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第第頁離子交換色譜柱的原理和再生方法色譜柱工作原理離子交換色譜柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團，這些帶電基團通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結合。假如流動相中存在其他帶相反電荷的離子，依照質量作用定律，這些離子將與結合在固定相上的反離子進行交換。

離子交換色譜柱基本原理：

離子交換色譜是蛋白純化技術中常用的一種純化方法，其原理是指被分別物質所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結合，這種帶電分子與固定相之間的結合作用是可逆的，在更改pH或者用漸漸加添離子強度的緩沖液洗脫時，離子交換劑上結合的物質可與洗脫液中的離子發生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質的電荷不同，其與離子交換劑的結合本領也不同，所以被洗脫到溶液中的次序也不同，從而被分別出來。

離子交換色譜柱的再生方法有兩種：

（1）先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類，再用25ml甲醇沖洗，以除去由于調配效應而殘存在骨架中的雜質，再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類，最后用緩沖液平衡。

（2）先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌，然后用水洗滌（不要用堿性溶液，以防硅膠基質溶解），最后用緩沖液平衡。液相色譜柱安裝后的使用

色譜柱在使用前，可以進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是依照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、可以使用流動相溶解樣品。

b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。使用0.45？m的過濾膜過濾除去微粒雜質。

2、流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分別的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有確定的溶解本領，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。

b、流動相具有確定惰性，與樣品不產生化學反應（特別情況除外）。

c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分別效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。

d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸取較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則簡單產生氣泡，導致試驗無法進行。

f、在流動相配制好后，確定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。

3、流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要努力探求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

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