中加入與特定模板鏈互補的熒光探針，這樣每新

合成一條DNA鏈，就會產生一個熒光分子，通過檢測熒光信號即可確定是不是

陽性。下列相關說法錯誤的是（）

U提取,―—，①：—②：熒光

待播羊本RNAONA-PCR檢測

（取自疑似患者）

A.①②過程都需要加入四種游離的脫氧核甘酸作為原料

B.若只考慮一個DNA分子，其復制了“次，則整個過程中可以檢測到2〃+i—2個

熒光信號

C.若樣本RNA中A占堿基總數的20%,則其產生的DNA中C占堿基總數的30%

D.在核酸檢測過程中出現假陽性，可能是由于外源DNA片段的污染

答案C

解析①為逆轉錄，②為DNA復制，兩者都以脫氧核甘酸為原料合成DNA,A

正確；一個DNA分子復制〃次，新形成了2"—1個DNA分子，共新產生2"+1一

2條脫氧核甘酸鏈，由于每新合成一條DNA鏈，就會產生一個熒光分子，則共有

2"1—2個熒光信號，B正確；逆轉錄時，RNA的堿基與合成的DNA鏈的堿基互

補，即G與C堿基互補，RNA為單鏈分子，由A含量無法推出C和G的含量，

因此無法計算DNA中C占的比例，C錯誤；外源DNA片段的污染可能會造成核

酸檢測假陽性，D正確。

二、選擇題（本題共5小題，每小題3分，共15分。每小題有兩個或兩個以上選

項符合題目要求，全部選對得3分，選對但不全的得1分，有選錯的得0分）

16.如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關敘述錯誤的是（）

導入培養

構建表轉入農植物再生

達載體、桿菌J成植株

噂善4重組含重組

黑黑Ti質粒嚅鬻細胞植株

①②③④⑤

A.②的構建需要限制性內切核酸酶和DNA聚合酶參與

B.③浸染植物細胞后，重組質粒不能自我復制

C.④的染色體上若含抗蟲基因，則⑤就一定表現出抗蟲性狀

D.⑤只要表現出抗蟲性狀就表明植株發生了變異

答案ABC

解析重組Ti質粒的構建需要限制性內切核酸酶和DNA連接酶參與，DNA聚合

酶一般用于DNA復制過程，A錯誤；質粒的特點之一是能自主復制，并且穩定

存在，③侵染植物細胞后，重組質?？梢宰晕覐椭?，B錯誤；受體細胞的染色體

上含抗蟲基因，并不代表該基因就一定能成功表達，因此不能確定⑤是否表現出

抗蟲性狀，C錯誤。

17.利用基因工程技術生產痰酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示，下列敘述正確的

是()

A.過程①表示逆轉錄過程，需要解旋酶和DNA聚合酶

B.通過過程②從cDNA中獲得的CwE基因無啟動子和內含子

C.過程③一般用Ca2+處理大腸桿菌，使其處于一種能吸收周圍環境中DNA分子

的生理狀態

D.通過過程④得到的工程菌是指能使CarE基因得到高效表達的菌株

答案BCD

解析過程①表示逆轉錄過程，需要逆轉錄酶，A錯誤；cDNA是以mRNA為模

板逆轉錄形成的，其中不含啟動子和內含子，因此通過過程②從cDNA中獲得的

CarE基因無啟動子和內含子，B正確；過程③表示將目的基因導入大腸桿菌細胞,

一般用Ca2+處理大腸桿菌，使其處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀

態，C正確；通過過程④得到的工程菌是指能使CwE基因得到高效表達的菌株，

D正確。

18.農桿菌Ti質粒上的T-DNA可以轉移并隨機插入被侵染植物的染色體DNA中。

研究者將圖示中被浸染植物的DNA片段連接成環，并以此環為模板進行PCR,

擴增出T-DNA插入位置兩側的未知序列，以此可確定T-DNA插入的具體位置。

下列說法錯誤的是（）

未知序列引物①T-DNA引物②未知序列

…三/二

限制酶切點引物③引物④限制k酶切點:

注：子鏈從引物的3,端開始延伸

A.PCR擴增利用的是DNA熱變性的原理

B.進行PCR擴增需要有解旋酶和耐高溫的DNA聚合酶

C.利用圖中的引物②、③組合可擴增出兩側的未知序列

D.通過與受體細胞的基因組序列比對，可確定T-DNA的插入位置

答案BC

解析PCR擴增利用的是DNA熱變性的原理，是體外擴增DNA的一種方式，A

正確；PCR技術需要在高溫條件下進行變性，故進行PCR擴增需要耐高溫的DNA

聚合酶，而不需要解旋酶，B錯誤；由于DNA的兩條鏈反向平行，且子鏈從引

物的3,端開始延伸，故利用圖中的引物①、④組合可擴增出兩側的未知序列，C

錯誤；通過與受體細胞的基因組序列比對，可確定T-DNA的插入位置，D正確。

19.干擾素是一種具有干擾病毒復制作用的糖蛋白，可以用于治療病毒的感染和癌

癥，但體外保存相當困難。如圖是利用蛋白質工程設計生產干擾素的流程圖，據

圖分析下列敘述正確的是（）

A.圖中構建新的干擾素模型的主要依據是新的干擾素的預期功能

B.圖中新的干擾素基因必須插入質粒上的啟動子和終止子之間才能表達

C.圖中改造干擾素結構的實質是改造干擾素基因的結構

D.圖中各過程并沒有涉及基因工程技術

答案ABC

解析構建新的干擾素模型的主要依據是新的干擾素的預期功能，A正確；新的

干擾素基因必須插入到質粒上的啟動子和終止子之間才能表達，B正確；改造干

擾素結構的實質是對干擾素基因的結構進行改造，C正確；題圖中從“人工合成

DNA”到“在受體細胞中表達”的過程運用了基因工程技術，D錯誤。

20.下圖1、2中標注了相關限制酶的酶切位點，關于培育轉基因大腸桿菌的敘述,

錯誤的是（）

四環素抗性基因

BamHI

BelI

-BamHI

氨茉青霉素

抗性基因

BamUI引物甲HindHIBamHI

BelI目的基因引物引物Sa”3AI

A.若通過PCR技術提取該目的基因應該選用引物甲和引物丙

B.構建基因表達載體，可選用BamHI剪切

C.構建基因表達載體時為了防止目的基因和質粒的自身環化，可以選用和

“沅dill剪切

D.在導入目的基因的受體細胞中，四環素抗性基因和氨葦青霉素抗性基因能同時

表達

答案BD

解析PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合

成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙，A正確；構建基因表達載

體時至少保證一個標記基因的完整性，便于重組DNA分子的篩選；圖1中BamHI

同時切割兩種標記基因，因此不能選用及miHl剪切，B錯誤；圖2中目的基因

左側只能選反71,而質粒上沒有SQM3Al的切點，兩者都有印“dill的切點，為

了防止目的基因與質粒自身環化，質粒和目的基因構建表達載體時，應選用Bc/I

和H沅dill剪切，C正確；在構建基因表達載體時，使用3&I和印〃dill兩種限制

酶切割質粒，氨芾青霉素抗性基因被破壞，不能表達，四環素抗性基因能表達，

D錯誤。

三,非選擇題（本題共4小題，共55分）

21.（16分）（2023?湘豫名校聯考模擬）黃金大米是一種新型轉基因大米，其隹胡蘿卜

素的含量是普通大米的23倍，因大米在拋光后呈黃色而得名。在轉基因大米中有

3個外源基因，其中兩個分別為表達八氫番茄紅素合成酶的基因?到、胡蘿卜素脫

飽和酶的基因cH(二者共同調控使大米胚乳細胞合成隹胡蘿卜素)，第三個外源基

因為p加基因，已知不含?加基因的植物細胞在含甘露醇的培養基上無法生長。

請回答下列問題：

(1)科學家在培育"黃金大米"時，將"〃、psy、加基因插入Ti質粒中，構建了

重組質粒PSYN12424,該過程中目的基因是

標記基因是,質粒pSYN12424的作用是

(2)已知與psy基因及Ti質粒有關的限制酶識別序列及切割位點如圖所示。

VT-DNA

III

(編碼產物可激

活T-DNA轉移)Uji質㈣―&亦I

復制原，於二I

HindIKMfeI

廠1基因tT

EcoRIEcoRI

限制酶HmdIIIEcoRIMfeI

1!1

識別序列及切割位點AAGCTTGAATTCCAATTG

TTCGAACTTAAGGTTAAC

ttt

若選擇EcoRI處理目的基因及質粒。經DNA連接酶作用后可得到種含

目的基因的重組質粒。為減少連接產物的種類并避免目的基因與質粒錯誤連接，

可選擇酶同時處理psy基因所在的DNA分子和Ti質粒。

(3)將重組質粒pSYN12424導入離體水稻細胞后，可利用含的

培養基對受體細胞進行初步篩選。目的基因進入受體細胞，并在受體細胞內維持

穩定和表達的過程稱為?！包S金大米”中psy和crtl基因只在胚乳

細胞表達的原因可能是_____________________________________________________

答案(l)cH基因和psy基因?加基因將目的基因送入受體細胞，并使其在受

體細胞中穩定遺傳和表達（2）2HindHI.Mfel（3）甘露醇轉化目的基因上

游插入了能在胚乳細胞中特異表達的基因的啟動子等調控組件

解析（1）由題干可知，“黃金大米”是富含供胡蘿卜素的大米，而控制合成供

胡蘿卜素需要psy和基因的共同調控，因此二者為目的基因。由''不含夕加

基因的植物細胞在含甘露醇的培養基上無法生長”可知，可利用p加基因的特性，

用含甘露醇的培養基對轉基因后的受體細胞進行篩選，即。加基因作為標記基因；

構建基因表達載體的目的是使目的基因能夠進入受體細胞，并能在受體細胞中穩

定遺傳和表達。（2）用EcoRi處理目的基因及質粒時，目的基因兩端及質粒的切

口兩端的黏性末端都是相同的，因此當目的基因與質粒相連接時會出現正向連接

和反向連接2種重組質粒；為避免出現這種情況，可用兩種限制酶同時處理目的

基因所在的DNA分子和質粒，結合表格中3種酶的識別序列和切割位點可知，

員“dill和9I形成的黏性末端不同，可以減少連接產物的種類并避免目的基因

與質粒錯誤連接。（3）根據重組質粒上2加基因的特性，應利用含甘露醇的培養基

培養受體細胞，能生長的是可能含目的基因的重組質粒，不能生長的則不含目的

基因。目的基因進入受體細胞，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為轉化，

基因的表達情況（表達的部位、時期及能否表達等）受啟動子等元件的調控，因此

若使目的基因只在胚乳細胞中表達，應該是目的基因上游插入了能在胚乳細胞中

特異表達的基因的啟動子等調控組件。

22.（12分）（2023?湖南長郡中學測試）蘇云金桿菌可通過產生蘇云金桿菌伴抱晶體蛋

白（Bt抗蟲蛋白），破壞鱗翅目昆蟲的消化系統來殺死棉鈴蟲?？茖W家將該細菌的

“殺蟲基因”轉移到棉花里，培育出了抗蟲棉，讓棉花也能產生Bt抗蟲蛋白抵抗

蟲害?；卮鹣铝袉栴}：

（1）可利用PCR技術獲取并擴增及基因，前提是要有一段及基因的核甘酸序列，

這是因為o

（2）PCR與體內DNA復制相比，其特殊之處有

（寫出兩點）。

⑶及基因兩端的酶切位點如圖1所示，圖2中質粒上的AmpR為氨葦青霉素抗性

基因，止產為四環素抗性基因，P為啟動子，箭頭表示酶切位點。

EcoRI

yBamWI

EcoRIBamHIEcoRI

圖1圖2

實際操作中，一般采用限制酶EcoRI和及解HI兩種酶進行切割，與只采用限制

酶EcoRI切割相比，用兩種酶切的優勢之一是避免,二是避免

造成反向連接。反向連接會導致目的的基因表達出不同的蛋白質，原因是

（4）將基因表達載體導入農桿菌后，要用選擇培養基進行篩選。已知未導入表達載

體時，農桿菌對氨葦青霉素和四環素均不具有抗性，在不含抗生素的培養基（標記

為A）中有經過轉化的農桿菌單菌落（由一個菌體繁殖而成），挑取一部分菌接種到

含有四環素的培養基（標記為A1）中培養，再挑取一部分菌接種到含有氨葦青霉素

的培養基（標記為A2）中培養，若出現___________________________________

的結果，說明轉化成功。

（5）轉基因棉花是否培育成功還要對棉花進行水平的檢驗。

答案（1）利用PCR技術擴增目的基因需要兩種引物，合成引物的前提是要有一

段已知目的基因的核甘酸序列（2）PCR過程中要變換溫度、利用的DNA聚合酶

為耐高溫的DNA聚合酶、DNA解旋在90℃以上的高溫下進行等（寫出兩點即可）

（3）目的基因和質粒自身環化目的基因與啟動子相接的一端為轉錄的起始端，如

果反向連接，則轉錄得到的niRNA序列與正向連接相比是不同的（4）在A1中能

形成菌落，在A2中不形成菌落（5）分子水平和個體生物學

解析（l）PCR技術擴增的前提是要有一段已知目的基因的核甘酸序列以便合成

引物。（2）PCR與體內DNA復制相比，其特殊之處在于PCR過程中要變換溫度、

利用的DNA聚合酶為耐高溫的DNA聚合酶、DNA解旋在90℃以上的高溫下進

行等。（3）構建重組質粒時，選用EcoRI、Ba/nHI酶對目的基因所在DNA和質

粒進行切割，這樣可以防止含目的基因的DNA片段自身環化，也可以防止質粒

自身環化，還可以防止目的基因反向連接。轉錄是從啟動子開始，到終止子結束，

若反向連接則轉錄得到的mRNA序列與正向連接相比是不同的。（4）未導入表達

載體時農桿菌對氨芾青霉素和四環素均不具有抗性，導人表達載體的細胞具有四

環素抗性，而不具有氨芾青霉素抗性。在題述篩選過程中，若出現A1中形成菌

落，A2中不形成菌落的結果，說明轉化成功。（5）轉基因棉花是否培育成功還要

對棉花進行分子水平和個體生物學水平的檢驗，以檢驗其是否具有抗蟲特性。

23.（12分）（2023?山東濰坊開學考）面對新冠疫情，最常見的檢測方法是新冠病毒核

酸檢測，原理為實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測，技術流程如圖所示，①②③表

示相關過程。請回答：

熒光檢測

樣本采集及病毒滅活處理/'

步驟提取裂解液

1:RNA\1/發出熒光

病毒,①（蛋白酶K、RNA--O-

RNA梅抑制劑）?

提取步驟3:

―;-------3,病毒RNA'qPCR

②|酶N、引物、dNTP等

步驟2：酶X、引物、dNTP、

病毒5'.—―3,③熒光探針等

cDNA於引物M

合成

5,工3'

RNA-DNA雜交分子1np

⑴PCR技術與體內DNA復制過程中，DNA的復制方式都是^。

RT-PCR過程中，需先以RNA為模板合成cDNA,故裝置中需添加酶。

（2）過程①中,RNA提取裂解液可滅活病毒,原因是

采集到的樣本要迅速進行病毒滅活處理，其目的是。RNA酶抑

制劑的作用是。

⑶在進行新冠病毒核酸檢測時，通常以病毒的ORR1ab基因為檢測的目標基因，

是因為ORF1ab基因具有的特點。檢測過程中還設置

有“陽性對照”和“陰性對照”，設置“陰性對照”的主要作用是

（4）新冠病毒還可采用抗原檢測和抗體檢測。這些檢測方法的原理是

.;對于患者的早期確診，抗體檢測比核酸檢測和抗原

檢測滯后的原因是___________________________