維生素E（VE）含量檢測試劑盒實驗解決方案原理維生素E（VE）是一種脂溶性維生素，其水解產物為生育酚，是生物體中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸受到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預防溶血性貧血作用，在醫藥、化妝品、保健品、食品行業具有較高的應用價值。VE還原Fe3+為Fe2+，Fe2+與1,10-菲羅啉產生有色絡合物，在530nm有特征吸收峰。自備耗材·酶標儀或可見光分光光度計（能測530nm處的吸光度）·96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭·恒溫水浴鍋、離心機、渦旋震蕩儀·去離子水·勻漿器或研缽（如果是組織樣本）試劑準備ExtractionBuffer：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。注意：ExtractionBuffer有刺激性氣味，ReagentⅠ有毒且有刺激性氣味，建議在通風櫥進行實驗。ReagentII：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ReagentIII：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ReagentIV：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。樣本制備注意：推薦使用新鮮樣本，如果不立即進行實驗，樣本可在-80℃保存1個月。測定時，應控制解凍的溫度和時間。室溫環境下解凍時，需在4h內完成樣品解凍。組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLExtractionBuffer，勻漿后用ExtractionBuffer定容至1mL，在漩渦震蕩儀上震蕩5min，于5,000g，25℃離心10min，取上清液待測。細胞：收集500萬細胞到離心管內，用冷PBS清洗細胞，離心后棄上清，加入1mLExtractionBuffer，冰浴超聲波破碎細胞3min（功率300W，超聲3s，間隔7s，總時間3min），然后在漩渦震蕩儀上震蕩5min，于5,000g，25℃離心10min，取上清液待測。血清（漿）等液體樣本：取0.1mL，加0.9mLExtractionBuffer，漩渦儀震蕩上震蕩5min，于5,000g，25℃離心10min，取上清液待測。注意：如需測定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號：KTD3001的蛋白質定量試劑盒（BCA法）進行樣本蛋白質濃度測定。實驗步驟酶標儀或可見光分光光度計預熱30min，調節波長到530nm。可見光分光光度計用去離子水調零。操作表（下述操作在96孔板或微量玻璃比色皿中進行）：試劑對照孔（μL）測定孔（μL）樣本上清100100ReagentⅠ2020ReagentII020ReagentIII200充分混勻，25℃孵育5minReagentIV6060混勻，于530nm處測定吸光值，分別記為A對照、A測定，計算ΔA=A測定-A對照。注意：每個測定孔需設一個對照孔，實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本的ΔA小于0.02，可適當增大樣本量；若反應體系產生沉淀，或者樣本的ΔA大于0.5，樣本可用ExtractionBuffer進一步稀釋，再進行實驗，乘以最終的稀釋倍數。結果計算注意：我們為您提供的計算公式，包括推導過程計算公式和簡潔計算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡潔計算公式為最終計算公式。用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下標準條件下測定回歸方程為：y=0.22x+0.0065,R2=0.9978；x為標準品（μg/mL），y為ΔA。（1）按照蛋白含量計算VE(μg/mgprot)=(ΔA-0.0065)÷0.22×V反總÷(V樣×Cpr)=9.09×(ΔA-0.0065)÷Cpr（2）按照樣本質量計算VE(μg/g鮮重)=(ΔA-0.0065)÷0.22×V反總÷(V樣×W÷V樣總)=9.09×(ΔA-0.0065)÷W（3）按照細胞數量計算VE(μg/104cell)=(ΔA-0.0065)÷0.22×V反總÷(V樣×N÷V樣總)=9.09×(ΔA-0.0065)÷N（4）按照液體體積計算VE(μg/mL)=(ΔA-0.0065)÷0.22×V反總÷V樣×10=90.9×(ΔA-0.0065)V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入ExtractionBuffer體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細胞數量，萬。用96孔板測定的計算公式如下標準條件下測定回歸方程為：y=0.11x+0.0065,R2=0.9978；x為標準品（μg/mL），y為ΔA。（1）按照蛋白含量計算VE(μg/mgprot)=(ΔA-0.0065)÷0.11×V反總÷(V樣×Cpr)=18.18×(ΔA-0.0065)÷Cpr（2）按照樣本質量計算VE(μg/g鮮重)=(ΔA-0.0065)÷0.11×V反總÷(V樣×W÷V樣總)=18.18×(ΔA-0.0065)÷W（3）按照細胞數量計算VE(μg/104cell)=(ΔA-0.0065)÷0.11×V反總÷(V樣×N÷V樣總)=18.18×(ΔA-0.0065)÷N（4）按照液體體積計算VE(μg/mL)=(ΔA-0.0065)÷0.11×V反總÷V樣×10=181.8×(ΔA-0.0065)V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入ExtractionBuffer體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細胞數量，萬。注意事項1.離心后，在吸取上層正庚烷抽提液時，切勿將中間無水乙醇與水的液相層吸入，以免影響試驗結果。2.比色皿需用無水乙醇沖洗，勿用去離子水以防出現分層影響試驗數據。3.顯色結束后盡快完成測定。結果展示