ICS65.020.01CCSA017

T/NAIA團 體 標 準T/NAIA0287-2024枸杞中6種黃酮類物質含量的測定液相色譜-質譜/質譜法DeterminationofflavanoidsinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry2024-05-10發布 2024-05-30實施寧夏化學分析測試協會 發布T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024II前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由寧夏化學分析測試協會提出并歸口。化學分析測試協會。翔、開建榮、張學玲、張小飛。本文件為首次發布。T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024PAGEPAGE1枸杞中6種黃酮類物質含量的測定液相色譜-質譜/質譜法范圍本文件規定了枸杞中黃酮類物質的液相色譜-質譜/質譜測定方法。-7-O-ft奈酚-3-O-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的液相色譜-質譜/質譜法測定。1.00mg/kg，異槲皮苷和槲皮素-7-O-葡萄糖0.010mg/kg，ft奈酚-3-O-6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的方法定量限均為0.050mg/kg。規范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法術語和定義本文件沒有需要規定的術語和定義。原理70%甲醇溶液提取，渦旋超聲，微孔濾膜過濾，用液相色譜-質譜/質譜儀檢測和確證，外標法定量。試劑與材料除非另有規定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規定的一級水。乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。甲酸（CH2O2）：色譜純。 蘆丁（rutin，CAS153-18-4）、異槲皮苷（isoquercitrin，CAS482-35-9）、槲皮素-7-O-葡萄糖苷（quercetin-7-O-glucoside，CAS491-50-9）、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，CAS17650-84-9）、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷（6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside，CAS號403861-33-6）和水仙苷（narcissin，CAS號604-80-8）。標準溶液配制標準儲備溶液：分別準確稱取適量的蘆丁、異槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷標準品（0.011000mg/L的標準儲備溶液，-18下保存。10mg/L標準中間溶液，-18℃下保存。標準工作溶液（0.01mg/L~30mg/L）用甲醇定容至刻度。70%甲醇溶液（體積分數）：70mL100mL。0.1%甲酸溶液（體積分數）：1mL1000mL。濾膜：0.22μm，有機相。離心管：50mL，塑料。儀器與設備液相色譜-質譜/質譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2 0.01g0.0001g。高速萬能粉碎機：10000r/min。超聲波清洗機。離心機：4000r/min。渦旋混合器。分析步驟試樣的制備-18℃（可加少量的液氮（30gs），分別置于樣品瓶中，-18冷凍備用。試樣的提取鮮果稱取試樣2g（精確至0.0001g）于50mL離心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振搖混勻，超聲提取30min，放入離心機，4000r/min離心5min，上清液過0.22μm濾膜，待測定。干果稱取試樣1g（精確至0.0001g）于50mL離心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振搖混勻，超聲提取30min，放入離心機，4000r/min離心5min，上清液過0.22μm濾膜，待測定。測定液相色譜參考條件a）色譜柱：C18柱，150mm×2.1mm（i.d），1.8μm，或性能相當者；b）柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；流動相：A0.1%甲酸溶液（5.7），Be）進樣量：2.0μL。表1流動相及其梯度條件（VA+VB）時間(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)0.000.390101.000.3901014.000.3109016.000.3109018.000.3901020.000.39010質譜參考條件a）離子源類型：電噴霧離子源；b）掃描方式：選擇離子監測模式；c）電噴霧電壓：3.5kV；d）毛細管傳輸溫度：300℃e）碰撞壓力：1.5mTorr；f）鞘氣：30arb；g）輔氣：10arb。表2黃酮類物質的選擇離子監測分析參數名稱保留時間/min定性離子對/m/z定量離子對/m/z碰撞能量/eV蘆丁rutin4.73609.14/271.071609.14/300.042609.14/300.042-43.25-26.61異槲皮苷isoquercitrin4.91462.98/301.042462.98/301.042-21.474.9槲皮素-7-O-葡萄糖苷quercetin-7-O-glucoside4.90463.21/151.071463.21/301.113463.21/301.113-38.11-22.78ft奈酚-3-O-蕓香糖苷5.17593.27/255.042593.27/285.042-54.24kaempferol-3-O-rutinoside593.27/285.042-29.856-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside5.25623.3/271.042623.3/315.113623.3/315.113-53.82-27.83水仙苷narcissin5.25623.21/300.042623.21/315.042623.21/315.042-43.42-43.42定性測定苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷4.73、4.91、4.90、5.17、5.25、5.25minA1品中存在對應的被測物。表3定性確證相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%定量測定采用外標-校準曲線法定量測定。保證所測樣品中組分的響應值均在儀器的線性范圍內?？瞻自囼灣患尤朐嚇油?，其他過程與試樣處理相同。結果計算和表達試樣中蘆丁、異槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-蕓香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-蕓香糖苷和水仙苷的含量以質量分數計，數值以毫克每千克（mg/kg）計，按式（1）計算：1000

……（1）式中：

m 1000——試樣中被測物殘留量的數值，單位為毫克每千克（mg/kg）；——試樣溶液中被測物的含量，單位為毫克每升（mg/L）；V——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質量的數值，單位為克（g）。注：測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數字。精密度在重復性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。色譜圖各目標化合物的選擇離子監測（SRM）色譜圖參見圖A。附錄A（資料性）黃酮類物質的選擇離子監測（SRM）質量色譜圖黃酮類物質的選擇離子監測（SRM）質量色譜圖見圖A。

160000

140000120000100000800006000040000

200004.904.90

04.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6

響應值

5.17響應值4.735.17響應值4.73

6000040000 2000004.44.64.85.05.25.45.65.86.06.2

ft奈酚-3-O-蕓香糖苷

t,minrutin

t,min5.25350000響應值5.25

5.25350000響應值5.25300000

3000002500