丁型肝炎病毒實驗活動風險評估報告一、生物學特性（一）種類和病毒分型丁型肝炎病毒(HepatitisDvirus,HDV）為球形，直徑35-37nm,有包膜，但包膜蛋白并非為HDV的基因產物，而是由HBV編碼產生的HBsAg。核心含單股負鏈共價閉合的環狀RNA和HDV抗原(HDAg)，其外包以HBV的HBsAg。經核酸分子雜交技術證明，HDVRNA與HBVDNA無同源性，也不是宿主細胞的RNA。HDVRNA的分子量很小，只有5.5×IO5，是已知動物病毒中最小的基因組，這決定了HDV的缺陷性，即不能獨立復制增殖。HDAg具有較好的抗原特異性。感染HDV后，血液中可出現抗-HD。目前，已知HDV只有一個血清型。（二）來源1977年，意大利學者Rizzetto用免疫熒光法在慢性乙型肝炎病人的肝細胞核內發現一種新的病毒抗原，并稱為δ因子。它是一種缺陷病毒，必須在HBV或其他嗜肝DNA病毒的輔助下才能復制增殖，現已正式命名為HDV。目前，HDV的病毒分類學地位尚未確定。（三）傳染源急、慢性丁型肝炎患者和HDV攜帶者是HDV的傳染源。（四）傳播途徑HDV的傳播途徑與HBV相同，主要是血源性傳播。此外，日常生活密切接觸、受損的皮膚或黏膜暴露于含有HDV的體液、開放性傷口、性交、針刺等也可傳播。在衛生條件較差的農村，HDV傳播較迅速。（五）易感性人群普遍易感，藥癮者及多次受血者為高危人群。（六）潛伏期HDV的潛伏期一般情況下為4-20周。（七）劑量一效應關系目前尚未見有HDV對人準確感染劑量的報道。HDV的感染主要與暴露途徑和感染方式密切相關。（八）致病性HDV有高度的傳染性及很強的致病力。HDV感染可直接造成肝細胞損害，丁肝的臨床表現與其感染方式有關。1．丁肝病毒與乙肝病毒同時感染，將可能出現下列兩種情形(l)急性丁肝病毒相關肝炎其臨床及生化特點與單純乙肝相似，癥狀較輕，肝組織損害不十分嚴重。(2)暴發型肝炎臨床癥狀及肝損害嚴重，病死率高。這是因為急性乙肝病毒血癥時間延長，乙肝病毒復制增多，為丁肝病毒復制提供了良好的條件。2．重疊感染丁肝病毒(1)自限性肝炎一般臨床癥狀不嚴重，病程較短，有自限和恢復的傾向。乙肝表面抗原攜帶者是丁肝病毒攻擊的目標。(2)慢性進行性丁型肝炎即從慢性乙型肝炎惡化或無癥狀的乙肝病毒攜帶演變為進行性活動性肝炎，病情嚴重，呈進行性發展?？砂l展為肝硬化，預后差。（九）變異性HDAg具有較好的抗原特異性。感染HDV后，血液中可出現抗-HD。目前，已知HDV只有一個血清型，尚未見有關HDV變異的報道。（十）環境中的穩定性因HBV是HDV存在的基礎，所以消滅HBV的同時也就消滅了HDV。（十一）藥物敏感性至今對HDV尚無滿意的治療藥物。國外曾有應用基因重組的干擾素α治療慢性HDV/HBV感染的案例，劑量非常高，達9×lO6U，每周肌內注射3次，12個月為一個療程，可持續緩解50%的病人的生化異常，HDVRNA受抑制。除此之外，肝組織病理學也得到改善。但是遠期療效還是很難鞏固。干擾素與其他抗病毒制劑聯合應用也不能提高療效。曾有報告用膦甲酸治療HDV／HBV同時感染引起的急性重型肝炎，8例Ⅱ度以上肝性腦病的患者予l60m/(kg?d)治療12-14d有6例存活，但對慢性HDV／HBV肝炎的療效尚難肯定。（十二）消毒劑敏感性因HBV是HDV存在的基礎，所以消滅HBV的同時也就消滅了HDV。HBV對外界的抵抗力較強，對一般化學消毒劑耐受，不被7O%乙醇滅活。因此，這一常用的消毒方法并不能用于HBV的消毒。環氧乙烷可滅活HBV，O.5%過氧乙酸、5%次氯酸鈉和3%漂白粉也可用于消毒。（十三）物理滅活高壓滅菌法、1O0℃加熱lOmin可滅活HBV，而紫外線、低溫、干燥均不適用于HBV的滅活。消滅HBV的同時也就消滅了HDV。（十四）在宿主體外存活因HBV是HDV存在的基礎，而HBV對外界的抵抗力較強，對低溫、干燥、紫外線和一般化學消毒劑均耐受。HBV通常在37℃下能穩定60分鐘，一般的化學消毒劑或加熱到60℃4小時均不能將其消滅，在20℃貯存20年以上仍具有抗原性及傳染性。將HBsAg陽性的血清涂于塑料貼面、鉛片、布片上，在25℃的條件下，2個星期后滴度基本保持不變，在6℃條件下，1個月內滴度不變。HBsAg陽性的血清傳染唾液和尿液后，其滴度在25℃下可維持l星期，6℃條件下可維持40天。（十五）與其他生物和環境的交互作用HDV是一種缺陷病毒，HBV是其存在的基礎。所以乙型肝炎患者或HBV攜帶者都是HDV攻擊的目標，尤其是急性乙型肝炎，其病毒血癥時間延長，HBV復制增多，為HDV復制提供了良好的條件。這種重疊感染?？蓪е略械囊倚透窝撞∏榧又鼗驉夯?，易于發展成重型肝炎，故在發現重癥肝炎時，應注意是否存在HBV與HDV的重疊感染。（十六）預防和治療方案1．預防措施切斷HDV的傳播途徑是主要預防措施之一，如盡量避免反復輸血或使用血制品，戒除藥癮，注射器、針頭與針灸針進行嚴格的消毒，認真做好病人的早期診斷與隔離，對患者的排泄物與用品進行消毒等。此外，防止醫源性傳播對本病的預防也甚重要。接種HBV疫苗也可預防HDV感染。2．治療措施迄今為止，對HDV感染尚無特效治療藥物。有報道，長療程的干擾素治療可改善患者的癥狀。二、實驗室相關活動風險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1．感染性因子的種類本實驗室可能的感染因子為HDV本身。2．感染性園子的來源(l)用于HDV抗原抗體檢測的血液樣本。(2)樣本采集與檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)實驗室操作中可能產生的含病毒的氣溶膠。3．感染性因子可能造成的危害(l)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環境造成污染。(2)實驗室廢棄物對環境造成污染。(3)實驗人員暴露后感染。(4)實驗室含病毒的氣溶膠對實驗室環境造成污染。（二）實驗室常規活動過程中的風險評估與控制1．實驗方法(1)風險點識別若采用國家標準、行業標準之外的其他未經確認的實驗方法，或在使用國家標準、行業標準之前米進行技術確認，操作時可能存在安全風險。(2)風險控制措施盡量采用國家標準、行業標準或經過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標準、行業標準之前，必須經過嚴格的技術確認。2．樣本采集(l)所用器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。(2)風險點識別①采血過程中若被丁型肝炎患者或無癥狀攜帶者的血液污染了皮膚、黏膜，或被含有HDV的血液污染了的針頭刺破皮膚，在抗-HBs陰性的情況下有被HDV感染的風險。②血液標本濺灑出來可能造成人員或環境污染。(3)風險控制措施采血前做好個人防護，穿戴防護服、口罩、帽子、雙層乳膠手套；抽血前檢查針管的密閉性，用過的針頭直接放入利器盒內，禁止用手直接接觸使川后的針頭或將使用后的針頭重新套上針頭套；采血管用真空抗凝管，采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫療廢棄物專用袋中，統一進行消毒處理。3．樣本的包裝和運輸(1)所用器材真空采血管、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱），運送車輛。(2)風險點識別若使用不合格包裝進行運輸、容器密封不嚴，則將不能安全有效地防止運輸過程中包裝容器意外破損，從而產生污染擴散的可能。(3)風險控制措施嚴格按照生物安全的要求，采用三層容器包裝。第一層采用真空采血管裝樣本，應密閉防滲漏；第二層采用95千帕樣品運輸罐，可容納并保護第一層容器，密封不易破碎、耐壓力防滲漏且易消毒；第三層采用B類標本運輸箱，要容納并保護、固定第二層容器，且易于消毒。樣本應由中心專車運回實驗室。4．樣本接收(1)風險點識別如果在運輸途中發生樣本管破裂、血液溢漏，則可能對樣本接收人員造成污染。(2)風險控制措施樣本直接送至實驗室，由專業檢驗人員接收，接收樣本前做好個人防護，穿戴好防護服、帽子、口罩、雙層乳膠手套。若有樣本管破裂，則立即在生物安全柜內將尚存留的樣本移出，廢棄物放入帶蓋的防刺破的塑料罐中，被污染的容器用0.5％過氧乙酸等消毒液浸泡后再清洗。5．樣品檢測(1)所用器材離心機、生物安全柜、移液器、洗板機及酶標儀等設備。(2)風險點識別①離心過程中離心管破裂造成離心機污染。②操作過程中血液樣本濺灑，從而造成人員或臺面、地面等環境污染。③板、讀板時液體濺出從而污染設備表面或工作臺面。(3)風險控制措施所有檢測操作均在BSL-2實驗室中進行，檢測人員在實驗前按照二級生物安全防護要求做好個人防護；加樣移液操作在生物安全柜內進行，動作輕緩；判讀結果時酶標板輕拿輕放，避免液體濺出；待實驗完畢，先消毒手部，再脫去手套并立即洗手；若有意外情況發生，應及時采取有效措施。6．陽性樣本保存(1)所用器材生物安全柜、移液器、帶螺旋蓋的塑料管及可密封的塑料凍存盒。(2)風險點識別若HDAg陽性或抗-HDVIgM陽性樣本保存不當，則易造成人員或環境污染。(3)風險控制措施按照二級生物安全防護要求做好個人防護；樣本的保留在生物安全柜內進行，動作要輕緩；所有樣本的血清或血漿都保留在帶螺旋蓋的塑料管內，再裝入可密封的塑料凍存盒中，置于-20℃以下冰箱內保存，嚴格實行雙人雙鎖管理。7．實驗室的清潔和消毒（1)風險點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜等進行消毒，則存在實驗室環境污染或人員感染的風險。(2)風險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺而及地面用l0O倍稀釋的施康清洗消毒液I擦拭，用消毒液擦拭后要干燥20min以上；生物安全柜用70%-75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢，先脫去手套，再脫去防護服，并正確使用肥皂和流水洗手。8．廢棄物處置(1)所用器材醫療廢棄物專用袋、硬質耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)風險點識別剩余的陽性樣本管是很大的污染源，若采血過的針頭處理不當，則易造成人員被刺傷，甚至感染HDV的風險。(3)風險控制措施實驗過程中產生的所有感染性廢棄物，包括不再需要的剩余樣本、酶標反應板、移液頭等所有實驗過程涉及的用品，需置于裝有醫療廢棄物專用袋的硬質耐高壓且防滲漏的垃圾桶中，經121℃高壓滅菌l5-20min后才可運出實驗室；針頭、破碎玻璃等損傷性廢棄物必須放入利器盒，利器盒嚴禁再次打開，裝滿針頭等利器的一次性利器盒嚴禁再次打開，須密封好后，同上述垃圾一起處理。所有處理完畢的廢棄物集中存放，由有資質的醫療廢棄物處理單位上門收集，集中處置。同時，做好交接記錄，所有相關記錄定期整理歸檔。（三）實驗室常規活動中其他風險評估與預防控制措施1．電力(l)風險點識別若實驗室沒有布置雙路供電，或電力供應不穩定，則有可能造成實驗活動突然中斷、實驗設備停止工作等所帶來的相關安全風險。(2)預防控制措施實驗室盡量要布置雙路供電，沒有布置雙路供電的應配置備用電源，以確保高壓滅菌器、生物安全柜等重要設備的安全運行。2．電氣操作(l)風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區內電氣設備的啟動、關閉、安裝和維修；設備層內UPS、空調機組等電氣設備的啟動、關閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、電氣故障等風險。(2)預防控制措施①電氣設備的設計及制造符合相關安全標準的要求。實驗室T作區內若有380V電源插座，則需明確標識，并由有資質的專業人員進行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設備在未經專業人員（如有資質的電工）完成電氣安全測試和設備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設備使用人員接受正確操作的培訓，操作方式不降低電氣安全性。電氣設備使用人員要定期檢查設備可能引起電氣故障的破損。只有專業人員可從事電氣設備和電路工作。禁止未經授權的工作。④采取措施對設備去污染，以降低維護人員感染的風險。3．實驗室給排水設施設備(l)風險點識別實驗室含有給排水的設施設備，包括位于工作區和洗消區的高壓滅菌器和洗滌池。當管道意外破裂、排水管道阻塞時，感染性材料可能溢出，有污染實驗人員和環境的風險。(2)預防控制措施實驗室產生的所有染菌物及器具，必須先經高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，產生的污水集中排入中心污水池進行消毒處理，嚴禁直接排放。按照GB18466要求，監測總余氯、糞大腸菌群及其他致病菌。4．實驗室設施設備管道(l)風險點識別實驗室設施設備管道穿越維護結構的部位可能存在密封不嚴的問題，當感染性材料溢出時，有污染環境的風險。(2)預防控制措施所有管道穿越維護結構的部位應嚴格密封，定期進行檢查，避免感染性材料外溢從而污染環境。5．主要檢測儀器設備(l)離心機①風險點識別在分離血清的過程中，若沒有做好平衡，則可能會發生離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉子和離心腔被污染的風險。②預防控制措施離心時配備耐離心壓力的且帶螺旋管蓋的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力；規范正確操作，定期維護，確保離心機性能正常；每次使用后做好清潔消毒和使用記錄，定期進行功能檢查。(2)酶標儀和洗板機①風險點識別在使用酶標儀和洗板機的過程中，可能會存在陽性對照或在測樣品污染設備表面和工作臺面的風險。②預防控制措施酶標儀每年強檢一次，中途再做一次期間核查；洗板機每年進行一次功能檢查；在洗板、讀板時，要做到動作輕緩，小心操作；倘若有液體濺出，要馬上進行消毒處理。6．生物安全設施設備(l)生物安全柜①風險點識別若不按照安全柜操作規程進行操作、維護與檢測，則其防護屏障效果會明顯降低，甚至消失，失去安全防護效果；若長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，則會使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；使用后若不徹底消毒處理，則對于清潔、維護人員將會產生污染。②預防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應接受相關的操作、維護培訓，日常操作和維護嚴格按照設備操作規程或使用說明書進行；每年請有檢測資質的服務機構對生物安全柜進行風速、氣流、塵埃粒子、紫外線強度等關鍵要素的檢測，確保其性能正常；一旦造成污染，應及時進行消毒處理。(2)高壓滅菌器①風險點識別若不按照高壓滅菌器操作規程進行操作、維護，則其效果會明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；若長時間使用又不定期檢測滅菌效果，對其滅菌效果無從考證，則可能產生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患；在長期關停期間，若內部水分不及時排干，將會使內部器件老化從而失去正常功能；②預防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染；規范操作，定期維護，確保高壓滅菌器性能正常；定期檢定、核查，做好使用記錄，持證上崗；日常進行滅菌效果監測，以保證滅菌質量。(3)個人防護用品①風險點識別個人防護用品若穿戴不規范、大小不合適或使用過期的防護用品等將會導致防護效果降低，甚至失效。②預防控制措施進行HDV血清學相關操作時要按二級生物安全防護水平進行個人防護，必須選擇大小合適、有效的防護用品，穿戴時相互檢查確認，避免使用有破損、缺陷和過期的防護用品。(4)應急救治設施和用品①風險點識別若實驗室沒有配備洗眼器、應急藥箱等必要的應急設施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導致急用時無法發揮作用。②預防控制措施在實驗室內正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創可貼等急救物品與實驗活動相適應，并在有效期內使用，由專人負責管理，定期維護、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①風險點識別消毒產品無生產許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，都將會導致消毒效果降低、生物滅活能力降低、或對物品腐蝕性增加、對皮膚造成刺激等問題。②預防控制措施選擇符合國家標準的正規廠家生產的產品，選擇合適的消毒劑，按照規定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進行消毒，避免使用過期產品；消毒過程中消毒人員應做好必要的個人防護，防止發生意外。根據HDV對不同消毒劑的敏感性，本實驗室選用施康消毒劑I（主要成分為次氯酸鈉）、碘伏、漂白粉等作為常用消毒劑。7．管理體系的風險(1)風險點識別管理體系（包括應急預案）、程序文件、作業指導書和操作規程都是確保生物安全的主要因素。如果組織結構不健全、設置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責不清或銜接不當等，就都可能帶來安全風險。(2)預防控制措施定期開展對管理體系的評審，發現問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續有效地運行。（四）工作人員的風險評估與預防控制措施1．風險點識別(1)人員數量人員過少會因缺少相互提示或因工作量增大而導致操作過程中工作失誤增加，風險增加。(2)人員結構及資質新進人員若沒有高資歷人員帶教操作，則不能很好地處理意外事件，風險會增加。實驗人員不熟悉實驗檢測方法及操作規范，在進行實驗前未進行相關的專業知識培訓，無法保證工作質量和安全。(3)職業操守責任心不強的人員參與該項工作，產生生物危害而危及人員安全、環境安全與社會安定的可能性較大。(4)健康管理健康狀況主要包括生理、心理素質與免疫狀態。當身體出現腹瀉等胃腸道癥狀、手部皮膚有開放性損傷或其他不適合工作的情況，職業暴露風險會增加。(5)生物安全培訓及應急事件處理能力工作人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全，以及相關生物安全設備操作的技術培訓，易造成生物安全事故的發生。上崗后沒有接受實驗室突發事件處理的培訓，一旦發生意外事件，就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。2．預防控制措施(l)人員數量盡量有2名工作人員同時進行采樣、檢測或有質量監督員對關鍵步驟進行監督。(2)人員結構及資質實驗室檢測人員的年齡和資歷結構應配備合理，新進人員應南高資歷人員帶教或監督操作。檢測技術人員需經過上崗培訓和在崗持續培訓。要求掌握相關專業知識和技能，能獨立熟練地操作，并經考核合格，持證上崗。(3)職業操守加強職業道德教育，培養工作責任心。(4)健康管理建立健康申報制度，遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適合工作的情況，應及時向科室負責人報告并暫停工作；裸露皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等應用防水材料嚴密覆蓋。(5)生物安全培訓及應急事件處理能力檢測人員必須接受上崗前培訓和復訓，每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術培訓、考核。實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應急處置技術方案》中規定的要求進行應急事件的處置，強化職業暴露的應急處理能力，規范工作中職業暴露后現場急救處理辦法。（五）實驗室非常規活動中的風險評估與預防控制措施1．實驗室主要的非常規活動(l)檢測外專業人員對實驗室設施設備的維護、維修、檢測驗證（如主要設施設備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環境的保潔、實驗器材洗刷消毒。(3)外部人員來實驗室參觀及上級部門對實驗室的檢查。(4)任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動以外的行為（如發生火災、水災時消防人員、急救人員的進入）。2．風險點識別(l)進入實驗室可能會引起實驗室感染，特別是在不慎打翻、打破血管或損壞儀器部件的情況下。(2)實驗室運行過程中，某些人員需要進入實驗室參觀，存在影響實驗室正常運行的風險。3．預防控制措施(l)實行人員準入、登記制度。外部人員來進行參觀或檢查前，應對實驗室作徹底消毒；任何外來人員進入實驗室時應有實驗室人員全程陪同。(2)進入人員絕對不能私自動用實驗室內有標志的危險品（除非經過授權），絕不能將未經消毒處理的物品拿出實驗區。(3)在實驗室進行設施、設備維護維修過程中，若發生意外事件，應立即報告實驗室負責人。實驗室負責人進行風險評估，并采取應對措施。(4)對實驗室的設施、設備進行維護維修工作時應動作輕柔，避免產生氣溶膠。檢測維修后、離開實驗室前，必須洗手。（六）被誤用和惡意使用的風險與預防控制措施1．風險點識別若陽性標本未明確標識，未嚴格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結束后不及時消毒操作場所，其他工作人員在不知情的情況下可能誤用標本、實驗材料和設施設備等，導致人員感染和實驗室環境污染等。2．預防控制措施(1)實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。(2)所有獲得批準進入實驗室工作的人員，必須嚴格按規程操作實驗材料和設施設備。(3)發生事故時必須及時報告并作必要的處理和記錄。(4)實驗所用材料和試劑等必須有明確的標識。(5)陽性標本嚴格實施雙人雙鎖管理。（七）相關實驗室已發生的事故分析和從中得到的啟示目前，因HDV檢測明確引起實驗室人員感染的相關報道很少，但是因為它與HBV有相似的傳播途徑，主要經血液傳播，所以也容易導致實驗室感染。若實驗人員為乙型肝炎患者或HBV攜帶者，則發生HDV實驗室感染的風險更大。因此，工作人員應嚴格遵守實驗室相關規定，務必做好個人防護和規范操作，降低和規避職業暴露風險。三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施（一）紫外線1．風險點識別生物安全柜及二級生物安全實驗室均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250-280nm，主要影響眼睛和皮膚，可引起急性角膜炎和結膜炎、慢性白內障等眼部疾病，還可誘發皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不知情的情況下進入可受到傷害。2．安全防護措施在實驗室工作應避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面貼有紫外線危害的標識。在進行紫外線消毒時，實驗人員盡量遠離消毒區域，基本可以規避紫外線對人體的危害。（二）輻射1．風險點識別實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進行排查，使用含輻射的儀器時未嚴格管理，存在輻射源或輻射事故間接導致病原微生物屏障系統破壞的隱患。2．預防控制措施實驗室籌建選址時對周邊建筑群可能存在的輻射源進行嚴格排查。（三）施康清洗消毒劑I1．風險點識別施康清洗消毒劑I屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%-5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發，長期使用會使人感到頭疼、惡心。對于有過敏體質的人，還容易引發過敏、哮喘等疾病。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴重者可發生氯氣中毒。急性中毒者出現躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2．安全防護措施按照使用說明，根據消毒對象不同而配制不同的濃度，避免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后及時開窗通風，基本可規避消毒液對人體的危害。（四）其他l．風險點識別實驗室內的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。2．安全防護措施對實驗室的照明和聲音等參數進行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災風險評估與預防控制措施1．風險點識別(1)超負荷用電，電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養不良，如電纜的絕緣層破舊或損壞。(3)用火不當等引發火災。(4)儀器設備在不使用時未關閉電源。(5)使用的儀器設備不是專為實驗室環境設計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當。(7)不相容化學品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸汽附近有能產生火花的設備。(9)通風系統不當或不充分。2．預防控制措施(1)定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負荷，對易燃、易爆等危險品進行有效區域隔離。(2)實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標志。該滅火器用于撲滅可控制的火災，幫助人員撤離火場；對滅火器進行定期檢查和維護，確保其有效使用。（3）實驗室需裝設應急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標識；當出現緊急狀況時，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態，出口設計應保證不經過高危險區域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。(4)走廊、流通區域不得放置障礙物，確保人員流動和滅火設備移動不受影響。(5)在實驗室工作區顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓，包括消防器材的使用、火災發生時的應急行動等。五、自然災害風險評估與安全防護措施自然災害可能導致的實驗室緊急狀況主要包括水災和地震等。（一）水災1．風險點識別水災可能導致實驗室維護結構和設施損壞，實驗室內感染性材料隨水外溢。2．安全防護措施(l)在安全手冊中制訂《實驗室緊急事件應急預案》，并對所有實驗室人員進行培訓。(2)實驗室一旦發生水災報警時，應立刻停止工作。首先，考慮實驗室內感染性物質和人員的轉移。實驗室負責人、中心主任根據條件及時采取對策，第一時間聯系相關消防人員。消防人員應有防護措施，并在受過訓練的實驗室工作人員陪同下，進入實驗室完成感染性物質和人員的安全轉移工作。（二）地震1．風險點識別發生地震等自然災害會導致實驗室維護結構和設施損壞，存在人員受傷和實驗室感染性材料外溢的風險。2．風險控制措施實驗室應采取措施降低自然災害帶來的風險，保證災害發生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環境的影響。發生地震后，首先設立距實驗室維護結構20m范圍內的封鎖區。其次，對封鎖區進行消毒，然后由專業人員在做好個人防護的前提下對實驗內部環境邊消毒邊清理。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發生外溢，應立即用可靠方法進行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預案（一）實驗室生物安全事件（事故）處理措施(l)當生物安全柜出現持續正壓時，應立即停止操作，通知運行保障人員采取措施恢復負壓。如果不能及時恢復和保持負壓，應停止實驗。發生此類事故或發生意外停電，造成具有傳染性物質暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，還應立即報告實驗室安全負責人，組織對實驗室進行終末消毒。(2)對于離心過程中離心管破裂時，應馬上關閉電源，讓離心機停止工作，并靜止30min。然后緩慢打開離心機蓋，將離心杯平穩地拿到生物安全柜中。如果發生泄漏，用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。(3)發生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上10-25倍稀釋的施康消毒液，作用至少30min，方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區域。所有這些操作過程中都應戴手套。若發生大范圍污染物擴散事故時，應立即通知實驗室主管領導和安全負責人到達事故現場。待其查清情況，確定消毒方案，并組織對實驗室進行終末消毒。(4)若發生針頭刺傷或血液標本濺灑，從而污染人員、器具或環境等，應及時采取有效的消毒處理措施。①被采血針頭刺傷應立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，并用碘伏等有效消毒劑對傷口進行消毒處理。②皮膚污染立即用肥皂和大量流水沖洗污染部位，并用碘伏或0.2%過氧乙酸等有效消毒劑進行消毒處理。③黏膜污染用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。④物品污染耐煮沸的物品煮沸20min后清洗；對不能煮沸的衣服等物品可用1%漂白粉或0.5%過氧乙酸浸泡2h后再用清水洗滌。⑤地面、墻面等環境污染可用3%漂白粉或2%過氧乙酸噴霧或擦洗2次。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應急預案中應包括消防人員和其他緊急救助人員。應事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質，讓他們熟悉實驗室的布局和設備。在實驗室發生不可控制的火災、水災、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和集合地點。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報告和記錄(l)發生生物安全及其他緊急事件時，在緊急處理的同時必須向中心主管領導和生物安全委員會報告。(2)對于生物安全事件必須進行登記，記錄發生的時間、地點、詳細經過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風險管理（一）生物安全風險評估依據風險評估所依據的數據及擬采取的風險控制措施、安全操作規程等均應以國家衛生和計劃生育委員會、世界衛生組織、國際標準化組織等機構或行業權威機構發布的指南、標準等為依據。（二）危險發生的概率評估(見表7-3)表7-3丁型肝炎病毒實驗活動危險發生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發生概率固有風險措施合理性殘留風險風險可控程度l樣本運輸過程中容器意外側翻、破裂導致樣本泄漏中度可能中度合理低風險可控2樣本接收、開啟及加樣等常規實驗活動中產生氣溶膠中度較大可能中度合理低風險可控3離心過程中樣本管破裂產生大量氣溶膠中度可能中度合理低風險可控4檢測未經滅活的樣本對儀器與環境造成污染中度較大可能中度合理低風險可控5樣本、實驗材料及設施設備等被誤用中度較小可能中度合理低風險可控6陽性樣本被惡意使用高度較小可能高度合理低風險可控7廢棄物處理不當造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控8檢測人員及工勤人員破損的皮膚、黏膜接觸到血液樣本或被銳器刺傷等造成職業暴露高度可能高度合理低風險可控9檢測人員個人防護不當造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控10非檢測人員、進修實習等外來人員進入實驗室的不當操作造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控11水、電、火災或自然災害造成病原微生物擴散中度較小可能中度合理低風險不可控（三）風險評估人員由中心主任組織檢驗科、質量管理科及其他科室熟悉HDV檢驗相關風險的專業人員進行風險評估并形成風險評估報告。形成的風險評估報告經中心生物安全委員會審核，請省市熟悉相關病原微生物特征、實驗設施設備、操作規程及個體防護設備的不同領域的專家進行評估和討論，不斷修訂完善。（四）風險評估報告風險評估報告應是實驗室采取風險控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規程的依據。在記錄風險評估的過程中，風險評估報告應注明評估時間、編審人員和所依據的法規、標準、研究報告、權威資料及數據等。定期進行風險評估或風險評估報告復審，評估的周期應根據實驗活動和風險特征而確定。（五）需重新進行風險評估的情況(1)生物安全BSL-2實驗室改造前（或新建造前）和正式啟用前。(2)當收集到的資料表明HDV的致病性或傳染方式發生變化時，應對其背景資料及時變更，并對其實驗操作的安全性進行重新評估。(3)開展新的實驗活動（增加新的項目）時，應對該項目的實驗活動進行再評估。(4)生物安全實驗室操作人員在進行實驗活動中，發現有原評估報告中未涉及的隱患存在，或者在檢查過程中發現存在生物安全問題，應進行再評估。(5)在實驗活動中發現陽性標本泄露或人員感染等意外事件或事故時，應立即進行再評估。(6)當評估過的實驗活動（包括相關的設施、設備、人員、活動范圍、管理等）發生改變或者操作超出常規量，以及從事某些特殊活動時，應該事先或重新進行風險評估。(7)相關政策、法規、標準等發生變化時需要風險再評估。（六）對風險、需求、資源、可行性、適用性等的綜合評估中心已對在生物安全二級實驗室所涉及的所有活動內容進行了全面的風險評估，并根據風險的內容已逐項制訂了可行的、適用的防控措施。評估報告不僅適用于實驗室設施設備的常規運行期間，而且適用于實驗室設施設備進行清潔、維護及關停期間。生物安全二級實驗室實驗活動中未涉及化學、物理、輻射等相關檢測和研究內容，因此，不存在相應的風險。實驗室所在的地理位置海拔較高，建筑材料可抗六級地震，能夠抵抗水災、地震等災害。八、評估結論（一）危害等級《中華人民共和國傳染病防治法》規定，病毒性肝炎屬乙類傳染病，原衛生部《人間傳染的病原微生物名錄》、WHO《實驗室生物安全手冊》規定，HDV危害程度為第三類、危險度等級為Ⅱ級。（二）實驗活動及生物安全防護水平原衛生部《人間傳染的病原微生物名錄》規定丁肝動物感染實驗在ABSL-2實驗室進行，病毒培養、未經培養的感染材料的操作在BSL-2實驗室進行，滅活材料的操作、無感染性材料的操作在BSL-l實驗室進行。本實驗室主要進行HDV抗原抗體的血清學檢測，從事未經培養的感染性材料操作，實驗活動均在二級生物安全實驗室中進行，采取了二級生物安全防護水平。實驗室配備的生物安全柜、高壓滅菌器等設備符合管理和檢測的要求，并嚴格按照規定的操作程序操作。本實驗室HDV檢測所依據的方法為WS300《丁型病毒性肝炎診斷標準》。該方法為原衛生部標準，在項目開展時經過技術確認，實驗方法風險很小。（三）人員健康及素質實驗人員及相關輔助人員在上崗前均經過充分的生物安全、專業知識及操作技能的培訓，考核合格后持證上崗。新上崗人員和進修人員經過培訓，并在指導老師指導下從事檢測工作。（四）防治原則迄今為止，對HDV感染尚無特效治療藥物，但可通過接種HBV疫苗預防HDV感染。HDV的傳播途徑與HBV相同，主要是血源性傳播。此外，受損的皮膚或黏膜暴露于含有HDV的體液、開放性傷口、針刺等也可進行傳播。實驗室工作人員在實驗活動過程中加強個人防護，規范操作是最有效的防控策略。普遍性防護原則如下：使用必要的防護用品和防護設施，避免直接接觸血液；安全規范處置銳利器具；對所涉及的器械實施嚴格消毒；安全處置廢棄物；嚴格洗手和對手進行消毒。（五）管理體系和應急預案相關管理體系文件如《生物安全柜操作規程》(XJK/JS41)、《HEV-50高壓滅菌器操作規程》(XJK/JS36)、《0412-1(80-2)型離心機操作規程》(XJK/JSlO)、《EIX50型洗板機操作規程》(XJK/JS71)、《微生物實驗器具消毒滅菌和廢棄物的管理》(XJK/JY07)、《樣品管理程序》(XJK/CX32)等經過技術委員會的評審是有效和安全的。實驗室對制訂的《實驗室意外事故和職業性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應急處置技術方案》，經過培訓和反復演練，能確保一旦發生意外感染事件時能有效應對，把危害控制在最小范圍和最低限度。綜上所述，本實驗室在人員素質、設施設備、實驗器材及實驗方法、管理體系、廢棄物處置等方面能滿足開展HDV抗原抗體血清學檢測相關實驗活動的安全管理要求，實驗過程中的風險是可控的，實驗人員的健康與安全是有保障的，不會對周圍環境產生危害。第四節變形桿菌實驗活動風險評估報告一、生物學特性（一）種類和細菌分型變形桿菌(Proteusspecies)是腸桿菌科（Enterobacteriaceae）革蘭氏陰性桿菌。變形桿菌包括變形桿菌屬、普羅菲登屬和摩根氏菌屬，變形桿菌屬包括5個已命名的種，即奇異變形桿菌（Proteusmirabilis）、普通變形桿菌（Proteusvulgaris）、潘氏變形桿菌(Pro-teuspenneri)、黏化變形桿菌(Proteusmyxofaciens)、豪氏變形桿菌(Proteushauseri)和3個未命名的種。其中，普通變形桿菌和奇異變形桿菌與臨床關系較密切，也最為常見。（二）來源變形桿菌廣泛存在于土壤、水、垃圾、腐敗有機物及人或動物的腸道內，為條件致病菌，多為繼發感染，如慢性中耳炎、創傷感染等，也可引起膀胱炎、嬰兒腹瀉、食物中毒等。以下介紹主要以食物中毒為主。（三）傳染性傳染源為帶有變形桿菌或被陔菌污染的介質。變形桿菌主要通過糞—口途徑感染。（四）傳播途徑變形桿菌是一種條件致病菌。只有離開了正常寄居的腸道而進入人體其他部位時，才引起感染。在烹調的制作過程中處理生熟食品的工具、容器未嚴格分開使用，使制成的熟食品受到嚴重污染，或者操作人員通過手污染食品從而引起食物中毒。變形桿菌與其他腐敗菌共同污染生食品，使生食品發生感官上的改變，但熟制品被變形桿菌污染通常無感官性狀的變化，極易被忽視而引起食物中毒。（五）易感性沒有明顯的季節性，全年均可發生，大多數發生在5-10月，以7-9月常見。（六）潛伏期變形桿菌引起的食物中毒起病急驟，食物中毒型潛伏期為3-20h，過敏型潛伏期為0.5-2h。（七）劑量一效應關系食物被變形桿菌污染后，活菌在食品上大量繁殖，被人攝食后進入人體，在條件適合時，就有可能引起食物中毒。所以，只從樣品中檢出變形桿菌并無實際意義。凡懷疑變形桿菌中毒時，應取可疑食物、嘔吐物和糞便作細菌培養，分離出同型變形桿菌。分離出的變形桿菌，必須作血凝試驗，才能確認。普通變形桿菌對OXl9、奇異變形桿菌對OXK的凝集效價應在4倍以上增長者，才能被確診。人攝入變形桿菌是否發病及發病輕重與攝入的細菌數量（一般認為達105個/g以上）、產生的毒素以及人體防御功能等因素有關。變形桿菌還可產生組氨脫羧酶，可使肉類中組氨酸脫羧基成為組胺，組胺攝入量超過lOOmg引起類似組胺中毒過敏癥狀。（八）致病性1．致病物質變形桿菌致病物質有鞭毛、菌毛、內毒素、溶血毒素等。變形桿菌的致病力主要是細菌所產生的腸毒素，它可產生一種細胞結合溶血因子(Cell-boundhemolyticfactor)，對人類移行細胞具有很好的黏附力和較強侵襲力，有些菌株能產生α溶血素從而具有細胞毒效應。變形桿菌還可產生組氨脫羧酶，引起類似組胺中毒過敏癥狀。2．所致疾病變形桿菌污染食物后，引起食物中毒的主要表現為以下2種類型。(1)胃腸炎型潛伏期為3-20h，起病急驟、伴有惡心、嘔吐、腹痛等癥狀，腹瀉為水樣、帶黏液惡臭、無膿血，一天數次至十余次。有1/3-1/2患者在胃腸道癥狀之后，發熱伴有畏寒，持續數小時后下降。嚴重者有脫水或休克。(2)過敏型潛伏期為0.5-2h，表現為全身充血、顏面潮紅、酒醉貌周身癢感，胃腸癥狀輕，少數患者可出現蕁麻疹。（九）變異性變形桿菌存在抗生素敏感性變異株。（十）環境中的穩定性變形桿菌在自然界分布廣泛，在土壤、污水和垃圾中可檢測出該菌，亦可寄生于人和動物的腸道。（十一）藥物敏感性臨床多選用氨基糖苷類抗生素如慶大霉素、卡那霉素，以及新霉素等治療。但近年來發現了不少耐藥菌株。氨基糖苷類抗生素仍為主要的抗變形桿菌藥物之一。其他有哌拉西林和第二、三代頭孢菌素。喹諾酮類等也有效。（十二）消毒劑敏感性變形桿菌的抵抗力中等，對巴氏滅菌及常用消毒劑敏感。（十三）物理滅活變形桿菌不耐干燥，60℃30min可被殺死。（十四）在宿主體外存活變形桿菌在體外需氧生長，對營養要求不高，在普通培養基上生長良好。（十五）與其他生物和環境的交互作用變形桿菌在自然界中分布較廣泛，多數存在于水中、土壤中及污物上。食品中變形桿菌者的污染菌率為3.8%-100%不等，以熟肉、水產品等動物性食品的污染菌率較高，涼拌菜、剩飯等也易被污染。（十六）預防和治療方案1．預防預防方法為注意環境衛生，嚴格做好炊具食具及食物的清潔衛生。禁食變質食物。食物應充分加熱，烹調后不宜放置過久，涼拌菜須進行嚴格的衛生操作。2．治療一般不必服抗生素，僅需補液、解癥等對癥處理。重者患者可服用氯霉素、諾氟沙星等抗菌藥物。(1)胃腸炎型主要為對癥治療。由于該病大多為自限性，不經治療，一兩天內能自行恢復。若吐瀉嚴重，可給予補液及解痙劑。對重癥者可采用抗菌藥物治療，選用諾氟沙星0.2g/次，4次/d，或用氯霉素0.25-0.5g/次，4次／d，口服。(2)過敏型以抗組胺療法為主，可選用氯苯那敏4mg/次，3次/d，口服。嚴重者應用氫化可松或地塞米松靜脈滴注。二、實驗室相關活動風險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1．感染性因子的種類根據其生物學特性和本中心實驗室檢測能力范圍，本實驗室可能的感染因子為沙門菌病原體本身。2．感染性因子的來源(1)用于變形桿菌檢測的食品和水樣、不明原因腹瀉采集的糞便、嘔吐物、食品加工環節涂抹物、血液等樣本。(2)樣本采集和檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)實驗室操作中可能產生的含病原菌的氣溶膠。(4)實驗相關廢棄物。3．感染性因子造成的危害(1)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環境造成污染。(2)實驗室含有病原菌的廢棄物對環境造成污染。(3)實驗人員暴露后感染。(4)實驗室檢測活動工作中，各種原因導致的液體飛濺或微滴濺出及氣溶膠對實驗室環境造成污染。變形桿菌主要通過糞一口途徑感染。變形桿菌被攝入后進入胃腸道，引起食物中毒，或接觸染疫動物而感染，傷口感染可引起敗血癥等疾病。一般不通過呼吸道途徑傳播。在對變形桿菌進行上述實驗操作時不會因氣溶膠的直接吸入造成人員感染。實驗中各種原因導致的感染性液體飛濺及微滴濺出，從而污染地面、器物表面及工作人員的手，造成感染性物質的意外食入感染；被可能存在感染性病原體的銳器刺傷、割傷可造成皮膚黏膜感染：這兩種是較可能的實驗室獲得性感染方式。（二）實驗活動風險識別與風險控制1．實驗方法(l)風險點識別未采用國家標準、行業標準進行檢測；使用新的或變更過的國家標準或行業標準前，未經技術確認，可能存在安全風險。(2)風險控制措施盡量采用國家標準、行業標準進行檢測，或使用經過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標準、行業標準前，必須經過嚴格的技術確認。2．樣品采集(1)食品和水樣等樣品采集①主要實驗設備和器材采樣剪刀或鑷子、密閉盛樣容器等。②主要風險點識別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規范、盛裝容器密合不嚴、玻璃容器意外破損等，可導致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環境；同時，玻璃容器意外破損和剪刀、鑷子的使用不當，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施食品和水樣等樣品采集容器必須防水、防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鑷子、玻璃容器等銳器時必須規范操作，做好防護，防止刺傷或劃傷。(2)糞便、嘔吐物、食品加工環節涂抹物等樣本采集①主要實驗設備和器材PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養皿、采樣棉簽等。②主要風險點識別糞便、嘔吐物、食品加工環節涂抹物等樣本可能存在感染性病原體，采集過程中存在樣本濺出從而形成小顆粒氣溶膠進而污染人員和環境的風險；工作人員采樣不規范、個人防護不到位，導致環境污染和人員感染；破碎玻璃試管或培養皿存在刺傷或劃傷采樣人員的隱患。③風險控制措施采集糞便和嘔吐物等感染性樣品時，采樣人員應戴手套、口罩，必要時戴防護眼鏡；采樣動作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管：發生污染時，應立即進行消毒處理。(3)血液的采集①主要實驗設備和器材一次性采血針和塑料采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。②主要風險點識別血液樣品可能存在感染性病原體，采血管密封蓋意外脫落或注射器內殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環境；采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經過正規采血培訓，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護（防護服、乳膠手套、口罩）；認真、仔細、謹慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內，禁止用手直接接觸使用后的針頭或將使用后的針頭重新套上針頭套；采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫療廢棄物專用袋中，統一進行消毒處理。3．樣品的包裝和運送(1)主要實驗設備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱）、運送車輛。(2)主要風險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴，有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏；使用不合格運輸包裝進行樣本運送，存在玻璃容器或包裝容器意外破損而刺傷或劃傷采送樣人員的隱患。(3)風險控制措施盛裝樣品容器必須堅固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品的運輸需使用三層合格包裝材料。4．樣品接收和前處理(l)主要實驗設備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質器、均質袋、離心機、生物安全柜、潔凈工作臺。(2)主要風險點識別樣品管理員未按實驗室《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求接收樣品；樣品前處理時，打開糞便或嘔吐物等感染性樣品包裝的動作過猛，會造成樣品側翻；對食品等圓形物樣品進行剪切時，操作不慎發生手剪傷；均質器均質樣本時發生均質袋破裂，離心操作時離心管破裂。(3)風險控制措施①樣品接收必須在專用的區域進行，合同評審人員和收樣人員嚴格按照《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時洗手。②開始檢測前，對盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣必須在潔凈工作室內打開，開啟容器時管口不能對著操作者。③對食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，盡可能剪取食物的可食部分，以防止樣品均質時堅硬物質刺破均質袋，造成樣液濺灑。對含有感染性的樣品進行離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴實，并關上離心機蓋。④實驗室應配備應急藥箱，當發生手剪傷、離心管或均質袋意外破裂、濺出等意外事件時，及時對所有涉及污染的部位、場所進行消毒處理。5．樣本檢測過程(l)主要實驗設備和器材培養箱、水浴箱、細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、顯微鏡、生物安全柜、振蕩器、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環、培養皿等。(2)主要風險點識別①對食品、水樣、糞便和嘔吐物等樣品進行變形桿菌菌株分離鑒定、生化試驗、血清分型、藥敏試驗等實驗活動均涉及活菌操作。在檢測過程中移液或混勻震蕩等操作可能釋放的較大顆粒和小液滴，離心振蕩過程中容器的破碎或滲漏等意外事故，都可能造成感染性物質污染操作者的手、操作臺面、器物表面及地面，從而污染實驗室環境和人，實驗室人員通過皮膚接觸或黏膜接觸而意外食入。②實驗過程中未正確操作銳器、玻璃實驗器材意外破碎等，存在人員被割傷和刺傷而導致的接種感染隱患。③樣品檢測時試管開啟、樣品轉移、稀釋混均吹打、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產生氣溶膠，但變形桿菌不通過吸入感染，實驗室人員通過氣溶膠感染變形桿菌的風險非常小。(3)風險控制措施①開展檢測時檢測人員應按照二級生物安全防護要求做好自身防護措施。②進行食品、水樣等樣品制備、均質等操作應在潔凈實驗室內進行；糞便、嘔吐物等所有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內進行，必須保證潔凈實驗室和生物安全柜處于正常運行狀態。③進行活菌操作時，應在安全柜工作臺面上放置一塊浸有消毒液的紗布或吸有消毒液的紙，避免感染性物質的擴散；涉及高濃度或大體積的感染性的材料離心操作時，應選用密封轉頭或帶安全罩的離心機離心。若有意外污染，應及時進行消毒、沖洗并擦干飛濺出的液體。實驗結束后必須對桌面、臺面及時進行消毒處理。④必須使用移液器或吸球移取樣液，嚴禁用嘴吸液，移液時旋蓋及移液操作的動作要輕緩，所有吸管應用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對移液器或吸球的污染。⑤為避免接種液從接種環上滴落，接種環的直徑應為2-3mm并完全封閉，手柄的長度應小于6cm以最大限度減少振動。盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環，避免在酒精燈的明火上加熱從而引起感染性物質的爆濺。⑥盡可能避免使用注射器及其他銳利的器具，嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液，更不可當吸管用，用過的銳器應直接放入利器盒，經消毒后廢棄。禁止將使用后的針頭重新套上針頭套。盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只能用實驗室級玻璃（硼硅酸鹽），且任何破碎或有裂紋的器皿都應丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。⑦在任何可能導致潛在的傳染性物質濺出的操作過程中，應保護好面部、眼睛和嘴；發生液體濺出、溢出等事故或明顯暴露于傳染源時，應立即向科室負責人報告，及時處理并對事故的發生與處理作記錄。6．菌株使用、保存和運輸(1)主要實驗設備和器材接種針、菌株保存管、振蕩器、生物安全柜、移液器、95千帕樣品運輸罐、生物安全運送箱和專用運送車。(2)主要風險點識別①工作人員保菌操作不規范、個人防護不到位、磁珠管等保存容器意外破損、磁珠掉落等會導致病原菌污染實驗室環境和實驗人員。②變形桿菌使用和保存未按照《菌（毒）種管理規程》(XJK/CX37)要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環境等生物安全隱患。③變形桿菌陽性菌株上送等運輸過程中，若使用不合格包裝進行運輸、容器密封不嚴或運輸工具無安全保障，則可能導致運輸過程中包裝容器意外破損，從而產生病原體的擴散，甚至樣本丟失的隱患。(3)風險控制措施①變形桿菌分離純化及保菌操作應在生物安全柜內進行，若發生磁珠管破損、磁珠掉落時，應及時對臺面進行消毒處理。②變形桿菌標準菌株的使用、保存嚴格按照《菌（毒）種管理規程》(XJK/CX37)要求進行操作，嚴格實行雙人雙鎖保管，嚴防菌株被惡意使用而造成生物危害。③變形桿菌陽性菌株的上送應嚴格執行B類運輸包裝，攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸許可證”，由專車運送，并由專業人員全程護送。7．實驗室的清潔和消毒(l)主要實驗設備和器材70%-75%的酒精、施康清洗消毒液=1\*ROMANI。(2)主要風險點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜進行消毒，有可能會對下次操作人員造成污染或感染。(3)風險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒，使用稀釋lOO倍的施康清洗消毒液I擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%-75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢，先脫去手套，再脫去防護服，并正確用肥皂和流水洗手。8．廢棄物處置(l)主要實驗設備和器材醫療廢棄物專用袋、硬質耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)主要風險點識別①樣品采集和實驗檢測過程產生的感染性廢棄物，如食品、水樣等剩余樣品；血液血清及排泄物標本；病原菌的培養基、生化鑒定條件和菌種等所有實驗過程涉及的用品，釋放前未按照規范要求處理，導致致病因子外泄從而污染環境或人員。②樣品采集和實驗檢測過程產生的被病原微生物污染的損傷性廢棄物，如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿、培養皿等，未按照規范處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。(3)風險控制措施實驗室廢棄物處理應遵循《醫療廢棄物管理條例》《醫療衛生機構醫療廢棄物管理辦法》《醫療廢物專用包裝袋、容器和警示標志標準》等相關法規要求，分類收集，規范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標識的硬質、防漏、防銳器刺破的專用容器中。所有感染性廢棄物必須放置于有警示標識的專用醫療廢物包裝袋中，經高溫高壓滅菌處理后，集中存放至中心指定的醫療廢棄室，由有資質的醫療廢棄物處理單位上門收集，集中處置。同時，做好廢棄物處置交接記錄，所有相關記錄應定期整理歸檔。（三）實驗過程中其他風險識別和控制1．電力(l)主要風險點識別變形桿菌的分離和鑒定對溫度有明確要求，實驗過程中突然間隙斷電或電力供應不穩定對檢測結果的準確性帶來一定的影響。實驗室沒有布置雙路供電或者相關儀器未配備不間斷電源。當電力供應發生故障時，可導致設備突然停止工作，存在實驗活動被迫終止等所帶來的相關安全風險。(2)預防控制措施盡可能在實驗室布置雙路供電，若客觀條件受限制，則對變形桿菌檢測所用的關鍵儀器須配備不間斷電源。2．電氣操作(1)主要風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區內電氣設備的啟動、關閉、安裝和維修；設備層內UPS、空調機組等電氣設備的肩動、關閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、造成電氣故障等風險。(2)預防控制措施①電氣設備的設計及制造符合相關安全標準的要求。實驗室工作區內若有380V電源插座，需明確標識，并由有資質的專業人員進行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設備在未經專業人員（如有資質的電工）完成電氣安全測試和設備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設備使用人員接受正確操作的培訓，操作方式不降低電氣安全性。電氣設備使用人員要定期檢查設備中可能引起電氣故障的破損。只有專業人員可從事電氣設備和電路工作。禁止未經授權的工作。④采取措施對設備去污染，以降低維護人員感染的風險。3．實驗室給排水設施設備(1)主要風險點識別實驗室含有給排水的設施設備，包括位于工作區和洗消區的高壓滅菌器和洗滌池。當水管道意外破裂、排水管道阻塞時，感染性材料可能溢出，有污染實驗人員和環境的風險。(2)預防控制措施實驗室產生的所有染菌物及器具，必須先經高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產生的污水集中排入中心污水池進行消毒處理，嚴禁直接排放。按照GB18466中6.1污水取樣與監測要求執行。4．實驗室設施設備管道(l)主要風險點識別實驗室設施設備管道穿越維護結構的部位可能存在密封不嚴的問題，當感染性材料溢出時，有污染環境的風險。(2)預防控制措施所有管道穿越維護結構的部位應嚴格密封，定期進行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環境。5．主要檢測儀器設備(1)細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、顯微鏡等設備①主要風險點識別對可疑變形桿菌進行鑒定時，需要使用ATB儀、定量熒光PCR儀、核酸提取液、凝膠成像儀等設備，如果不按操作規程操作，則會導致病原體濺出、滲漏而污染實驗環境。②預防控制措施嚴格按ATB儀等沒備操作規程操作和維護，每次使用完畢后對設備箱體及可能污染的實驗環境進行消毒。(2)離心機①主要風險點識別在分離血清、濃縮菌液等檢測活動中會使用到離心機，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉子和離心腔被污染的風險。②預防控制措施離心時配備耐離心壓力的外螺旋蓋的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力。規范正確操作，定期維護，確保離心機性能正常，每次做好清潔消毒和使用記錄，定期進行功能檢查。6．生物安全設施設備(1)生物安全柜①主要風險點識別變形桿菌大量活菌操作必須在生物安全柜中進行，若不按照安全柜操作規程進行操作、維護與年度監測，其防護屏障作用會明顯降低，甚至消失，失去安全防護效果；若長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，會使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；使用后若不進行徹底消毒處理，會造成使用和維護人員間接接觸污染。②預防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應接受相關的操作、維護培訓，日常操作和維護嚴格按照設備操作規程或使用說明書進行。每年請有檢測資質的服務機構對生物安全柜進行風速、氣流、塵埃粒子、紫外線強度等關鍵要素的檢測，實驗室定期進行沉降菌檢測，確保其正常性能。一旦生物安全柜的使用造成污染，應及時消毒。(2)高壓滅菌器①主要風險點識別變形桿菌檢測過程中被病原菌污染的玻璃、耐高壓的實驗器材及實驗廢棄物要進行高壓滅菌消毒才可移出實驗室，若不按照高壓滅菌器操作規程進行操作、維護，其效果會明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；若長時問使用又不定期檢測滅菌效果，對其滅菌效果無從考證，可能產生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患：在長期關停期間，若內部水分不及時排干，將會使內部器件老化從而失去正常功能。②預防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染；操作人員持證上崗，規范操作，定期維護，確保高壓滅菌器性能正常；定期進行檢定與核查，做好使用記錄。日常進行滅菌效果檢測，以保證滅菌質量。(3)個人防護用品①主要風險點識別個人防護用品若穿戴不規范、大小不合適或使用過期的防護用品等，則將會導致防護效果降低，甚至失效。②預防控制措施進行變形桿菌大量活菌操作時，個人防護采取二級生物安全防護水平，選擇大小合適、有效的防護用品。(4)應急救治設施和用品①主要風險點識別若實驗室沒有配備洗眼器、應急藥箱等必要的應急設施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導致急用時無法發揮作用。②預防控制措施在實驗室內正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創可貼等急救物品與實驗活動相適應并在有效期內使用，由專人負責管理，定期維護、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①主要風險點識別消毒劑產品無生產許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，將會導致消毒效果降低、生物滅活能力降低或對物品腐蝕性增加、對皮膚造成刺激等問題。②預防控制措施選擇符合國家標準的正規廠家生產的產品，選擇合適的消毒劑，按照規定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進行消毒，避免使用過期產品；消毒過程中消毒人員應做好必要的個體防護，防止發生意外。根據變形桿菌特點，選用70%-75%酒精和稀釋10-25倍、50-100倍、200倍的施康消毒劑I（主要成分為次氯酸鈉）作為實驗室常用消毒劑。7．管理體系的風險(l)主要風險點識別管理體系（包括應急預案）是否健全和完善，是否符合實際管理要求，程序文件、作業指導書和操作規程是否科學和具有可操作性，是能否確保生物安全的主要因素。如果組織結構不健全、設置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責不清或銜接不當等，就都可能帶來安全風險。(2)預防控制措施定期開展對管理體系的評審，發現問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續有效運行。（四）工作人員的風險評估與預防控制措施l．人員數量和素質(1)人員數量①主要風險點識別人員過少會因缺少相互提示監督或因工作量增大而導致操作過程中工作失誤增加，風險增加。②預防控制措施采樣和檢測人員的數量應與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時進行采樣和檢測工作。(2)人員結構①主要風險點識別實驗室新進人員沒有高資歷人員帶教操作，不能很好應對意外事件，風險增加。②預防控制措施實驗室檢測人員的年齡和資歷結構應配備合理，新進人員應由高資歷人員帶教或監督操作。(3)職業操守①主要風險點識別變形桿菌檢測存在一定的生物安全風險，若責任心不強的人員參與該項工作，則產生生物危害而危及人員安全、環境安全與社會安定的可能性較大。②預防控制措施加強職業道德教育，培養工作責任心。2．健康管理(l)主要風險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質與免疫狀態。若實驗室檢測相關人員出現呼吸道或者消化道感染癥狀、機體免疫力低下等其他不適合工作的狀況，職業暴露風險增加。(2)預防控制措施建立健康申報制度，遇有呼吸道或者消化道感染及其他不適合工作的情況時，應及時向科室負責人報告并暫停工作。3．人員資質(1)主要風險點識別檢測人員不具備衛生檢測相關學歷教育背景，不熟悉變形桿菌檢測方法及操作規范，未執行相關的專業知識培訓和考核，并未獲得上崗證，無法保證工作質量和安全。(2)預防控制措施檢測人員必須是檢驗或相關專業畢業，經過上崗培訓和持證上崗。4．生物安全培訓要求(l)主要風險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進修實習人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全，以及相關生物安全設備操作的技術培訓，易造成生物安全事故的發生。(2)預防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術培訓、考核。上崗前熟練掌握生物安全儀器設備、設施操作技術，具備相關的安全防護能力。進修實習人員參與實驗活動前必須進行生物安全知識的培訓，在帶教老師的監督下工作。5．應急事件處理能力(l)主要風險點識別實驗室人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業暴露后預防等突發事件處置的培訓，一旦發生意外事件，就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。(2)預防控制措施實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應急處置技術方案》中規定的要求進行應急事件的處置，強化職業暴露的應急處理能力。（五）實驗室非常規活動中的風險評估與預防控制措施1.主要的實驗室非常規活動(l)實驗室外專業人員對實驗室設施設備的維護、維修、檢定／校準、檢測驗證（如主要設施設備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）等。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環境的保潔、實驗器材的清洗消毒。(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查。(4)任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動外的行為。2.主要風險點識別(1)上述人員進入實驗室從事相關活動，特別是不慎打翻、打破標本管或損壞儀器零部件等情況，可能存在實驗室感染的風險。(2)實驗室運行過程中某些人員需要進入實驗室參觀，存在影響實驗活動正常運行或者導致相關或不相關的設施設備損壞的風險。3．預防控制措施(l)實行人員準入、登記制度。進修實習人員進入實驗室從事檢測活動前，必須先進行生物安全和實驗室規章制度的培訓。若中心實驗室外專業人員和實驗室后勤保障人員確實需要進入實驗室進行相關活動，或上級部門需要進入實驗室進行檢查，進入實驗室時應有中心實驗室人員陪同。(2)實驗室外專業人員和實驗室后勤保障人員必須要有相應的專業知識，應對其進行生物安全培訓，提供安全指南，實驗室人員應協助、指導和規范進入人員在實驗室內的活動并對其安全行為進行監督，進入人員必須遵守實驗室的各項管理規定，以確保人員和環境安全。(3)進入人員未經許可絕對不能私自動用實驗室內有標志的危險品，絕不能將未經消毒處理的物品拿出實驗區。(4)在生物安全實驗室進行設施、設備維護維修過程中，若發生意外事件，應立即報告實驗室負責人。實驗室負責人根據造成的事故進行風險洋估，并采取應對措拖。按專業技術要求進行設施、設備的維護維修時，不能私自動用其他設施設備。若導致相關或不相關的設施設備損壞時，應及時報告。(5)當需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時，應先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業人員才能進行更換。(6)為確保自己和他人的安全，禁止未穿防護服的人員隨意進出實驗室的防護區域。同時也禁止穿防護服的人員走出實驗室的防護區域。