關于高中生物第三章第一節菊花的組織培養3新人教版選修1第2頁,共35頁，星期六，2024年，5月第3頁,共35頁，星期六，2024年，5月

菊花是菊科菊屬的多年生宿根草本植物,是我國的傳統名花和世界四大切花之一長期以來菊花采用分株、扦插等無性繁殖方法進行繁殖但是傳統的繁殖方法易受環境影響,繁殖周期長,隨著市場需求的急劇增加,已經不能滿足市場日益發展的需要。植物組織培養具有增殖效率高、繁殖速度快的特點,可以用較短的時間和較少的空間生產出大量的試管苗第4頁,共35頁，星期六，2024年，5月扦插嫁接壓條

第5頁,共35頁，星期六，2024年，5月植物組織培養的基本過程影響植物組織培養的因素菊花的組織培養第6頁,共35頁，星期六，2024年，5月植物組織培養關鍵詞：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織

在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細胞，培養在人工配置的培養基上，給予適宜的培養條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。第7頁,共35頁，星期六，2024年，5月切取形成層無菌接種誘導愈傷組織的形成試管苗的形成培養室移栽脫分化再分化舉例第8頁,共35頁，星期六，2024年，5月1、培育無病毒植株2、大規模培養愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養的方法（受體細胞為植物細胞）植物組織培養的應用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結子困難或發芽率低等問題）第9頁,共35頁，星期六，2024年，5月植物組織培養過程:離體組織或細胞植物體脫分化細胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素再分化植物細胞培養不需要光需要光第10頁,共35頁，星期六，2024年，5月脫分化：讓已經分化的細胞，經過誘導后，失去其特有的結構和功能而轉變成未分

化細胞的過程。再分化：脫分化的細胞，在一定的條件下，又重新分化成各種特異性的組織細胞的過程。外植體：離體的植物器官、組織或細胞。愈傷組織：細胞排列疏松、無規則、高度

液泡化的無定形的薄壁細胞。第11頁,共35頁，星期六，2024年，5月植物組織培養的理論基礎——細胞全能性概念：高度分化的植物細胞，仍然具有發育成完整個體的潛能。基礎：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質。表達條件：離體條件無菌操作適宜物質的誘導和調節（植物激素）適宜的營養物質溫度、酸堿度、光照等條件的控制第12頁,共35頁，星期六，2024年，5月影響植物組織培養的因素材料的種類、年齡及保存時間長短等營養植物激素PH、溫度、光照等條件第13頁,共35頁，星期六，2024年，5月（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的組織培養較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導比較難材料的年齡、保存時間的長短菊花的組織培養一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側枝第14頁,共35頁，星期六，2024年，5月（2）MS培養基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、

I、Co等C、有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等

D、植物激素：生長素、細胞分裂素、赤霉素等第15頁,共35頁，星期六，2024年，5月討論：你能說出各種營養物質的作用嗎？同專題2中微生物培養基的配方相比，MS培養基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生的特殊營養需求。微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養基則需提供大量無機營養，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。

第16頁,共35頁，星期六，2024年，5月常用的植物激素：生長素、細胞分裂素和赤霉素生長素、細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈加強的趨勢激素的使用順序、使用的量及比例影響植物細胞的發育方向（3）植物激素的影響第17頁,共35頁，星期六，2024年，5月生長素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細胞分裂素類：激動素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）第18頁,共35頁，星期六，2024年，5月使用順序實驗結果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但不利分化先使用細胞分裂素后使用生長素細胞既分裂、也分化同時使用分化頻率高使用比例實驗結果生長素細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素細胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進愈傷組織生長第19頁,共35頁，星期六，2024年，5月（4）pH、溫度、光照pH控制在5.8左右溫度控制在18－22℃每日用日光燈照射12h第20頁,共35頁，星期六，2024年，5月菊花的組織培養（一）制備MS固體培養基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養（五）移栽（六）栽培第21頁,共35頁，星期六，2024年，5月（一）制備MS固體培養基MS培養基包括20多種營養成分，實驗室一般使用4℃保存配制好的培養基母液來制備1、配制各種母液①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/ml的質量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養基時，需要根據各種母液的濃縮倍數，計算用量第22頁,共35頁，星期六，2024年，5月2、配制培養基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養液②調PH③培養基的分裝由于菊花的莖段的組織培養比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌第23頁,共35頁，星期六，2024年，5月1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為70％的酒精中搖動2－3次，持續6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質量分數為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液第24頁,共35頁，星期六，2024年，5月（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至關重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種第25頁,共35頁，星期六，2024年，5月第26頁,共35頁，星期六，2024年，5月4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數為75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養基中要分布均勻，放置外植體數量根據錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養基中的營養成分和光照條件③插入時應注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養基利于吸收水分和養分第27頁,共35頁，星期六，2024年，5月正常苗污染苗第28頁,共35頁，星期六，2024年，5月1、外植體帶菌2、培養基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環境不清潔污染途徑第29頁,共35頁，星期六，2024年，5月思考：你打算做幾組重復？你打算設置對照實驗嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經過滅菌的裝有培養基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養，用以說明培養基制作合格，沒有被雜菌污染。第30頁,共35頁，星期六，2024年，5月（四）培養接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養，培養期間應定期消毒培養溫度控制在18-22℃每日用日光燈光照12h第31頁,共35頁，星期六，2024年，5月（五）移栽

移栽生根的菊花試管苗之前，應先打開培養瓶的封口膜，讓試管苗在培養間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉移

用流水清洗根部的培養基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環境下生活一段時間3、移栽幼苗長壯后，移栽到土壤中第32頁,共35頁，星期六，2024年，5月固體基質型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培珍珠巖

,珍珠巖是一種火山噴發的酸性熔巖，經急劇冷卻而