ICS65.120CCSB46中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T45208—2025飼料中辣椒紅的測(cè)定高效液相色譜法Determinationofpaprikaredinfeeds—Highperformanceliquidchromatography2025-01-24發(fā)布2025-08-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布/GBT45208—2025前言GBT1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則本文件按照/第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SACTC76/)提出并歸口。本文件起草單位:四川威爾檢測(cè)技術(shù)股份有限公司、山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、廣州智特奇生物科技股份有限公司、山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心、晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司。本文件主要起草人:張蕓、張鳳枰、孫延軍、宮玲玲、唐華英、張瑋、王英英、李俊玲、陳冰、唐姣、張坤、李會(huì)榮、宋偉光、吳金玉。Ⅰ/GBT45208—2025飼料中辣椒紅的測(cè)定高效液相色譜法警示———使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文件并未指出所有可能的安全問題,使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?并保證符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定的條件。范圍1本文件描述了飼料中辣椒紅的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料和維生素預(yù)混合飼料中辣椒紅(以辣椒紅素和辣椒玉紅素之和計(jì))的測(cè)定。本文件中辣椒紅素和辣椒玉紅素的檢出限均為0.05mgkg/,定量限均為0.1mgkg/。規(guī)范性引用文件2下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。/GBT6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法/GBT20195動(dòng)物飼料試樣的制備術(shù)語(yǔ)和定義345本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理試樣中辣椒紅素和辣椒玉紅素經(jīng)乙腈提取,高效液相色譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定,僅使用分析純?cè)噭?.1水:GBT6682/,一級(jí)。乙腈:色譜純。5.25.35.4磷酸溶液(0.3%,體積分?jǐn)?shù)):移取1.5mL磷酸,用水稀釋至500mL,混勻。辣椒紅素和辣椒玉紅素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(/):稱取辣椒紅素(號(hào):CAS465-42-9,純度≥100gmLμ95%)和辣椒玉紅素(CAS號(hào):470-38-2,純度≥95%)標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.01mg),分別置于100mL棕色容量瓶中,用乙腈(5.2)溶解、定容,混勻。2℃~8℃保存,有效期1個(gè)月。混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(/):分別準(zhǔn)確移取1mL辣椒紅素和辣椒玉紅素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.4)10gmLμ5.5于10mL棕色容量瓶中,用乙腈(5.2)稀釋、定容,混勻。臨用現(xiàn)配。5.6混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液:準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.5)于10mL棕色容量瓶中,用乙腈(5.2)稀釋、定容,混勻,配制成質(zhì)量濃度分別為0.02μgmL0.1gmL0.5gmL1gmL2gmL/、/、/、/、/和μμμμ1/GBT45208—2025/混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)配。5μgmL5.7微孔濾膜:0.45μm,有機(jī)系。儀器設(shè)備6高效液相色譜儀:配紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.16.2分析天平:精度1mg和0.01mg。渦旋混合器。6.36.4離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于5000rmin/。樣品7按照GBT20195/規(guī)定制備試樣,至少200g,粉碎使其全部過0.425mm試驗(yàn)篩,混合均勻,裝入密閉容器中,避光保存,備用。試驗(yàn)步驟8提取8.1平行做兩份試驗(yàn)。稱取5g(精確至1mg)試樣于50mL離心管中,準(zhǔn)確加入25mL乙腈(5.2),渦旋振蕩10min(如黏稠,可加攪拌子進(jìn)行均質(zhì)),于(5.7),濾液待測(cè)。/離心。取適量上清液,過微孔濾膜5000rmin5min液相色譜參考條件8.2液相色譜參考條件如下。)色譜柱:C8柱,柱長(zhǎng)100mm,內(nèi)徑3.0mm,粒徑2.7μm,或性能相當(dāng)者。ab)柱溫:35℃。c)流速:0.5mLmin/。d)檢測(cè)波長(zhǎng):475nm。)進(jìn)樣體積:。5Leμf)流動(dòng)相:A相為乙腈(5.2),B相為0.3%磷酸溶液(5.3),梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間/minA相/%B相/%0.001.006.006.1012.00751001007525002525752/GBT45208—2025測(cè)定8.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定8.3.1在儀器的最佳條件下,分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.6)和試樣提取溶液(8.1)上機(jī)測(cè)定。辣椒紅素和辣椒玉紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見附錄A。定性8.3.2以保留時(shí)間定性,試樣溶液中辣椒紅素和辣椒玉紅素保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(質(zhì)量濃度相當(dāng))中辣椒紅素和辣椒玉紅素的保留時(shí)間一致,其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。定量8.3.3以辣椒紅素和辣椒玉紅素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、色譜峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。如超出范圍,應(yīng)將試樣溶液用乙腈(5.2)稀釋后重新測(cè)定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí),試樣溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度相差不超過30%。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理9試樣中辣椒紅素和辣椒玉紅素的含量wi以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì),數(shù)值以毫克每千克(mgkg/)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按式()1計(jì)算,單點(diǎn)校準(zhǔn)按式()2計(jì)算。wi=ρi×V×f×1000m×1000…………(1)式中:———從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中辣椒紅素或辣椒玉紅素的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升ρi(μgmL/);———試樣提取溶液體積,單位為毫升(mL);———試樣溶液稀釋倍數(shù);Vf1000———換算系數(shù);———試樣質(zhì)量,單位為克()。gmwi=Ai×ρsi×V×f×1000…………(2)Asi×m×1000式中:———試樣溶液中辣椒紅素或辣椒玉紅素色譜峰面積;Ai———標(biāo)準(zhǔn)溶液中辣椒紅素或辣椒玉紅素的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);———試樣提取溶液的體積,單位為毫升(mL);ρsiV———試樣溶液稀釋倍數(shù);f1000———換算系數(shù);———標(biāo)準(zhǔn)溶液中辣椒紅素或辣椒玉紅素色譜峰面積;———試樣質(zhì)量,單位為克()。gAsim試樣中辣椒紅的含量w以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì),數(shù)值以毫克每千克(mgkg/)表示,按式()3計(jì)算。…………(3)w=w1+w2式中:w1———辣椒紅素含量,單位為毫克每千克(mgkg/);3/GBT45208—2025w2———辣椒玉紅素含量,單位為毫克每千克(/mgkg)。測(cè)定結(jié)果以平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示,保留3位有效數(shù)字。精密度10在重復(fù)性條件下,兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均