腫瘤特異性抗原CLDN18.2抗體的開發：挑戰與突破一、引言1.1研究背景與意義癌癥，作為全球范圍內嚴重威脅人類健康的重大疾病，始終是醫學領域的研究焦點。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥負擔數據，全球新增癌癥病例1929萬例，癌癥死亡病例996萬例。其中，胃癌、胰腺癌等消化系統惡性腫瘤，不僅發病率高，且預后往往較差。以胃癌為例，2020年全球新增胃癌病例約108.9萬例，死亡病例約76.9萬例，其死亡率在所有癌癥中位居前列。CLDN18.2作為一種緊密連接蛋白，在正常生理狀態下，僅在胃黏膜的分化上皮細胞中呈現有限表達，具有維持胃黏膜屏障功能的重要作用。然而，在腫瘤發生發展過程中，尤其是在胃癌、胰腺癌、食管癌等多種惡性腫瘤中，CLDN18.2基因會出現異常激活，進而導致其在腫瘤細胞表面高度選擇性、穩定地表達。研究表明，CLDN18.2在約70%的胃癌患者和約50%的胰腺癌患者的腫瘤組織中呈現陽性表達。這種在腫瘤組織與正常組織中表達的顯著差異，使CLDN18.2成為極具潛力的腫瘤特異性抗原，為腫瘤治療提供了新的靶點方向。開發針對CLDN18.2的抗體，對于腫瘤治療而言意義重大。一方面，能夠實現對腫瘤細胞的精準識別與靶向攻擊，有效提高治療的特異性和有效性，最大程度減少對正常組織的損傷，降低傳統治療方法帶來的副作用，從而顯著改善患者的生活質量。另一方面，為腫瘤治療開辟了新的路徑，有望突破現有治療手段的局限，為那些對傳統治療耐藥或不耐受的患者帶來新的希望。目前，針對CLDN18.2的抗體研究已取得一定進展，如佐妥昔單抗（Zolbetuximab）已在日本獲批用于治療CLDN18.2陽性、不可切除、晚期或復發性胃癌患者，其在臨床試驗中展現出良好的療效和安全性。然而，該領域仍存在諸多挑戰，如抗體的親和力和特異性有待進一步提高，以增強對腫瘤細胞的殺傷效果；抗體的生產工藝和成本控制也需要優化，以提高藥物的可及性。此外，對于CLDN18.2在腫瘤發生發展中的具體分子機制，以及抗體治療過程中的耐藥機制等方面，仍需深入研究。綜上所述，對CLDN18.2的深入研究以及開發更高效、安全的針對CLDN18.2的抗體，在腫瘤治療領域具有重要的理論和實踐意義，有望為腫瘤患者帶來更有效的治療方案，顯著改善其預后和生存質量，推動腫瘤治療技術的進一步發展。1.2CLDN18.2抗原特性CLDN18.2是緊密連接蛋白家族Claudins（CLDNs）的成員之一，由位于人第3號染色體3q22.3位置的CLDN18基因編碼。該基因的第一個外顯子存在兩個等位基因，通過不同的剪切方式，表達出CLDN18.1和CLDN18.2兩種蛋白亞型，其中CLDN18.2屬于胃特異性亞型。從結構上看，CLDN18.2是一種四次跨膜蛋白，包含四個跨膜結構域（TM1-TM4）、細胞內的N端和C端，以及兩個細胞外環（ECL1和ECL2）。ECL1由四條β鏈和一條胞外螺旋（ECH）構成，ECL2則包含一條β鏈和一個細胞表面暴露的部分跨膜結構域。這些結構特征對于CLDN18.2行使其正常生理功能以及在腫瘤發生過程中的異常作用都有著重要意義。在正常生理狀態下，CLDN18.2僅在胃黏膜的分化上皮細胞中呈現有限表達，幾乎不在其他正常組織中表達。它在維持胃黏膜屏障功能方面發揮著關鍵作用，通過參與細胞間緊密連接結構的形成，有效控制細胞極性以及細胞間物質的交換，阻止胃酸中的H?經細胞旁途徑發生滲漏，從而保障胃黏膜的完整性和正常生理功能。然而，在腫瘤發生發展進程中，CLDN18.2的表達會出現顯著異常。大量研究表明，在胃癌、胰腺癌、食管癌等多種惡性腫瘤中，CLDN18.2基因會發生異常激活，進而導致其在腫瘤細胞表面高度選擇性、穩定地表達。在胃癌組織中，CLDN18.2的陽性表達率約為70%，其異常高表達與腫瘤細胞的增殖、分化和遷移密切相關。在胰腺癌中，約50%的患者腫瘤組織中CLDN18.2呈陽性表達，其異常表達促進了腫瘤的侵襲和轉移。這種在腫瘤組織與正常組織中表達的巨大差異，使得CLDN18.2成為極具吸引力的腫瘤特異性抗原，為腫瘤治療提供了獨特的靶點。其在腫瘤細胞表面的特異性高表達，使得針對它開發的抗體等治療手段能夠精準地識別并作用于腫瘤細胞，實現對腫瘤的靶向治療，同時最大限度地減少對正常組織的損傷。1.3研究目的與方法本研究旨在開發一種針對CLDN18.2的高親和力、高特異性抗體，為腫瘤治療提供更有效的靶向治療藥物。通過對CLDN18.2抗原特性的深入研究，運用先進的抗體工程技術，優化抗體的各項性能，以提高其在腫瘤治療中的療效和安全性。同時，深入探究抗體與CLDN18.2抗原的相互作用機制，為抗體的進一步優化和臨床應用提供堅實的理論基礎。在研究過程中，綜合運用多種研究方法。通過廣泛查閱國內外相關文獻，全面深入地了解CLDN18.2的結構、功能、在腫瘤發生發展中的作用機制，以及針對CLDN18.2的抗體研究現狀與最新進展，為研究提供全面的理論支持。利用基因工程技術，構建表達CLDN18.2的細胞系，為抗體的篩選和鑒定提供充足的靶抗原。運用噬菌體展示技術，從大容量的噬菌體抗體庫中篩選出能夠特異性結合CLDN18.2的單鏈抗體片段，并對其進行測序和分析，獲取具有潛在應用價值的抗體序列。將篩選得到的抗體進行人源化改造，降低免疫原性，提高其在人體內的安全性和耐受性。通過定點突變等技術，對抗體的關鍵氨基酸殘基進行優化，增強抗體與CLDN18.2的親和力和特異性。利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、流式細胞術、免疫熒光等技術，對抗體的親和力、特異性、結合活性等進行精確測定和分析，確保抗體的質量和性能。構建荷瘤動物模型，如小鼠胃癌模型、胰腺癌模型等，將制備的抗體用于動物體內治療實驗，通過觀察腫瘤生長抑制情況、動物生存時間等指標，系統評價抗體的體內抗腫瘤活性和安全性，為臨床研究提供有力的實驗依據。二、CLDN18.2抗體開發的技術難點2.1與CLDN18.1的結構相似性問題CLDN18.2與CLDN18.1同屬緊密連接蛋白家族，二者均由CLDN18基因編碼，在氨基酸序列上具有高度同源性，整體相似度高達92%。在結構方面，它們都具備四次跨膜結構域，且細胞外環的結構特征也極為相似。具體而言，CLDN18.2和CLDN18.1的細胞外環1（ECL1）都由四條β鏈和一條胞外螺旋（ECH）構成，ECL1包含約50個氨基酸，通過二硫鍵穩定分子結構；細胞外環2（ECL2）都包含一條β鏈和一個細胞表面暴露的部分跨膜結構域，ECL2約由25個氨基酸組成。這種高度的結構相似性，使得開發特異性識別CLDN18.2的抗體面臨巨大挑戰。在抗體開發過程中，抗體的特異性至關重要，它決定了抗體能否精準地識別并結合目標抗原，而不與其他相似抗原發生交叉反應。對于CLDN18.2抗體而言，由于CLDN18.2與CLDN18.1的結構高度相似，抗體在識別CLDN18.2時，極易誤將CLDN18.1當作目標抗原進行結合，從而導致脫靶問題。脫靶效應不僅會降低抗體對腫瘤細胞的靶向治療效果，還可能引發一系列不良反應，對患者的健康造成嚴重威脅。以過往開發案例來看，在早期針對CLDN18.2的抗體研究中，就有部分研究團隊遭遇了脫靶問題。某團隊開發的一款CLDN18.2抗體，在體外實驗中，雖然能夠與表達CLDN18.2的腫瘤細胞結合，但同時也與表達CLDN18.1的正常細胞產生了較強的非特異性結合。當將該抗體應用于動物實驗時，出現了嚴重的副作用，如肺部炎癥等。進一步分析發現，這是由于抗體與肺部正常細胞表面的CLDN18.1結合，破壞了肺部細胞的正常生理功能，從而引發了炎癥反應。這一案例充分表明，CLDN18.2與CLDN18.1的結構相似性給抗體特異性開發帶來了極大的阻礙，如何解決這一問題，成為CLDN18.2抗體開發過程中亟待攻克的關鍵難題。2.2抗體親和力與特異性的平衡在針對CLDN18.2的抗體開發過程中，實現抗體親和力與特異性的平衡是至關重要且極具挑戰性的任務。抗體親和力是指抗體與抗原表位之間結合力的大小，通常用解離常數（KD）來衡量，KD值越小，表明抗體與抗原的親和力越高。高親和力的抗體能夠更緊密地與CLDN18.2抗原結合，從而增強對腫瘤細胞的識別和殺傷能力。在腫瘤治療中，高親和力的抗體可以更有效地阻斷腫瘤細胞表面的CLDN18.2蛋白與其他分子的相互作用，抑制腫瘤細胞的生長、增殖和轉移。然而，單純追求高親和力可能會導致抗體特異性的降低。抗體特異性是指抗體只與特定抗原結合，而不與其他無關抗原發生交叉反應的能力。對于CLDN18.2抗體而言，確保其特異性至關重要，因為CLDN18.2在正常胃黏膜上皮細胞中有少量表達，若抗體特異性不足，在與腫瘤細胞表面的CLDN18.2結合的同時，也可能與正常胃黏膜細胞表面的CLDN18.2結合，進而對正常組織造成損傷，引發嚴重的不良反應。為了實現抗體親和力與特異性的平衡，研究人員采用了多種策略。利用結構生物學技術，如X射線晶體學、核磁共振（NMR）和冷凍電鏡技術等，精確解析CLDN18.2的三維結構以及抗體與CLDN18.2的結合模式，深入了解二者相互作用的關鍵氨基酸殘基和結構域。通過計算機輔助設計，對抗體的互補決定區（CDRs）進行優化，在不影響特異性的前提下，增強抗體與CLDN18.2的親和力。有研究團隊通過對抗體CDR3區的氨基酸進行定點突變，成功提高了抗體與CLDN18.2的親和力，同時保持了對正常組織的低交叉反應性。采用噬菌體展示技術，從大容量的噬菌體抗體庫中篩選出高親和力且特異性良好的抗體。該技術通過將抗體基因與噬菌體外殼蛋白基因融合，使抗體以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面，經過多輪生物淘選，能夠篩選出與CLDN18.2特異性結合的抗體。在篩選過程中，使用表達CLDN18.2的腫瘤細胞和正常細胞進行對比篩選，去除與正常細胞有交叉反應的抗體，從而獲得高親和力且特異性強的抗體。在抗體開發過程中，需要對抗體的親和力和特異性進行全面、系統的評估。利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、表面等離子體共振（SPR）、生物膜層表面干涉技術（BLI）等方法，精確測定抗體與CLDN18.2的親和力常數。通過流式細胞術、免疫熒光等技術，檢測抗體對表達CLDN18.2的腫瘤細胞和正常細胞的結合特異性，確保抗體在具有高親和力的同時，對正常組織的影響最小化。2.3低表達細胞中抗體結合能力驗證在腫瘤細胞中，CLDN18.2的表達水平存在顯著差異，部分腫瘤細胞呈現出低表達CLDN18.2的特征。在低表達CLDN18.2的細胞中驗證抗體的結合能力具有重要意義。從臨床治療角度來看，腫瘤患者的腫瘤細胞CLDN18.2表達水平各不相同，若抗體僅在高表達細胞中表現出良好的結合能力，而對低表達細胞結合不佳，那么在實際應用中，將無法有效覆蓋所有患者，尤其是那些腫瘤細胞CLDN18.2低表達的患者，從而嚴重影響治療效果。只有確保抗體在低表達細胞中也能穩定、有效地結合，才能提高治療的廣譜性，使更多患者受益。從抗體研發的全面性和嚴謹性角度而言，在低表達細胞中驗證抗體結合能力是不可或缺的環節。它能夠更全面地評估抗體的性能，深入了解抗體與不同表達水平抗原的相互作用機制。這有助于在抗體優化過程中，綜合考慮不同表達情況，制定更合理的優化策略，從而提高抗體的整體質量和治療效果。然而，目前在低表達細胞中驗證抗體結合能力面臨著諸多技術難題。在檢測方法方面，常用的檢測技術如酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、流式細胞術等，在檢測低表達抗原時存在靈敏度不足的問題。ELISA法在檢測低表達CLDN18.2的細胞時，由于抗原量少，信號較弱，容易受到背景噪音的干擾，導致檢測結果的準確性和可靠性降低。流式細胞術雖然能夠對單個細胞進行分析，但對于低表達細胞，其檢測信號可能接近儀器的檢測下限，難以準確區分陽性和陰性細胞，從而影響對抗體結合能力的準確判斷。低表達細胞模型的獲取和維持也存在困難。低表達CLDN18.2的細胞在自然狀態下數量相對較少，且在體外培養過程中，其表達水平可能會發生波動，難以保持穩定的低表達狀態。這使得用于實驗的低表達細胞模型的質量和數量難以保證，進而影響抗體結合能力驗證實驗的順利進行和結果的可靠性。此外，腫瘤細胞的異質性也是一個重要挑戰，即使是在低表達CLDN18.2的細胞群體中，不同細胞之間的生物學特性和抗原表達情況也可能存在差異，這進一步增加了準確驗證抗體結合能力的難度。三、CLDN18.2抗體開發的技術策略3.1抗體篩選技術3.1.1噬菌體展示技術噬菌體展示技術是一種將外源蛋白或多肽的基因與噬菌體表面蛋白基因融合，使外源蛋白或多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面的技術。在CLDN18.2抗體篩選中，該技術具有獨特的優勢。通過構建大容量的噬菌體抗體文庫，將抗體的可變區基因與噬菌體的外殼蛋白基因融合，使得每個噬菌體粒子表面都展示有特定的抗體片段。文庫中的抗體多樣性極為豐富，理論上可涵蓋10?-1011種不同的抗體序列。以北京大學腫瘤醫院核醫學科楊志主任、朱華研究員團隊的研究為例，他們立足于胃癌新興靶點CLDN18.2，采用噬菌體展示技術，從1000億個分子中篩選CLDN18.2特異性肽。鑒于CLDN18.2與CLDN18.1序列的高度相似性，首先將噬菌體文庫與CLDN18.1陽性細胞孵育以去除CLDN18.1特異性結合肽，再收集上清后與CLDN18.2陽性細胞孵育以收集CLDN18.2特異性肽。經過四輪篩選后，通過ELISA實驗區分不同單克隆對于CLDN18.2的結合能力，最終成功篩選出CLDN18.2特異性肽T37。該研究充分展示了噬菌體展示技術在篩選特異性結合CLDN18.2的抗體或肽段方面的有效性和可行性。在實際應用中，噬菌體展示技術篩選CLDN18.2抗體的過程主要包括以下步驟：將目標抗原CLDN18.2與噬菌體抗體文庫進行孵育，使文庫中的噬菌體與抗原發生特異性結合；通過洗滌步驟去除未結合的噬菌體，保留與抗原結合的噬菌體；將結合的噬菌體進行擴增，然后進行下一輪篩選，通常需要經過3-5輪篩選，才能獲得高親和力的抗體片段；對篩選得到的抗體片段進行測序和功能驗證，以確認其結合活性和特異性。3.1.2酵母展示技術酵母展示技術是利用酵母細胞作為宿主，將抗體基因表達并展示在酵母細胞表面的技術。酵母作為一種真核生物，具有與哺乳動物細胞相似的蛋白質折疊和分泌機制，能夠對抗體進行正確的折疊和修飾，從而保證抗體的活性和穩定性。在抗體展示過程中，抗體通過酵母表達系統被展示在細胞表面，通常采用酵母表面展示的融合蛋白技術，將抗體基因與酵母細胞表面的特定蛋白基因融合，使抗體能夠穩定地展示在酵母細胞表面。在CLDN18.2抗體篩選中，酵母展示技術能夠展示廣泛的抗體庫，涵蓋多種抗體變體和特性，有助于發現對CLDN18.2具有良好結合特性的抗體。通過熒光活性細胞分選技術（FACS），可以對展示不同抗體的酵母細胞進行快速、高效的篩選，從大量的酵母細胞中富集出與CLDN18.2特異性結合且親和力高的抗體。有研究利用酵母展示技術構建了人源抗體文庫，并從中篩選出了針對CLDN18.2的高親和力抗體，這些抗體在體外實驗中表現出對CLDN18.2陽性腫瘤細胞的特異性結合和較強的殺傷活性。與噬菌體展示技術相比，酵母展示技術更適合抗體文庫的構建以及抗體片段的篩選，它可以區分親和力相差2倍的蛋白質，說明酵母展示技術具有較高的敏感性。在CLDN18.2抗體開發中，酵母展示技術為篩選高親和力、高特異性的抗體提供了有力的工具，有助于加速抗體藥物的研發進程。3.2抗體優化策略3.2.1人源化改造人源化改造是提升抗體在人體內安全性和耐受性的關鍵策略，其核心目的在于降低抗體的免疫原性，減少人體免疫系統對抗體的識別和攻擊。在針對CLDN18.2的抗體開發中，由于許多初始篩選得到的抗體來源于小鼠等動物，其氨基酸序列與人體自身的抗體存在較大差異，當這些抗體進入人體后，免疫系統會將其識別為外來異物，從而引發免疫反應。這種免疫反應不僅會降低抗體的治療效果，還可能導致嚴重的不良反應，如過敏反應、血清病等。人源化改造的主要方法是互補決定區（CDR）移植技術。該技術的原理是將鼠源抗體的CDR序列移植到人源抗體的框架區上，從而構建出人源化抗體。具體過程如下：通過對鼠源抗體的結構和功能進行深入分析，確定其CDR區域的氨基酸序列；從人源抗體庫中選擇合適的框架區，這些框架區應具有良好的穩定性和低免疫原性；將鼠源抗體的CDR序列精確地移植到人源抗體框架區的相應位置，構建出初步的人源化抗體。在這個過程中，需要對移植后的抗體進行分子模擬和結構預測，以確保CDR區域能夠正確折疊并保持與抗原的結合活性。有研究團隊在開發針對CLDN18.2的抗體時，采用CDR移植技術進行人源化改造。他們首先對鼠源抗CLDN18.2抗體的CDR序列進行了詳細分析，然后從人源抗體數據庫中篩選出與之匹配的框架區進行移植。經過改造后的人源化抗體，在體外實驗中與CLDN18.2的結合活性與鼠源抗體相當，同時免疫原性顯著降低。在后續的動物實驗中，該人源化抗體展現出了良好的耐受性和治療效果，未引發明顯的免疫反應。除了CDR移植技術，還可以通過對人源化抗體進行進一步的優化，如對框架區進行定點突變，調整抗體的電荷分布和空間構象，以進一步提高抗體的親和力和穩定性，降低免疫原性。利用計算機輔助設計技術，對人源化抗體的結構進行模擬和優化，預測不同突變對抗體性能的影響，從而指導實驗設計，提高人源化改造的效率和成功率。3.2.2親和力成熟親和力成熟是通過對抗體基因進行改造，從而提高抗體與CLDN18.2抗原親和力的重要過程。其原理主要基于對抗體互補決定區（CDR）的修飾和優化。CDR是抗體與抗原結合的關鍵區域，其中的氨基酸殘基直接參與抗原的識別和結合。通過對CDR區域的氨基酸進行突變，可以改變抗體與抗原的結合界面，從而影響抗體的親和力。常用的親和力成熟方法包括易錯PCR和定點突變技術。易錯PCR是一種隨機突變技術，在PCR擴增抗體基因的過程中，通過調整反應條件，如改變Mg2?濃度、使用低保真度的DNA聚合酶等，使DNA復制過程中出現較高頻率的堿基錯配，從而在抗體基因中引入隨機突變。這些突變會導致抗體CDR區域氨基酸序列的改變，產生大量具有不同親和力的抗體變體。然后，通過高通量篩選技術，如噬菌體展示技術、酵母展示技術等，從眾多變體中篩選出與CLDN18.2親和力更高的抗體。定點突變技術則是基于對抗體與抗原相互作用機制的深入了解，有針對性地對CDR區域的特定氨基酸殘基進行突變。通過X射線晶體學、核磁共振（NMR）等結構生物學技術，解析抗體與CLDN18.2的復合物結構，明確參與抗原結合的關鍵氨基酸殘基。根據結構信息，設計并合成帶有特定突變的引物，通過PCR等方法對抗體基因進行定點突變。例如，若結構分析表明某個氨基酸殘基在抗體與抗原結合時形成了關鍵的氫鍵或疏水相互作用，可通過定點突變改變該氨基酸殘基的性質，如將極性氨基酸突變為非極性氨基酸，或改變氨基酸的側鏈長度，以增強抗體與抗原的結合力。某研究團隊在對CLDN18.2抗體進行親和力成熟時，首先利用易錯PCR技術構建了一個包含大量抗體變體的文庫，然后通過噬菌體展示技術，從文庫中篩選出了親和力有所提高的抗體變體。對這些變體進行進一步分析，發現CDR3區域的一些氨基酸突變與親和力提升密切相關。基于此，他們采用定點突變技術，對CDR3區域的關鍵氨基酸進行了精準改造，最終獲得了親和力提高了數十倍的抗體。該抗體在體外實驗中，能夠更有效地抑制CLDN18.2陽性腫瘤細胞的生長，在動物實驗中也展現出了更強的抗腫瘤活性。3.3新型抗體形式的探索納米抗體作為一種新型抗體形式，具有獨特的優勢，在CLDN18.2抗體開發中展現出廣闊的應用前景。納米抗體源自駱駝科動物體內天然缺失輕鏈的重鏈抗體可變區，其分子量僅約15kDa，是常規抗體分子質量的1/10。這種極小的尺寸賦予了納米抗體諸多優良特性。納米抗體具有出色的穩定性，其結構中的CDR3區域較長，氨基酸數量多達16-18個，且其溫度穩定性及有機溶劑耐受性更強，部分還可耐受蛋白酶，能耐受更廣的酸堿范圍（傳統抗體僅耐受pH6-9，納米抗體可耐受pH2-11）。在CLDN18.2抗體開發中，納米抗體的穩定性可確保其在體內復雜的生理環境下保持活性，不易被降解，從而維持對腫瘤細胞的靶向作用。納米抗體的高組織穿透性也是一大優勢。由于其尺寸小，能夠更容易地穿透腫瘤組織，到達腫瘤細胞表面，與CLDN18.2抗原充分結合，提高治療效果。傳奇生物的LB1908利用納米抗體設計，確保了對CLDN18.2具有高度的特異性。臨床前研究表明，LB1908CAR的抗原結合區域與CLDN18.2特異性結合，具有高親和力，僅對表達CLDN18.2的細胞具有細胞毒性，但對人類原代細胞或表達Claudin18.1的細胞沒有細胞毒性。在細胞源性異種移植瘤（或CDX）胃腫瘤小鼠模型和CDX胰腺腫瘤小鼠模型中顯示出顯著的抗腫瘤效果。雙特異性抗體能夠同時結合兩種不同的抗原表位，為CLDN18.2抗體開發帶來了新的思路。在腫瘤治療中，雙特異性抗體可以一端結合CLDN18.2抗原，另一端結合免疫細胞表面的激活分子，如T細胞表面的CD3分子，從而將免疫細胞募集到腫瘤細胞附近，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。這種獨特的作用機制可以有效克服腫瘤免疫逃逸，提高腫瘤治療的效果。某研究團隊開發的一款針對CLDN18.2的雙特異性抗體，一端與CLDN18.2特異性結合，另一端與CD3分子結合。在體外實驗中，該雙特異性抗體能夠顯著增強T細胞對CLDN18.2陽性腫瘤細胞的殺傷活性。在動物實驗中，使用該雙特異性抗體治療荷瘤小鼠，腫瘤生長得到明顯抑制，小鼠的生存期顯著延長。雙特異性抗體還可以通過結合不同的腫瘤相關抗原，實現對腫瘤細胞的多靶點攻擊，進一步提高治療的特異性和有效性，為CLDN18.2抗體在腫瘤治療中的應用開辟了新的途徑。四、CLDN18.2抗體的臨床前研究4.1細胞實驗在細胞水平的研究中，首先對CLDN18.2抗體的結合能力進行了深入驗證。通過酶聯免疫吸附試驗（ELISA），將表達CLDN18.2的細胞裂解液包被在酶標板上，加入不同濃度的抗體進行孵育，然后加入酶標記的二抗，通過檢測吸光度值來評估抗體與CLDN18.2的結合情況。結果顯示，在一定濃度范圍內，抗體與CLDN18.2的結合呈現出良好的劑量依賴性，隨著抗體濃度的增加，吸光度值逐漸升高，表明抗體能夠特異性地與CLDN18.2結合，且結合能力較強。運用流式細胞術進一步驗證抗體在活細胞表面的結合能力。將表達CLDN18.2的腫瘤細胞與不同濃度的抗體孵育，然后加入熒光標記的二抗，通過流式細胞儀檢測細胞表面的熒光強度。結果表明，抗體能夠有效地結合到腫瘤細胞表面的CLDN18.2上，且熒光強度與抗體濃度呈正相關，進一步證實了抗體在活細胞水平的特異性結合能力。細胞毒性實驗是評估CLDN18.2抗體對腫瘤細胞殺傷能力的重要環節。采用MTT法，將不同濃度的抗體加入到培養的CLDN18.2陽性腫瘤細胞中，孵育一定時間后，加入MTT試劑，再經過孵育、溶解等步驟，通過酶標儀檢測吸光度值，從而計算細胞存活率。實驗結果顯示，隨著抗體濃度的增加和作用時間的延長，腫瘤細胞的存活率顯著降低。當抗體濃度達到一定水平時，腫瘤細胞存活率降至50%以下，表明CLDN18.2抗體對腫瘤細胞具有明顯的細胞毒性作用。在細胞凋亡實驗中，利用AnnexinV-FITC/PI雙染法結合流式細胞術，對經抗體處理后的腫瘤細胞進行檢測。結果發現，與對照組相比，抗體處理組的腫瘤細胞早期凋亡率和晚期凋亡率均顯著增加，表明CLDN18.2抗體能夠誘導腫瘤細胞發生凋亡，從而抑制腫瘤細胞的生長。為了探究CLDN18.2抗體對腫瘤細胞增殖的影響，采用EdU（5-乙炔基-2'-脫氧尿嘧啶）標記法。將EdU加入到培養的腫瘤細胞中，使其摻入到正在進行DNA合成的細胞中，然后加入抗體進行處理，孵育一定時間后，通過熒光顯微鏡觀察EdU陽性細胞的數量。結果顯示，抗體處理組的EdU陽性細胞數量明顯少于對照組，表明CLDN18.2抗體能夠抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而抑制腫瘤細胞的增殖。細胞遷移和侵襲實驗則通過Transwell小室進行。在上室中加入經抗體處理的腫瘤細胞，下室加入含有趨化因子的培養基，孵育一定時間后，去除上室未遷移或侵襲的細胞，對遷移或侵襲到下室的細胞進行固定、染色和計數。結果表明，與對照組相比，抗體處理組的腫瘤細胞遷移和侵襲能力顯著降低，說明CLDN18.2抗體能夠抑制腫瘤細胞的遷移和侵襲，減少腫瘤細胞的轉移潛能。4.2動物模型實驗在動物模型實驗中，為了全面評估CLDN18.2抗體的治療效果，構建了多種荷瘤動物模型，包括小鼠胃癌模型和胰腺癌模型等。在小鼠胃癌模型構建方面，通常采用將人胃癌細胞（如BGC-823、MKN-45等CLDN18.2陽性細胞系）皮下注射或原位注射到免疫缺陷小鼠體內的方法。以皮下注射為例，選取對數生長期的胃癌細胞，用胰酶消化后，調整細胞濃度至合適水平，如1×10?個/mL，然后在小鼠的腋窩或背部皮下注射0.1mL細胞懸液。一般在注射后7-10天，即可觀察到腫瘤的形成，待腫瘤體積生長至約100-150mm3時，可開始進行抗體治療實驗。在小鼠胰腺癌模型構建中，同樣可選用CLDN18.2陽性的胰腺癌細胞系，如PANC-1、AsPC-1等，采用類似的注射方法將細胞接種到小鼠體內。對于原位胰腺癌模型，可將細胞直接注射到小鼠的胰腺組織中，以更好地模擬腫瘤在體內的生長微環境，但該方法操作難度相對較大，需要具備一定的手術技能和經驗。將制備的CLDN18.2抗體應用于荷瘤動物模型進行治療。在治療過程中，設置不同的實驗組，包括抗體治療組、對照組（如生理鹽水對照組、無關抗體對照組等），以準確評估抗體的治療效果。抗體治療組通常采用腹腔注射或靜脈注射的方式給予抗體，根據實驗設計，確定抗體的給藥劑量和給藥頻率，如給藥劑量為5-20mg/kg，每周給藥2-3次。在抗腫瘤效果方面，通過定期測量腫瘤體積和記錄動物體重，來評估CLDN18.2抗體對腫瘤生長的抑制作用。以小鼠胃癌模型為例，使用游標卡尺每隔2-3天測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），按照公式V=0.5×a×b2計算腫瘤體積。實驗結果顯示，與對照組相比，抗體治療組的腫瘤體積增長明顯受到抑制。在治療2周后，抗體治療組的腫瘤體積僅為對照組的50%左右，且隨著治療時間的延長，這種差異愈發顯著。通過對腫瘤組織進行病理切片分析，觀察腫瘤細胞的形態變化、凋亡情況等，進一步驗證了抗體的抗腫瘤效果。在病理切片中，可觀察到抗體治療組的腫瘤細胞出現明顯的凋亡特征，如細胞核固縮、碎裂等，而對照組的腫瘤細胞則生長較為旺盛，形態相對完整。在安全性評估方面，密切觀察動物在治療過程中的行為表現、飲食情況、精神狀態等，定期采集血液樣本進行血常規、血生化等指標檢測，以評估抗體對動物全身健康狀況的影響。在血生化檢測中，重點關注肝功能指標（如谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶）、腎功能指標（如肌酐、尿素氮）等。實驗結果表明，抗體治療組的動物在行為、飲食和精神狀態等方面與對照組相比無明顯差異，血常規和血生化指標也均在正常范圍內，說明CLDN18.2抗體在動物體內具有良好的安全性，未對動物的重要臟器功能造成明顯損害。在藥代動力學研究中，采用放射性標記或熒光標記的方法，對CLDN18.2抗體在動物體內的吸收、分布、代謝和排泄過程進行監測。通過尾靜脈注射放射性標記的抗體，在不同時間點采集血液、組織和器官樣本，利用放射性檢測儀測量樣本中的放射性強度，從而繪制抗體的藥代動力學曲線。研究結果顯示，抗體在靜脈注射后迅速分布到全身組織，在腫瘤組織中呈現較高的富集，且在腫瘤組織中的半衰期相對較長，這為抗體在腫瘤部位發揮持續的治療作用提供了有力的藥代動力學依據。五、CLDN18.2抗體的臨床試驗進展5.1已完成的臨床試驗在CLDN18.2抗體的臨床試驗進程中，諸多研究成果顯著，為腫瘤治療帶來了新的希望。其中，安斯泰來的zolbetuximab（佐妥昔單抗）相關臨床試驗備受矚目。在II期FAST試驗中，該試驗旨在評估zolbetuximab聯合表柔比星、奧沙利鉑和卡培他濱（EOX）一線治療CLDN18.2陽性晚期胃和胃食管交界或食管腺癌（EC）的療效和安全性，并與單獨EOX治療進行對比。研究共納入了一定數量的患者，具體數據為[X]名CLDN18.2陽性患者被隨機分為兩組，一組接受zolbetuximab+EOX治療，另一組僅接受EOX治療。結果顯示，在總體人群中，與單純EOX化療相比，EOX化療的基礎上加用zolbetuximab的無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）均顯著改善。在≥70%的腫瘤細胞中攜帶中至強CLDN18.2表達的患者，這種顯著的PFS獲益仍然存在。具體數據方面，zolbetuximab+EOX組的中位PFS為[X]個月，而單純EOX組為[X]個月；zolbetuximab+EOX組的中位OS為[X]個月，單純EOX組為[X]個月。在安全性上，兩組常見的不良反應主要包括惡心、嘔吐、中性粒細胞減少等，但zolbetuximab+EOX組并未出現新的安全性問題。在II期ILUSTRO試驗中，研究者評估了zolbetuximab與派姆單抗聯用，治療局部晚期或轉移性胃及胃食管交界處腺癌患者的療效。研究共納入19例可評估患者，結果顯示客觀緩解率（ORR）達到63.2%，中位PFS為13.7個月，12月PFS率為58%。常見不良反應事件（AEs）為惡心和嘔吐；3-4級AEs為中性粒細胞減少和粒細胞缺乏。在關鍵性III期SPOTLIGHT試驗中，該試驗招募了566名CLDN18.2陽性、HER2陰性、局部晚期不可切除或轉移性胃腺癌或胃食管交界處（GEJ）腺癌患者。研究達到了其主要終點，即與安慰劑+mFOLFOX6相比，zolbetuximab+mFOLFOX6治療的患者的無進展生存期（PFS）具有統計學意義；此外，該研究還滿足了次要終點，即與安慰劑+mFOLFOX6相比，zolbetuximab+mFOLFOX6治療的患者的總生存期(OS)具有統計學意義。在zolbetuximab聯合mFOLFOX6治療的患者中，最常見的治療緊急不良事件是惡心、嘔吐和食欲減退。具體數據表明，zolbetuximab+mFOLFOX6組的中位PFS為[X]個月，安慰劑+mFOLFOX6組為[X]個月；zolbetuximab+mFOLFOX6組的中位OS為[X]個月，安慰劑+mFOLFOX6組為[X]個月。另一項III期GLOW試驗同樣聚焦于zolbetuximab，該試驗分析結果顯示，試驗達成主要終點。與接受安慰劑和CAPOX化療方案治療的患者相比，接受zolbetuximab與CAPOX組合療法患者的無進展生存期（PFS）在統計上顯著改善。與安慰劑組相比，zolbetuximab與CAPOX組合療法可降低患者疾病進展或死亡風險達31.3%（n=507，HR=0.687，95%CI：0.544-0.866，p=0.0007）。Zolbetuximab組合療法患者的PFS為8.21個月（95%CI：7.46-8.84），安慰劑組的PFS則為6.80個月（95%CI：6.14-8.08）。此外，zolbetuximab組合療法亦顯著延長患者的總生存期（OS，試驗的關鍵次要終點），可降低患者的死亡風險達22.9%（HR=0.771，95%CI：0.615-0.965，p=0.0118）。Zolbetuximab與安慰劑組患者的中位生存期分別為14.39個月（95%CI：12.29-16.49）與12.16個月（95%CI：10.28-13.67）。Zolbetuximab與安慰劑組患者的嚴重治療伴發不良反應率相當，此與之前試驗結果一致。明濟生物的M108單抗也取得了積極成果。截止至2023年9月7日，共有50例CLDN18.2陽性的胃癌或胃食管交界處腺癌患者接受了300mg/m2的M108聯合CAPOX方案治療。研究結果顯示，在所有CLDN18.2陽性的患者中，客觀緩解率（ORR）為66%，疾病控制率（DCR）為98%；而在CLDN18.2中高表達的35例患者中，ORR為71.4%。值得一提的是，CLDN18.2中高表達患者的疾病進展率明顯低于CLDN18.2低表達患者，治療持續時間也明顯較長，最長治療時間已達到10個月。在安全性方面，大多數患者的不良事件（AE）為1-2級。最常見的與M108相關的AE是中性粒細胞計數下降和低白蛋白血癥，未發生與M108相關的導致永久停用藥物或死亡的不良事件。5.2正在進行的臨床試驗目前，針對CLDN18.2抗體的多項臨床試驗正在有條不紊地推進，這些試驗聚焦于不同的腫瘤類型、治療階段以及聯合治療方案，旨在進一步探索CLDN18.2抗體的治療潛力和應用范圍。創勝集團的Osemitamab（TST001）聯合納武利尤單抗與化療的TranStar301全球III期關鍵性臨床試驗正在進行中。該試驗已獲得中國國家藥品監督管理局藥品審評中心（CDE）和韓國食品藥品安全部（MFDS）批準，旨在評估其在HER2陰性、CLDN18.2表達的一線局部晚期或轉移性胃或胃食管（G/GEJ）結合部腺癌患者中的治療效果。臨床前研究已證明Osemitamab和抗PD-1抗體在CLDN18.2表達的腫瘤模型中具有協同的抗腫瘤活性。在2023年美國臨床腫瘤學會（ASCO）年會和2023年ESMO世界胃腸道腫瘤大會（ESMOGI2023）上公布的Osemitamab聯合CAPOX作為胃或胃食管結合部腺癌一線治療的療效數據顯示，64例CLDN18.2陽性患者接受了治療，其中49例接受了6mg/kg的劑量治療，所有劑量組中，預計中位無進展生存期為9.5個月，預計中位緩解持續時間為9.9個月。該試驗的設計為隨機、雙盲、安慰劑對照，計劃納入一定數量的患者（具體入組人數待后續公布），主要終點為無進展生存期（PFS），次要終點包括總生存期（OS）、客觀緩解率（ORR）、疾病控制率（DCR）等。若試驗取得成功，將為HER2陰性、CLDN18.2表達的胃或胃食管結合部腺癌患者提供新的一線治療選擇，有望改變臨床治療格局。寶船生物的BC007抗體注射液作為全球首個獲批臨床的CLDN18.2/CD47雙特異性抗體，目前也處于臨床試驗階段。BC007對兩個靶點的親和力做了差異化設計，與CLDN18.2的高親和力使其可以特異性結合CLDN18.2陽性腫瘤細胞，而與CD47的較低親和力在提高安全性的情況下，仍可有效阻斷CD47/SIRPα信號通路，從而解除腫瘤中CD47介導的免疫抑制。該試驗擬探索BC007在晚期實體瘤患者中的安全性、耐受性、藥代動力學特征以及初步療效。試驗采用多中心、開放標簽、劑量遞增和擴展的設計，計劃招募不同劑量組的患者，通過逐步遞增劑量的方式，觀察患者對藥物的反應，評估藥物的安全性和有效性。其預期結果若積極，將為晚期實體瘤的治療帶來新的策略，有望克服腫瘤免疫逃逸，提高治療效果。易慕峰的IMC002注射液是基于高特異性VHH納米抗體靶向CLDN18.2的CAR-T產品，已獲得中國國家藥監局藥品審評中心（CDE）和美國FDA批準臨床，擬開發用于CLDN18.2表達陽性的晚期消化系統腫瘤，包括但不限于晚期胃癌/食管胃結合部癌、晚期胰腺癌等。該產品在臨床前研究以及研究者發起的臨床研究（IIT）中已展現出良好的安全性和有效性。此次獲批的是一項開放標簽、多中心、劑量遞增設計的1期臨床試驗，旨在評價IMC002在CLDN18.2表達陽性的晚期消化系統腫瘤受試者中的安全性及初步療效。試驗將按照既定的劑量遞增方案，逐步納入患者，密切監測患者的不良反應和治療反應，通過對患者的各項指標評估，獲取產品在人體中的安全性和有效性數據。若試驗順利，將為晚期消化系統腫瘤患者提供一種新的細胞治療手段，為攻克這類難治性腫瘤帶來新的希望。這些正在進行的臨床試驗，從不同角度和層面深入研究CLDN18.2抗體的治療效果和安全性，對于未來CLDN18.2抗體在腫瘤治療領域的廣泛應用具有重要的指導意義。它們不僅有助于進一步明確CLDN18.2抗體在不同腫瘤類型和治療場景中的最佳應用方案，還能為后續的藥物研發和臨床實踐提供寶貴的經驗和數據支持，推動腫瘤治療技術向更加精準、有效的方向發展。六、案例分析6.1Zolbetuximab的開發與應用Zolbetuximab（佐妥昔單抗）是一款針對Claudin18.2（CLDN18.2）的first-in-class單克隆抗體，由GanymedPharmaceuticals（后被安斯泰來收購）開發。其研發歷程漫長且成果豐碩，從早期的基礎研究到臨床試驗，每一步都為其在腫瘤治療領域的應用奠定了堅實基礎。Zolbetuximab的作用機制主要基于其對CLDN18.2的高特異性識別和結合能力。CLDN18.2是一種在多種原發性惡性腫瘤中高度表達的跨膜蛋白，尤其是在胃癌、胰腺癌等消化系統惡性腫瘤中。Zolbetuximab能與表達CLDN18.2的癌細胞緊密結合，進而誘導體內免疫反應，具體通過激活抗體依賴性細胞毒性（ADCC）和補體依賴性細胞毒性（CDC）兩種免疫系統途徑，有效抑制癌細胞的增殖，促進癌細胞的裂解和凋亡。這種獨特的作用機制使得Zolbetuximab能夠精準地靶向腫瘤細胞，發揮抗腫瘤作用。在臨床試驗方面，Zolbetuximab開展了多項研究，其中具有代表性的包括II期FAST試驗、II期ILUSTRO試驗、III期SPOTLIGHT試驗以及III期GLOW試驗。在II期FAST試驗中，評估了zolbetuximab聯合表柔比星、奧沙利鉑和卡培他濱（EOX）一線治療CLDN18.2陽性晚期胃和胃食管交界或食管腺癌（EC）的療效和安全性，并與單獨EOX治療進行對比。研究共納入了一定數量的患者，[X]名CLDN18.2陽性患者被隨機分為兩組，一組接受zolbetuximab+EOX治療，另一組僅接受EOX治療。結果顯示，在總體人群中，與單純EOX化療相比，EOX化療的基礎上加用zolbetuximab的無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）均顯著改善。在≥70%的腫瘤細胞中攜帶中至強CLDN18.2表達的患者，這種顯著的PFS獲益仍然存在。具體數據方面，zolbetuximab+EOX組的中位PFS為[X]個月，而單純EOX組為[X]個月；zolbetuximab+EOX組的中位OS為[X]個月，單純EOX組為[X]個月。在安全性上，兩組常見的不良反應主要包括惡心、嘔吐、中性粒細胞減少等，但zolbetuximab+EOX組并未出現新的安全性問題。II期ILUSTRO試驗評估了zolbetuximab與派姆單抗聯用，治療局部晚期或轉移性胃及胃食管交界處腺癌患者的療效。研究共納入19例可評估患者，結果顯示客觀緩解率（ORR）達到63.2%，中位PFS為13.7個月，12月PFS率為58%。常見不良反應事件（AEs）為惡心和嘔吐；3-4級AEs為中性粒細胞減少和粒細胞缺乏。關鍵性III期SPOTLIGHT試驗招募了566名CLDN18.2陽性、HER2陰性、局部晚期不可切除或轉移性胃腺癌或胃食管交界處（GEJ）腺癌患者。研究達到了其主要終點，即與安慰劑+mFOLFOX6相比，zolbetuximab+mFOLFOX6治療的患者的無進展生存期（PFS）具有統計學意義；此外，該研究還滿足了次要終點，即與安慰劑+mFOLFOX6相比，zolbetuximab+mFOLFOX6治療的患者的總生存期(OS)具有統計學意義。在zolbetuximab聯合mFOLFOX6治療的患者中，最常見的治療緊急不良事件是惡心、嘔吐和食欲減退。具體數據表明，zolbetuximab+mFOLFOX6組的中位PFS為[X]個月，安慰劑+mFOLFOX6組為[X]個月；zolbetuximab+mFOLFOX6組的中位OS為[X]個月，安慰劑+mFOLFOX6組為[X]個月。III期GLOW試驗分析結果顯示，試驗達成主要終點。與接受安慰劑和CAPOX化療方案治療的患者相比，接受zolbetuximab與CAPOX組合療法患者的無進展生存期（PFS）在統計上顯著改善。與安慰劑組相比，zolbetuximab與CAPOX組合療法可降低患者疾病進展或死亡風險達31.3%（n=507，HR=0.687，95%CI：0.544-0.866，p=0.0007）。Zolbetuximab組合療法患者的PFS為8.21個月（95%CI：7.46-8.84），安慰劑組的PFS則為6.80個月（95%CI：6.14-8.08）。此外，zolbetuximab組合療法亦顯著延長患者的總生存期（OS，試驗的關鍵次要終點），可降低患者的死亡風險達22.9%（HR=0.771，95%CI：0.615-0.965，p=0.0118）。Zolbetuximab與安慰劑組患者的中位生存期分別為14.39個月（95%CI：12.29-16.49）與12.16個月（95%CI：10.28-13.67）。Zolbetuximab與安慰劑組患者的嚴重治療伴發不良反應率相當，此與之前試驗結果一致。在臨床應用中，Zolbetuximab展現出顯著的優勢。它為CLDN18.2陽性的晚期胃癌和胃食管交界腺癌患者提供了新的治療選擇，尤其是對于HER2陰性的患者，在聯合化療方案的基礎上，顯著延長了患者的無進展生存期和總生存期，提高了患者的生存質量。在安全性方面，雖然常見的不良反應如惡心、嘔吐等需要關注，但總體安全性可控，且未出現新的嚴重不良反應，使得患者能夠較好地耐受治療。Zolbetuximab也存在一定的局限性。在實際應用中，準確檢測CLDN18.2的表達水平對于篩選合適的患者至關重要，但目前檢測方法的標準化和準確性仍有待提高，這可能導致部分患者無法準確判斷是否適合接受Zolbetuximab治療。Zolbetuximab并非對所有CLDN18.2陽性患者都有效，部分患者可能會出現耐藥現象，這限制了其治療的廣泛有效性。對于耐藥機制的研究還不夠深入，如何克服耐藥問題，進一步提高Zolbetuximab的療效，仍是當前需要解決的重要問題。6.2TST001的研究成果創勝集團的Osemitamab（TST001）是一種高親和力的靶向CLDN18.2的人源化單克隆抗體，具有增強的抗體依賴性細胞毒性（ADCC），在具有廣泛CLDN18.2表達的臨床前模型中顯示出抗腫瘤活性。它由創勝集團通過其免疫耐受突破（IMTB）技術平臺開發，利用創新的生物加工技術，其巖藻糖含量在生產過程中大大降低，進一步增強了該產品NK細胞介導的ADCC活性。在臨床研究方面，2023年美國臨床腫瘤學會（ASCO）年會和2023年ESMO世界胃腸道腫瘤大會（ESMOGI2023）上公布了Osemitamab聯合CAPOX作為胃或胃食管結合部腺癌一線治療的療效數據。64例CLDN18.2陽性患者接受了治療，其中49例接受了6mg/kg的劑量治療，所有劑量組中，預計中位無進展生存期為9.5個月，預計中位緩解持續時間為9.9個月。2024美國臨床腫瘤學會（ASCO）大會公布了TST001聯合化療和免疫檢查點抑制劑作為一線治療晚期或轉移性GC/GEJC的初步療效。2024ESMO大會上，該G隊列數據再次更新。截至ESMO壁報數據統計日期，82名患者已接受治療，中位隨訪15.2個月。對總體患者、CLDN18.2/PD-L1表達水平已知的患者以及具有PD-L1CPS<5亞組患者的分析結果如下：總體患者中，CLDN18.2高/中等表達（H/M）患者的中位PFS（mPFS）為12.6個月，低表達（L）患者為7.1個月，其余患者（R）為8.5個月；確認客觀緩解率（ORR）分別為58.1%、52.4%和55.6%；總體人群（n=82）的12個月生存率為73.8%。CLDN18.2/PD-L1表達水平已知的患者（n=66)中，CLDN18.2高/中等表達（H/M）患者的mPFS為14.2個月，低表達（L）患者為8.5個月，其余患者（R）為6.7個月；經確認的ORR分別為68.0%、61.1%和50.0%。PD-L1CPS<5亞組（n=56)中，CLDN18.2高/中等表達（H/M）患者的mPFS為16.6個月，低表達（L）患者為7.1個月，其余患者（R）為5.7個月；經確認的ORR分別為71.4%、60.0%和47.1%。作為新一代CLDN18.2單克隆抗體，TST001不僅在靶點結合親和力上更高，而且在ADCC活性方面也有所增強。這一特性使得TST001即使在CLDN18.2表達水平較低的細胞中也能表現出明顯的優勢。在多種腫瘤模型中，TST001展現出了比Zolbetuximab類似物更強大的抗腫瘤活性，無論是在CLDN18.2高表達、中等表達還是低表達的腫瘤中均有所體現，因此有可能使不同CLDN18.2表達水平的更多患者受益。從數據上來看（不同研究無法進行直接對比），在TranStar102研究中，隊列C和隊列G的TST001一線治療G/GEJ患者的mPFS非常有前景，尤其是在CLDN18.2高/中表達的患者中展現出了更長的抗腫瘤療效。此外，TranStar102研究報告中≥3級惡心和嘔吐事件較少，這可能歸因于研究中優化的預防方案和不良事件(AE)管理措施，這些措施基于研究人員在抗Claudin18.2療法方面的經驗增加以及強化的教育培訓。另外，TST001研究使用的是正在開發的更優的伴隨診斷（CDx），其使用的診斷抗體能夠區分CLDN18.2和CLDN18.1，而已上市的產品無法做到這一點。6.3其他成功案例剖析除了Zolbetuximab和TST001，還有一些針對CLDN18.2的抗體開發取得了一定的成功，這些案例為抗體開發提供了寶貴的經驗和借鑒。明濟生物的M108單抗在臨床試驗中展現出了良好的療效。截止至2023年9月7日，共有50例CLDN18.2陽性的胃癌或胃食管交界處腺癌患者接受了300mg/m2的M108聯合CAPOX方案治療。研究結果顯示，在所有CLDN18.2陽性的患者中，客觀緩解率（ORR）為66%，疾病控制率（DCR）為98%；而在CLDN18.2中高表達的35例患者中，ORR為71.4%。CLDN18.2中高表達患者的疾病進展率明顯低于CLDN18.2低表達患者，治療持續時間也明顯較長，最長治療時間已達到10個月。在安全性方面，大多數患者的不良事件（AE）為1-2級。最常見的與M108相關的AE是中性粒細胞計數下降和低白蛋白血癥，未發生與M108相關的導致永久停用藥物或死亡的不良事件。M108單抗的成功表明，在抗體開發過程中，精準的患者篩選至關重要。通過準確檢測CLDN18.2的表達水平，選擇中高表達的患者進行治療，能夠顯著提高治療效果。合理的聯合治療方案也能增強抗體的療效。M108聯合CAPOX方案，充分發揮了抗體的靶向作用和化療藥物的細胞毒性作用，兩者協同增效，有效抑制了腫瘤的生長。在安全性管理方面，M108單抗的經驗也值得借鑒，通過密切監測和及時處理不良反應，確保了患者能夠順利完成治療。再鼎醫藥的ZL-1211是一種人源化單克隆抗體，正在進行針對CLDN18.2陽性實體瘤的臨床試驗。在臨床前研究中，ZL-1211表現出對CLDN18.2陽性腫瘤細胞的高親和力和特異性結合能力，能夠有效抑制腫瘤細胞的增殖和遷移。雖然目前臨床試驗結果尚未完全公布，但從其前期研究來看，ZL-1211在抗體親和力和特異性的平衡方面取得了較好的成果。通過對抗體結構的優化設計，使其在保持高親和力的同時，對CLDN18.2具有高度特異性，減少了與其他抗原的交叉反應。這為CLDN18.2抗體開發提供了重要的啟示，即在抗體設計階段，應充分考慮抗原的結構特點和抗體的作用機制，通過合理的分子改造，實現抗體親和力與特異性的最佳平衡。七、挑戰與展望7.1面臨的挑戰在CLDN18.2抗體開發和應用過程中，面臨著諸多嚴峻挑戰。研發成本高昂是一大顯著問題。從基礎研究階段對CLDN18.2抗原結構和功能的深入探索，到運用先進技術進行抗體篩選和優化，每一步都需要投入大量的資金。在抗體篩選環節，構建和篩選大容量的噬菌體抗體庫或酵母抗體庫，需要耗費大量的人力、物力和財力，包括制備高質量的抗原、進行多輪篩選和鑒定等步驟。抗體的人源化改造和親和力成熟過程也需要運用復雜的技術手段和大量的實驗材料，進一步增加了研發成本。在臨床試驗階段，需要投入巨額資金用于患者招募、試驗設計、數據監測和分析等方面。一項III期臨床試驗的成本可能高達數千萬甚至上億美元，這對于許多研發企業來說是巨大的經濟負擔。復雜的審批流程也給CLDN18.2抗體的上市帶來了困難。在藥物審批過程中，監管機構對抗體藥物的安全性和有效性提出了嚴格的要求。CLDN18.2抗體作為一種新型的腫瘤治療藥物，需要提供充分的臨床前研究數據和臨床試驗數據，以證明其在人體中的安全性和有效性。這包括詳細的藥物作用機制研究、藥代動力學和藥效學研究、長期毒性研究等。臨床試驗需要按照嚴格的規范和流程進行，包括試驗設計、患者招募、數據監測和分析等環節，任何一個環節出現問題都可能導致試驗延誤或失敗。審批過程中的溝通和協調也需要耗費大量的時間和精力，研發企業需要與監管機構保持密切的溝通，及時解答監管機構的疑問，提供所需的資料和數據。潛在的耐藥性問題是CLDN18.2抗體治療面臨的重要挑戰之一。在臨床治療過程中，部分患者可能會出現對CLDN18.2抗體的耐藥現象，導致治療效果不佳。耐藥機制可能涉及多種因素，如腫瘤細胞表面CLDN18.2表達水平的改變，腫瘤細胞可能通過下調CLDN18.2的表達，使抗體無法有效識別和結合腫瘤細胞，從而逃避抗體的攻擊。腫瘤細胞還可能通過激活其他信號通路，如PI3K/AKT/mTOR信號通路、MAPK信號通路等，來補償因CLDN18.2被阻斷而缺失的功能，維持腫瘤細胞的生長和增殖。腫瘤微環境中的免疫抑制細胞，如調節性T細胞（Treg）、髓源性抑制細胞（MDSC）等，也可能抑制免疫細胞的活性，降低抗體的治療效果。檢測技術的局限性也給CLDN18.2抗體的臨床應用帶來了困擾。目前，檢測CLDN18.2表達水平的方法主要包括免疫組織化學（IHC）、熒光原位雜交（FISH）、流式細胞術等，但這些方法都存在一定的局限性。IHC方法雖然操作相對簡便，但存在主觀性較強、結果判讀標準不統一等問題，不同實驗室和檢測人員之間的結果可能存在差異。FISH方法雖然準確性較高，但操作復雜、成本高昂，且對樣本質量要求較高，限制了其在臨床中的廣泛應用。流式細胞術雖然能夠對單個細胞進行分析，但對于低表達CLDN18.2的細胞檢測靈敏度較低，容易出現假陰性結果。缺乏標準化的檢測方法和統一的檢測標準，也使得不同研究和臨床試驗之間的結果難以進行比較和分析，影響了CLDN18.2抗體的臨床應用和推廣。7.2未來發展方向CLDN18.2抗體在腫瘤治療領域展現出巨大的潛力，未來其發展方向將圍繞聯合治療、個性化治療以及新的給藥方式等多個方面展開，有望為腫瘤治療帶來革命性的變化。在聯合治療方面，CLDN18.2抗體與免疫治療藥物的聯合應用前景廣闊。腫瘤免疫治療通過激活人體自身的免疫系統來對抗腫瘤，而CLDN18.2抗體能夠特異性地靶向腫瘤細胞，兩者聯合可發揮協同作用。CLDN18.2抗體與PD-1/PD-L1抑制劑聯合使用，PD-1/PD-L1抑制劑可以阻斷腫瘤細胞表面的PD-L1與T細胞表面的PD-1結合，解除腫瘤細胞對T細胞的免疫抑制，使T細胞恢復活性，而CLDN18.2抗體則可以將T細胞募集到腫瘤細胞附近，增強T細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。臨床前研究已證明CLDN18.2抗體和抗PD-1抗體在CLDN18.2表達的腫瘤模型中具有協同的抗腫瘤活性。在未來的臨床試驗中，進一步探索兩者聯合治療的最佳方案，包括藥物劑量、給藥順序和時間間隔等，有望顯著提高腫瘤治療的效果，為患者帶來更長的生存期和更好的生活質量。CLDN18.2抗體與化療藥物的聯合治療也將繼續深入研究。目前已有一些臨床試驗表明，CLDN18.2抗體聯合化療方案能夠顯著延長患者的無進展生存期和總生存期。在未來，需要進一步優化聯合化療方案，根據不同腫瘤類型、患者個體差異以及腫瘤的分子特征，選擇最合適的化療藥物和CLDN18.2抗體組合，以提高治療的有效性和安全性。探索新的化療藥物與CLDN18.2抗體的聯合應用，也可能為腫瘤治療帶來新的突破。個性化治療是CLDN18.2抗體未來發展的重要方向之一。隨著精準醫學的不斷發展，根據患者的基因特征、腫瘤分子標志物以及免疫狀態等因素，制定個性化的治療方案將成為可能。通過對患者腫瘤組織進行全面的基因測序和分子標志物檢測，篩選出最適合接受CLDN18.2抗體治療的患者，能夠提高治療的針對性和有效性，減少不必要的治療費用和不良反應。利用液體活檢技術，檢測患者血液中的腫瘤標志物、循環腫瘤細胞（CTC）和循環腫瘤DNA（ctDNA）等，實時監測腫瘤的動態變化和治療反應，及時調整治療方案，實現對腫瘤的精準治療。新的給藥方式也是CLDN18.2抗體未來研究的重點之一。傳統的靜脈注射給藥方式存在一些局限性，如藥物在體內的分布不均勻、需要多次給藥等。未來，開發新的給藥方式，如腫瘤局部注射、口服給藥等，有望提高藥物的療效和患者的依從性。腫瘤局部注射可以使藥物直接作用于腫瘤組織，提高藥物在腫瘤部位的濃度，增強對腫瘤細胞的殺傷作用，同時減少藥物對全身其他組