乙醇含量檢測試劑盒實驗解決方案原理酒是含酒精（乙醇）飲料的統稱，乙醇是酒的主要成分，是衡量酒質量的重要指標之一。乙醇可用于制造醋酸、飲料、香精、染料、燃料等，醫療上常用體積分數為70%~75%的乙醇作消毒劑。乙醇在化學工業、醫療衛生、食品工業、農業生產等領域都有廣泛的用途。CheKine?乙醇含量檢測試劑盒（微量法）可檢測動植物組織，細菌和細胞、血清或血漿等生物樣本。在該試劑盒中，乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛，同時，NAD被還原生成NADH，NADH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色，通過450nm下測定吸光值變化可測得乙醇含量。自備耗材·酶標儀或可見光分光光度計（能測450nm處的吸光度）·96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭、1.5mL離心管·水浴鍋、離心機·去離子水·勻漿器或研缽（如果是組織樣本）試劑準備ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。ReagentⅡ：臨用前配制；48T加入3mLReagentIII，96T加入6mLReagentIII，充分溶解，用不完的試劑-20℃避光分裝保存1個月，避免反復凍融。ReagentⅢ：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ReagentⅣ：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。注意：ReagentⅣ有一定的刺激性，建議在使用過程中做好個人防護。WorkingReagent：每孔準備160μLWorkingReagent，現配現用。吸取100μLReagentⅠ，50μLReagentII和10μLReagentIV，混合均勻。Standard：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。5μmol/mL標準品：臨用前取58.4μL標準品加入941.6μL去離子水配成1,000μmol/mL的標準溶液；再取50μL1,000μmol/mL的標準溶液加入950μL去離子水配成50μmol/mL的標準溶液；再取100μL50μmol/mL的標準溶液加入900μL去離子水配成5μmol/mL的標準溶液用于下述標準孔的測定。樣本制備注意：建議使用新鮮樣本。如果不立即使用，可將樣品在-80℃下保存一個月。測定時，應控制解凍的溫度和時間。室溫環境下解凍時，需在4h內完成樣品解凍。組織：稱取約0.1g樣本，加入1mL去離子水，冰浴勻漿，8,000g，室溫離心10min，取上清液待測。細菌和細胞：收集500萬細菌或細胞到離心管內，用冷PBS清洗細菌或細胞，離心后棄上清，加入1mL去離子水，冰浴超聲波破碎細菌或細胞30次（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s），然后8,000g，室溫離心10min，取上清液待測。血清（漿）等液體樣本：直接檢測。注意：如需測定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號：KTD3001的蛋白質定量試劑盒（BCA法）進行樣本蛋白質濃度測定。實驗步驟酶標儀或可見光分光光度計預熱30min以上，調節波長到450nm，可見光分光光度計用去離子水調零。操作表（下述操作在96孔板或微量玻璃比色皿中操作）：試劑標準孔（μL）測定孔（μL）樣本040Standard400WorkingReagent160160充分混勻，記錄450nm處吸光值A1和37℃避光孵育10min后的吸光值A2，標準孔記為A標準，測定孔記為A測定。計算ΔA=A2-A1。注意：標準管只需做1-2次。實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果ΔA測定小于0.001可適當加大樣本量。如果ΔA測定大于0.6，樣本可用去離子水進一步稀釋，計算結果乘以稀釋倍數，或減少提取用樣本量。結果計算注意：我們為您提供的計算公式，包括推導過程計算公式和簡潔計算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡潔計算公式為最終計算公式。乙醇含量的計算按樣本蛋白濃度計算：乙醇(μmol/mgprot)=[C標準×(ΔA測定÷ΔA標準)×V樣]÷(Cpr×V樣÷V樣總)=5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr按樣本鮮重計算：乙醇(μmol/g鮮重)=[C標準×(ΔA測定÷ΔA標準)×V樣]÷(W×V樣÷V樣總)=5×ΔA測定÷ΔA標準÷W按照細菌或細胞數量計算乙醇(μmol/104)=[C標準×(ΔA測定÷ΔA標準)×V樣]÷(n×V樣÷V樣總)=5×ΔA測定÷ΔA標準÷n按樣本體積計算：乙醇(μmol/mL)=C標準×(ΔA測定÷ΔA標準)=5×ΔA測定÷ΔA標準C標準：標準溶液的濃度，5μmol/mL；V樣：加入反應體系中的樣本體積，0.025mL；V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；n：細菌或細胞數量，萬；W：樣本質量，g。結果展示以下數據僅供參考，實驗者需根據自己的實驗對樣品進行檢測。Figure1.本試劑盒測定牛肝臟和水稻莖葉中乙醇的含量相關產品CatalogNo.ProductN