第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)

細(xì)胞化學(xué)(或組織化學(xué))是組織學(xué)的一個(gè)分支，是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上研究細(xì)胞的生物化學(xué)成分,及其定位、定量及代謝功能狀態(tài)的學(xué)科。

經(jīng)典細(xì)胞化學(xué)從1830年問世以來已經(jīng)逐步完善。經(jīng)過19世紀(jì)中葉重氮染料的應(yīng)用，到上世紀(jì)初已將酶的組化反應(yīng)顯示出來，上世紀(jì)50年代對哺乳動(dòng)物和人白細(xì)胞的過氧化酶、堿性磷酸酶、酯酶、溶酶體等染色技術(shù)相繼出現(xiàn)，并不斷完善。

近代細(xì)胞化學(xué)則在此基礎(chǔ)上，吸收并運(yùn)用生物化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的基本原理與技術(shù)，從細(xì)胞分子水平研究細(xì)胞形態(tài)與功能的關(guān)系。近年來又發(fā)展了放射自顯影、免疫熒光和免疫酶標(biāo)等免疫組織化學(xué)新技術(shù)。對研究核蛋白的合成、細(xì)胞動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞胞漿和膜免疫球蛋白合成、細(xì)胞分化抗原表達(dá)以及白血病和淋巴瘤的免疫學(xué)分型研究中，發(fā)揮了巨大的作用。

隨著雜交瘤技術(shù)和DNA重組技術(shù)的不斷發(fā)展和應(yīng)用，發(fā)展了原位雜交細(xì)胞化學(xué)，通過染色體基因定位、核酸分子原位雜交、原位聚合酶鏈反應(yīng),洞察單個(gè)細(xì)胞內(nèi)原癌基因的激活、擴(kuò)增及表達(dá)變化等。細(xì)胞化學(xué)染色臨床應(yīng)用

輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型。

輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷?

觀察疾病療效和預(yù)后。

發(fā)病機(jī)制的探討。細(xì)胞化學(xué)染色步驟

固定顯示復(fù)染意義：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分的不變。目的：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、酶類、糖類等變成不溶性物質(zhì)。方法：物理法：干燥火焰化學(xué)法：甲醛乙醇甲醇丙酮等。

蒸氣固定：甲醛極易揮發(fā)、氧化，用40％甲醛進(jìn)行蒸氣固定。

液體固定：將涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可用兩種或兩種以上固定液混合而成。固定通過不同化學(xué)反應(yīng)，最終形成穩(wěn)定有色沉淀，顯示出被檢測的化學(xué)物質(zhì)。

偶氮偶聯(lián)法：特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色，AcP等。

聯(lián)苯胺法：過氧化物酶染色。

普魯士藍(lán)反應(yīng)：鐵染色。

雪夫反應(yīng)：如過碘酸-雪夫反應(yīng)。

金屬沉淀法：金屬及其化合物一般都有顏色，故形成的沉淀物為有色物質(zhì)，如鈣-鈷法ALP。顯示復(fù)染的目的在于使各種細(xì)胞能顯示出來以，便于觀察。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，既能使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚地看出細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果。

核著色效果較好：蘇木精、核固紅、中性紅、甲基綠、沙黃等，

漿著色較好:伊紅、剛果紅、光綠。

復(fù)染

陽性率：觀察100個(gè)需計(jì)數(shù)的細(xì)胞，其陽性細(xì)胞的個(gè)數(shù)，即為其陽性率。

陽性指數(shù)：將計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞，按不同強(qiáng)度的細(xì)胞個(gè)數(shù)乘以相對應(yīng)強(qiáng)度之和。例：（+）×1+（++）×2+

（+++）×3+（++++）×4陽性率及陽性指數(shù)計(jì)算法髓過氧化物酶染色（MPO）

蘇丹黑染色（SBB）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（N-ALP）酸性磷酸酶染色（AcP）鐵染色特異性酯酶（CE）非特異性酯酶（NSE）糖原染色（PAS）細(xì)胞化學(xué)染色項(xiàng)目髓過氧化物酶染色

（Myeloperoxidase，MPO）

血細(xì)胞所含過氧化物酶主要為髓過氧化物酶(MPO)，MPO是一類糖蛋白，相對分子質(zhì)量約為150000，是人類中性粒細(xì)胞含量最多的蛋白質(zhì)，約占細(xì)胞干重的3%~5%。

MPO基因定位在染色體

17q11～q22為單拷貝基因

MPO的生物合成和加工過程研究發(fā)現(xiàn)，無MPO活性。MPO前體還需進(jìn)一步進(jìn)入溶酶體，經(jīng)蛋白切割后才能成熟并具有活性。

過氧化酶的實(shí)驗(yàn)方法

1958年Washburn復(fù)方聯(lián)苯胺法

1965年Kaplow

二鹽酸聯(lián)苯胺法

1985年血液學(xué)國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)

二氨基聯(lián)苯胺法（DAB染色法）過氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法二鹽酸聯(lián)苯胺法聯(lián)苯胺方法二氨基聯(lián)苯胺法二鹽酸聯(lián)苯胺法

MPO染色原理

細(xì)胞顆粒中的過氧化酶，能將過氧化氫中的氧釋放出來，氧化二氨基聯(lián)苯胺（DAB），形成金黃色沉淀而定位于過氧化酶活性的部位。

粒細(xì)胞系

原粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性，陽性反應(yīng)物為粗顆粒聚集狀。自早幼粒細(xì)胞及以后各階段中性粒細(xì)胞均為陽性反應(yīng)，并隨細(xì)胞成熟程度其反應(yīng)漸加強(qiáng)，但衰老的細(xì)胞因過氧化酶活性降低而反應(yīng)減弱。

嗜酸粒細(xì)胞為強(qiáng)陽性反應(yīng)。

嗜堿粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。MPO正常參考結(jié)果

其它細(xì)胞

成熟單核細(xì)胞、組織細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)；

幼紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞及血小板均為陰性反應(yīng)。

MPO臨床意義

POX主要存在于線粒體和溶酶體中，定位于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞嗜天青顆粒中。急性白血病MPO反應(yīng)強(qiáng)弱順序

M3>M2b>M2a>M6(粒)>M4>M1>M5>HAL>ALL

ALLMPO陰性

50年代至今有人主張MPO>3%，Haspos主張MPO>5%為ANLL，隨著免疫技術(shù)的發(fā)展，檢測手段增多，提示我們MPO低陽性率時(shí)，注意急性混合型白血病和M0。ALL和ANLL的鑒別急性淋巴細(xì)胞白血病MPO陰性

急性混合型白血病MPO急性非淋巴細(xì)胞白血病MPO特點(diǎn)

粒系MPO

原粒細(xì)胞

陰性或弱陽性反應(yīng)（+～++）陽性反應(yīng)物顆粒粗大，聚集。

早幼粒細(xì)胞以下階段隨著細(xì)胞分化成熟而增強(qiáng).

中幼粒和晚幼粒細(xì)胞陽性物充滿胞漿，少部分蓋在細(xì)胞核上，（++～++++）。

M2b中異常中幼粒細(xì)胞MPO呈強(qiáng)陽性，部分異常中幼粒細(xì)胞陽性物在細(xì)胞核的凹陷處聚集成團(tuán)，呈團(tuán)塊狀反應(yīng)。M2bMPO染色呈團(tuán)塊樣反應(yīng)

急性早幼粒細(xì)胞白血病是一種在臨床、形態(tài)和細(xì)胞遺傳學(xué)方面有明顯特征的AML亞型。MPO呈強(qiáng)陽性反應(yīng)（+++）～（++++）。陽性物深棕黃色充滿胞漿，細(xì)胞外漿一般為陰性。

原始單核細(xì)胞溶解度很小，缺乏MPO活性，陰性或陽性。

幼稚單核細(xì)胞陰性或弱陽性反應(yīng)。陽性反應(yīng)物顆粒細(xì)小,散在分布于細(xì)胞漿與細(xì)胞核上。單核系MPOM4MPO染色

有些粒細(xì)胞白血病表現(xiàn)過氧化酶缺乏。Nielsen等報(bào)道AML患者出現(xiàn)嚴(yán)重感染時(shí)中性粒細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)MPO缺乏。有個(gè)別M3也表現(xiàn)出（-），可能由于在轉(zhuǎn)錄過程中出現(xiàn)異常。如還有一部分呈現(xiàn)強(qiáng)陽性，這提示MPO基因的表達(dá)并不完全喪失，可能是由于部分轉(zhuǎn)錄（transcribed）或產(chǎn)生了不穩(wěn)定的無效RNA所致。過氧化酶缺乏過氧化酶缺乏原始及幼稚巨核細(xì)胞和漿細(xì)胞MPO陰性蘇丹黑B染色法

（sudanblack）

脂類包括中性脂肪和類脂(磷脂、糖脂和膽固醇等)，脂類不僅在體內(nèi)貯存熱量和供給熱量，而且構(gòu)成細(xì)胞各種質(zhì)膜的重要成分。脂蛋白構(gòu)成細(xì)胞的各種質(zhì)膜，與細(xì)胞的生理功能有密切關(guān)系。

蘇丹黑B可溶解于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的含脂結(jié)構(gòu)，將胞質(zhì)中的中性脂肪、磷脂及膽固醇等脂類染色呈棕黑色或深黑色顆粒，定位于胞質(zhì)中。SBB染色原理粒系原粒細(xì)胞為陰性或弱陽性反應(yīng)。自早幼粒細(xì)胞以后各階段中性粒細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，且隨細(xì)胞成熟程度陽性反應(yīng)逐漸增強(qiáng)。嗜酸粒細(xì)胞為嗜酸顆粒邊緣深染而中央為蛋白質(zhì)淡染或粗大圓球狀棕黑色陽性反應(yīng)。嗜堿粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)，顆粒大小不一，大的具有嗜蘇丹黑殼及核心。

SBB染色正常參考結(jié)果

單核細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞陰性或弱陽性；

幼紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞以及血小板陰性。

SBB與MPO臨床意義及反應(yīng)順序基本一致：

M3>M2b>M2a>M6（粒）>M4>M1>M5>HAL>ALL

SBB染色的臨床意義

急淋：各階段淋巴細(xì)胞SBB均呈陰性反應(yīng)。但國內(nèi)外均有報(bào)道ALLSBB染色可見陽性，1984年StassSA報(bào)道350例ALL有6例陽性，占1.6%，4例L1、2例L2，SBB陽性率>5%，最高64%，而POX和CE均為陰性。

ALL與ANLL的鑒別

ALLSBB(-)ALLSBB(+)

SBB除染初級顆粒外，還能染不同的脂類，包括中性脂肪、磷脂和膽固醇。白血病細(xì)胞內(nèi)脂類代謝異常可導(dǎo)致SBB陽性。

這些病例可能代表淋巴系和髓系混合白血病，但可能性小，認(rèn)為SBB陽性ALL是ALL的一個(gè)特殊的細(xì)胞化學(xué)亞類，并對治療方案發(fā)生良好反應(yīng)。

原始粒細(xì)胞SBB染色陰性，分化較好原始粒細(xì)胞在核周Golgi器開始出現(xiàn)弱陽性反應(yīng)，陽性物顆粒粗大，聚集，濃縮。早幼粒及以下階段粒細(xì)胞SBB為陽性，陽性強(qiáng)度（++～++++）。ANLLSBB染色

M2b中部分分化不好的異常中幼粒細(xì)胞SBB在細(xì)胞核的凹陷處，呈團(tuán)塊狀反應(yīng)；發(fā)育好的異常中幼粒細(xì)胞陽性物充滿胞漿，呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。

APL異常早幼粒細(xì)胞SBB反應(yīng)最強(qiáng)，強(qiáng)度為（+++）～（++++）。嗜酸細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞SBB染色

原、幼單核細(xì)胞SBB

陰性或弱陽性

陽性物顆粒細(xì)小，散在分布于細(xì)胞漿與細(xì)胞核上。

M4SBB染色ANLL細(xì)胞內(nèi)的Auer小體

表現(xiàn)強(qiáng)的嗜蘇丹黑B染色。

漿細(xì)胞和原始及幼稚巨核細(xì)胞SBB陰性

酯酶(Esterase)

酯酶屬于水解酶，水解羧酸酯。是一組在不同pH條件下，水解各種脂肪族或芳香族酯類的酶，根據(jù)酯酶存在的細(xì)胞類型、催化底物和pH不同等。可大致將其分成特異性酯酶和非特異性酯酶兩大類。水解短鏈脂肪酸酯為非特異性酯酶，萘AS-D氯乙酸鹽作底物稱為特異性酯酶。

1973年Li把人的WBC分離成無細(xì)胞的液體，在pH6.3-7.4，用聚丙烯酰胺凝膠電泳證明人血細(xì)胞含有九種酯酶同工酶，而不同的血細(xì)胞所含同工酶亦不相同。

粒細(xì)胞系1，2，7，8，9

淋巴細(xì)胞1，6

單核細(xì)胞系、血小板4，5，3，6

毛細(xì)胞5

α-醋酸萘酯丁酸萘酯氯醋酸AS-D4，5

較強(qiáng)

強(qiáng)

+／-1，2+／--/+強(qiáng)Li把酯酶分成三大類

非特異性酯酶

中性非特異性酯酶

α-醋酸萘酯酶

(Alpha-naphtholacltateesterase)

醋酸萘酯AS-D酯酶

(NaphtholAS-Dacltate

asterase)

醋酸萘酚AS酯酶

(NaphtholASacltase)

酸性非特異性酯酶

α-醋酸萘酯酶

α-丁酸萘酯酶

(Alpha-Naphthol

butynate

asterase)

堿性非特異性酯酶

α-丁酸萘酯酶

特異性酯酶

氯乙酸萘酚AS-D酯酶

(NaphtholAS-Dchloroacetate

esterase)

氨基乙酸

特異性酯酶

naphtholAS-Dchloroacetateesterase，

SPE，CE

CE通常被看成是粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞的標(biāo)志酶，分布局限，很多報(bào)道都強(qiáng)調(diào)了它對粒細(xì)胞有較強(qiáng)的特異性。

1953年Gomori首先證明了中性粒細(xì)胞含有SPE，與1960年探討了SPE染色原理，并比較了多種合成萘酚AS-D氯乙酸酯，提出此酶主要存在于粒系統(tǒng)里，在粒系白血病，原始粒細(xì)胞為強(qiáng)陽性反應(yīng)，但成熟粒細(xì)胞的酶反應(yīng)下降。1960年開始應(yīng)用與臨床。CE染色實(shí)驗(yàn)臨床應(yīng)用

國外1960年

Moloney

固紫醬法

1971年

Yam付品紅

1975年

Leden

stull

付品紅pH6.3國內(nèi)1982年

國際血細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)1985年

固紫醬GBC法

(FastgarnertGBCsalt)

新品紅方法

(NewFunchisn)特異性酯酶染色方法介紹CE固紫醬GBC法

堅(jiān)牢藍(lán)BB法

CE副品紅方法

細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸萘酚酯酶，在作用液中可以將氯乙酸AS-D萘酚進(jìn)行水解，釋放氯乙酸AS-D與重氮鹽偶聯(lián)產(chǎn)生不溶性有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。CE染色原理

粒系原粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，少數(shù)分化好的早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。嗜酸粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)，嗜堿粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。CE染色正常參考結(jié)果

單核細(xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng)。

淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞和血小板均呈陰性反應(yīng)。

組織嗜堿細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng).

我們總結(jié)203例急性白血病，其陽性率強(qiáng)弱的排列順序?yàn)椋?/p>

M3>M2b>M5>M2a>M4>M6（粒）>Ml>ALL

特異性酯酶染色的臨床意義粒系原始及早幼粒細(xì)胞一般陰性，少部分可見弱陽性反應(yīng)(+～++)。

自中幼粒階段后反應(yīng)較強(qiáng)，陽性物充滿胞漿，反應(yīng)強(qiáng)度為(+++～++++)。部分M2b在細(xì)胞核的凹陷處呈團(tuán)塊狀反應(yīng)。

異常早幼粒細(xì)胞M3呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。易見柴束樣結(jié)晶。

嗜堿粒細(xì)胞陰性個(gè)別弱陽性。嗜酸粒細(xì)胞陰性或弱陽性。

單核細(xì)胞：陰性或弱陽性反應(yīng)(+～++)，陽性物為顆粒狀散狀分布。

ALLCE染色陰性

NK細(xì)胞CE呈陽性

漿細(xì)胞CE陰性個(gè)別可見陽性

巨核細(xì)胞、高雪細(xì)胞和尼門匹克細(xì)胞CE陰性

組織嗜堿細(xì)胞CE強(qiáng)陽性

(Non-SpecificEsterase)

非特異性酯酶是一組在酸性、中性和堿性pH條件下，水解各種短鏈脂肪酸酯或芳香族酯的酶。幾乎存在于所有血細(xì)胞，包括巨核細(xì)胞、漿細(xì)胞，甚至上皮細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。該酶是單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的標(biāo)志酶,分布較廣泛。非特異性酯酶底物：α-醋酸萘酚酯酶

(α-Naphthylacetateesterase,α-NAE)

萘酚AS醋酸酯酶

(NaphthylASacetateesterase,NASAE)

萘酚AS-D醋酸酯酶

(NaphthylAS-Dacetateesterase,NAS-DAE)

α-丁酸萘酚酯酶

(α-Naphthyl

Batyrateesterase,α-NBE)

重氮鹽堅(jiān)牢藍(lán)B

固藍(lán)BB六偶氮付品紅α-醋酸萘酚酯酶

α-丁酸萘酚酯酶

萘酚AS-D醋酸酯酶（固蘭BB法）

不加NaF積分值-加NaF積分值NaF抑制率

=——————————————×100％

不加NaF積分值

抑制率大于50％為抑制，NaF

用量15mg／10m1作用液。血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦的非特異性酯酶染色方法

丁酸鹽反應(yīng)萘AS-D醋酸鹽固蘭BB法

中性非特異性酯酶

(NSENAENASE)

α-萘酚醋酸酯酶

α-Naphtholacetateesterase，α-NAE

原理:在中性條件下，酯酶將醋酸萘酚水解，產(chǎn)生萘酚，在與重氮鹽偶聯(lián)，產(chǎn)生不溶性的有色沉淀。NSE酶型

NAE顆粒型

NAE局灶型

NAE彌散型

粒細(xì)胞系各階段粒細(xì)胞均為陰性或弱陽性反應(yīng)，隨細(xì)胞成熟陽性減弱呈陰性，不被氟化鈉抑制。單核細(xì)胞陽性反應(yīng)較強(qiáng),能被氟化鈉抑制。中性非特異性酯酶正常參考結(jié)果

其它細(xì)胞

成熟淋巴細(xì)胞部分呈陽性反應(yīng)，陽性物多表現(xiàn)為顆粒狀，不被氟化鈉抑制；

巨核細(xì)胞和血小板呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；

早期幼紅細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)，隨幼紅細(xì)胞的成熟陽性反應(yīng)逐漸減弱，不被氟化鈉抑制。NAE正常參考結(jié)果

是單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的標(biāo)志酶

中性非特異性酯酶染色

原始單核細(xì)胞NAE多呈陽性，少部分為陰性。大部分陽性細(xì)胞呈局灶型或顆粒型反應(yīng)。

幼稚單核細(xì)胞NAE陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性。陽性物顏色鮮艷呈細(xì)小顆粒彌散狀，加NaF后陽性率及指數(shù)明顯降低或陰性.單核細(xì)胞NAEM5aNAE染色M5bNAE染色M5bNAE染色M5NAE+NaF染色

原始及早幼粒細(xì)胞陰性或弱陽性反應(yīng).

酶型多為彌散型、局灶型，少數(shù)可呈顆粒狀。

M3部分可呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，陽性物彌散型分不清顆粒。不被NaF抑制。

中幼粒細(xì)胞陰性或中等強(qiáng)度陽性，部分M2b可呈團(tuán)塊樣反應(yīng)，較強(qiáng)。可被

NaF抑制。粒系NAE染色M2aNAE染色M3NAE染色M2bNAE染色M4NAE染色

漿細(xì)胞部分呈強(qiáng)陽性。

陽性物為數(shù)個(gè)較大、較強(qiáng)的顆粒聚集。部分被NaF抑制。陰性或陽性，陽性物可呈顆粒型或局灶型，在pH5.0條件下，T-淋巴細(xì)胞NSE活性顯示更為充分。有利于ALL和ANLL的鑒別。淋巴細(xì)胞NAE染色ALLNAE染色CLLNSE顆粒狀

陽性較強(qiáng)，可表現(xiàn)彌散型和顆粒型。易被NaF抑制，α-丁酸萘酚（-）。

巨核細(xì)胞NAE染色幼稚巨核細(xì)胞NSE染色

巨核細(xì)胞NAE染色

有核紅細(xì)胞NSE可呈陽性

網(wǎng)狀細(xì)胞、高雪、海蘭等一些非造血細(xì)胞為強(qiáng)陽性反應(yīng)且不被NaF抑制。

(alpha—naphthylbutyrateesterase，α-NBE)

原理

血細(xì)胞中的α-丁酸萘酚酯酶在pH堿性環(huán)境下，能將基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚水解產(chǎn)生α-萘酚，再與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。α-丁酸萘酚酯酶染色

α-丁酸萘酚酯酶染色對單核細(xì)胞特異性較NAE強(qiáng)，但靈敏度差。對鑒別單核細(xì)胞和巨核細(xì)胞有重要意義。

α-醋酸萘酚酯酶α-丁酸萘酚酯酶單核細(xì)胞強(qiáng)+強(qiáng)+巨核細(xì)胞強(qiáng)+-

periodicacid-schiff，PAS

又名糖原染色

糖原是人類的一種重要的貯存糖，如見于肝細(xì)胞內(nèi)的。它是產(chǎn)生能量的重要物質(zhì)，在化學(xué)上糖原是D-葡萄糖分子組成的聚合體，對急性AL的分型及MDS，AA，高雪等診斷都有著重要意義。過碘酸-雪夫反應(yīng)

過碘酸-堿性品紅中的過碘酸是氧化劑，可以打開多糖乙二醇基，把-CHOH.CHOH變成-CHO和-CHO，或把多糖中的CHOH-CO變成CHOCO此新生的醛基與無色堿性品紅染液（schiff）結(jié)合成紫色染料，其反應(yīng)顏色的深淺于細(xì)胞內(nèi)乙二醇基的含量成正比。過碘酸-雪夫反應(yīng)原理

陽性結(jié)果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)粉紅色物質(zhì)。細(xì)胞核為藍(lán)色。

顆粒狀片狀珠狀塊狀

PAS染色陽性結(jié)果

陽性物分布細(xì)顆粒彌散狀

PAS為裙邊樣反應(yīng)

中粗顆粒、粗顆粒散在分布。

PAS珠狀、塊狀呈冠狀。

粒細(xì)胞系

原粒細(xì)胞多呈弱陽性反應(yīng)，少部分可見陰性。自早幼粒細(xì)胞以后隨細(xì)胞的成熟程度陽性反應(yīng)逐漸增強(qiáng)，至成熟階段陽性最強(qiáng)。

嗜酸粒細(xì)胞顆粒本身不著色，但顆粒間的胞漿呈彌漫粉紅色；

嗜堿粒細(xì)胞為陽性，反應(yīng)物呈粗顆粒、珠狀和塊狀。PAS正常參考結(jié)果

淋巴細(xì)胞系

大多數(shù)淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，少數(shù)胞質(zhì)內(nèi)有少量紅色顆粒。

B淋巴細(xì)胞PAS正常值為陽性率:20%陽性指數(shù):30

紅細(xì)胞系

幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。

巨核細(xì)胞系和血小板

陰性或陽性陽性物呈珠狀或塊狀成熟巨核細(xì)胞陽性指數(shù)正常值：107.4±13.8

單核細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物為細(xì)顆粒彌散狀、中粗顆粒往往位于胞漿邊緣；

漿細(xì)胞大多呈陰性，少數(shù)為紅色顆粒；

組織細(xì)胞為陽性或陰性反應(yīng)；

巨噬細(xì)胞可呈細(xì)顆粒的陽性反應(yīng)。

急性白血病類型的鑒別

原幼淋細(xì)胞陰性或陽性，陽性反應(yīng)物呈細(xì)顆粒、中粗顆粒和粗顆粒散在分布；珠狀和塊狀一個(gè)至數(shù)個(gè)成冠。

成熟淋巴細(xì)胞細(xì)顆粒、中粗顆粒、粗顆粒散在分布。PAS染色臨床意義

ALLPAS(-/+)

ALLPAS中粗、粗顆粒散在分布。

ALLPAS粗顆粒

ALLPAS珠狀成熟淋巴細(xì)胞PAS

細(xì)顆粒、中粗顆粒和粗顆粒。原粒及早幼粒細(xì)胞陰性或弱陽性陽性反應(yīng)物為細(xì)顆粒彌散狀.

M2bPAS細(xì)顆粒彌散狀

強(qiáng)陽性

陽性反應(yīng)物為密集的細(xì)顆粒彌散狀，胞漿邊緣及外漿處多分布粗大顆粒；

部分易見柴束狀結(jié)晶；

少數(shù)病例在細(xì)顆粒彌散狀基礎(chǔ)上可見1~2個(gè)小珠。異常早幼粒細(xì)胞的PAS嗜堿粒細(xì)胞PAS為強(qiáng)陽性，

陽性物多表現(xiàn)粗顆粒、珠狀、塊狀。M4EO異常嗜酸粒細(xì)胞PAS

可見深粉紅色小珠

陽性較粒細(xì)胞強(qiáng)

細(xì)、中粗顆粒彌散狀分布，邊緣及外漿處可見粗顆粒。

部分在細(xì)顆粒基礎(chǔ)上可見小珠；

少數(shù)呈裙邊樣反應(yīng)。原、幼單核細(xì)胞PAS染色

微分化型AL

（M0）

PAS可為細(xì)顆粒、中粗顆粒散在分布；部分在此基礎(chǔ)上可見小珠。

陰性或陽性反應(yīng)

中粗顆粒、粗顆粒散在分布。

部分可見小珠或塊狀。

小巨核細(xì)胞PAS

呈細(xì)小顆粒彌散狀，邊緣處為粗顆粒及小珠。原始巨核細(xì)胞PASAHLPAS部分細(xì)胞呈細(xì)顆粒

彌散狀，部分細(xì)胞呈粗顆粒、珠狀。

戈-謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)

尼曼-匹克細(xì)胞PAS染色為陰性或弱陽性，空泡中心陰性。

漿細(xì)胞PAS陰性或弱陽性，

陽性物呈淡粉色，偶見小珠。

骨髓內(nèi)轉(zhuǎn)移的腺癌細(xì)胞PAS

強(qiáng)陽性反應(yīng)，表現(xiàn)為紅色顆粒或塊狀。

紅細(xì)胞系統(tǒng)

陰性：正常人和再障。

陰性：正常紅細(xì)胞、AA、CLL

弱陽性：巨幼貧、溶血性貧血

強(qiáng)陽性：紅白血病及各類急性白血病的幼紅細(xì)胞、MDS、IDA、和重型地中海貧血。

IDAPAS

MDSPAS染色M6PAS染色

酸性磷酸酶染色法(ACP)

酸性磷酸酶是一組能在酸性pH條件下，水解磷酸酯的酶，它定位于溶酶體中，并被認(rèn)為是這些細(xì)胞器的標(biāo)志酶，溶酶體外的ACP一般與膜結(jié)合，對L+酒石酸不敏感，溶酶體內(nèi)的ACP跳動(dòng)快，對熱穩(wěn)定，對L+酒石酸敏感。在大部分有核血細(xì)胞的胞漿里均存在酶活性.國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦的酸性磷酸酶染色法固紫醬GBC(FastGametGBCmethod)固紅ITR(FastRedITRmethod)副品紅方法

(parosanilchemethod)ACP染色正常參考結(jié)果

粒細(xì)胞系各階段粒細(xì)胞ACP染色呈弱陽性或中度陽性。

單核細(xì)胞強(qiáng)弱不等的陽性反應(yīng)。

淋巴細(xì)胞陰性或弱陽性反應(yīng)。

紅細(xì)胞系部分幼紅細(xì)胞ACP為陽性反應(yīng)。

漿細(xì)胞和巨核細(xì)胞ACP為強(qiáng)陽性。

酸性磷酸酶染色臨床意義

酸性磷酸酶存在于許多造血細(xì)胞的溶酶體中，如粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞和吞噬系統(tǒng)，酸性磷酸酶是一組同功酶，用聚丙烯酰胺凝膠電泳證明，人類白細(xì)胞的酸性磷酸酶中，共有7種同功酶。同功酶5具有獨(dú)特的抗酒石酸的功能，是HCL所特有的。毛細(xì)胞白血病的診斷

HCLACP呈陽性反應(yīng)，陽性為中等強(qiáng)度或強(qiáng)陽性反應(yīng)，并具有抗L（+）-酒石酸的功能。

1972年M觀察22例HCL發(fā)現(xiàn)75-95％病例呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。

據(jù)我們觀察8例HCL，7例ACP陽性，有4例陽性率>60％，3例陽性強(qiáng)度可見++++。TRAP后6例為陽性。2例仍可見++++。HCL平均陽性率56％，比歐美報(bào)道98％低，與日本報(bào)道52％相同。有人認(rèn)為TRAP中只要有一個(gè)++++可診斷HCL。

在我們總結(jié)622例不同類型AL中，發(fā)現(xiàn)6例病種23例具有抗酒石酸的功能，有NHL、B-CLL、T-ALL、

AHL、GALL、CML急淋變。國外也有人報(bào)道一些惡性淋巴性疾病也具有抗酒石酸的功能。CLL骨髓瑞氏染色CLLACP

CLLTRAP

NHL骨髓瑞氏染色

ACP對T-ALL和B-ALL有鑒別意義

在人體發(fā)育中，T淋巴細(xì)胞的酸性磷酸酶出現(xiàn)在發(fā)育早期階段的即胸腺細(xì)胞，并持續(xù)到成熟。定位于Coigi器中，所以大多數(shù)急性和慢性T淋巴細(xì)胞增生疾病都表現(xiàn)ACP活性，陽性物多呈顆粒型，少數(shù)可為陰性，T-ALL反應(yīng)最強(qiáng)，B淋巴細(xì)胞增生的ACP反應(yīng)弱陽性或陰性。

T-ALLACP

B-ALLACPACPALL和ANLL的鑒別

ALL多為顆粒型

ANLL以單核細(xì)胞表現(xiàn)最強(qiáng)，粒系M3最強(qiáng)，部分早幼粒細(xì)胞也可見強(qiáng)陽性，陽性物呈彌散狀分布。網(wǎng)狀細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)

網(wǎng)狀細(xì)胞TRAP陽性巨核細(xì)胞，血小板呈

較強(qiáng)的陽性反應(yīng)。

紅細(xì)胞

ACP

漿細(xì)胞ACP

較強(qiáng)的陽性反應(yīng)。

陽性物為大粗顆粒和小珠散在分布于細(xì)胞漿內(nèi)。高雪和尼門匹克細(xì)胞ACP鑒別

高雪氏細(xì)胞強(qiáng)陽性尼曼-匹克細(xì)胞陰性或弱陽性

轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞ACP強(qiáng)陽性

第七章骨髓鐵

細(xì)胞外鐵細(xì)胞內(nèi)鐵鐵粒紅細(xì)胞鐵染色分類

正常骨髓（BM）中存在一定量的貯存鐵，它以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式存在，主要分布在網(wǎng)狀細(xì)胞內(nèi)，二者在鐵被動(dòng)員時(shí)，都能釋放出鐵，供血細(xì)胞利用以合成血紅蛋白（Hb）。骨髓中可染色鐵的多少，通常認(rèn)為可以代表貯存鐵主要場所肝臟和全身單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)中鐵的貯存情況。

細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵骨髓小粒

在幼稚紅細(xì)胞中有非血紅素的含鐵顆粒。BM中綜合27-94%的中、晚幼紅細(xì)胞含有鐵顆粒，又稱鐵粒幼紅細(xì)胞。

細(xì)胞內(nèi)鐵

少數(shù)正常成熟紅細(xì)胞也含有小顆粒稱鐵粒紅細(xì)胞。

鐵粒紅細(xì)胞普魯士蘭染色法（1958郁知非方法）

原理:根據(jù)BM中含F(xiàn)e+++與蛋白質(zhì)結(jié)合較疏松，經(jīng)稀HCL處理后，呈游離Fe+++。在酸性溶液中與亞鐵氰化鉀作用后呈蘭綠色，有折光，圓形顆粒或珠、塊狀。

4Fe++++3K4[Fe(CN)6]Fe4[Fe(CN)6]3

鐵染色方法細(xì)胞外鐵：

+~++細(xì)胞內(nèi)鐵：

浙江醫(yī)大:27~94%(平均65%）

上海紡織局第一醫(yī)大:14~48%

（平均27.2%）方法不同正常值臨床意義鐵染色缺鐵性貧血（IDA）細(xì)胞內(nèi)外鐵消失，當(dāng)體內(nèi)的需要增加，吸收不良或喪失過多時(shí)，便首先用貯存鐵來補(bǔ)充，進(jìn)一步可致貯存鐵耗竭，這時(shí)為（-）。鐵粒幼細(xì)胞低于正常范圍0-28%平均3.4%，治療后增高。Fe+++染色是診斷IDA及指導(dǎo)鐵劑治療的一種輔助方法。鐵低缺鐵性貧血（IDA）真性紅細(xì)胞增多癥（PV）

據(jù)我們觀察10例PV，外鐵在-~+，內(nèi)鐵平均27%。

血小板減少約10%的病人，有不程度鐵減少，可能和病人近來不斷失血有關(guān)。再生障礙性貧血（AA）、巨幼紅細(xì)胞性貧血、白血病、感染和多次輸血病人.

鐵高巨幼紅細(xì)胞性貧血

內(nèi)鐵顆粒多

MDS鐵染色

正常、減少和增高。而有診斷意義是RAS，可見到環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞（RS），并要求環(huán)鐵大于15%，是診斷的重要指標(biāo)。

少部分漿細(xì)胞胞漿內(nèi)含有鐵顆粒第五章堿性磷酸酶

血細(xì)胞含有的磷酸水解酶主要

堿性磷酸酶ALP

酸性磷酸酶ACP

ALP由許多同工酶組成，在堿性條件下(最適pH為9.3～9.6)催化各種醇和酚的單磷酸酯。