克隆豬的重要事件以及產業化應用前景Situationworldwide–forpigcloningUSAEnglandJPNCHNDKITAGERSouthKoreaAUS胚胎細胞核移植克隆1985年:美國威斯康星大學RoblandFirst首次簡單的描述了豬的胚胎細胞核移植{JReprodFertil,33(Suppl):101-114};1989年:該大學N.First教授課題組的Prather等，報道了世界首例胚胎細胞克隆豬誕生{Prather,etal.BiolReprod,41:414-418};特點：供核細胞為豬早期胚胎卵裂球，受體卵胞質為體內成熟的MII卵母細胞，體內培養后進行胚胎移植！！！此后到1999年，利用胚胎細細胞核移植獲得克隆豬的報道就再也沒有了！！！直到2000年，才有我國東北農大李光鵬教授等再次成功獲得胚胎細胞克隆豬，重復出Prather等人的研究{LiGP,etal.Cloning,2(1):45-52。普通體細胞克隆（1）1999年，美國密蘇里哥倫比亞大學Prather教授課題組報道了利用豬胎兒成纖維細胞與體外成熟卵開展體細胞克隆的研究結果，但是效率很低，所獲囊胚質量也差，沒有獲得克隆豬{TaoTetal.cloning,1:55-62;AnimReprodSci,56:133-141};Prather教授甚至一度想放棄體細胞克隆豬的研究！2000年，英國PPL公司{Polejevaetal.Nature,407:86-90}，日本NIAI動物遺傳育種系{Onishetal.Science,289:1188-1190}相繼利用體內成熟卵開展體細胞克隆獲得成功，但是操作復雜，效率低。2000年，美國Infigen公司{Betthauseretal.NatureBiotechnol,18:1055-59}的報道利用體外成熟卵、胎兒成纖維細胞成功獲得克隆豬，才奠定了今天流行的利用體細胞核移植生產克隆豬的方案！！！普通體細胞克隆（2）此后，類似的研究如雨后春筍，雖然成功的國家不多，也還是吸引了幾十家課題組不斷嘗試結合轉基因、基因敲除等技術為新品種培育、異種器官移植、人類疾病模型研制等工作打基礎。

2006年，Prather課題組LiRF等將克隆胚胎進行玻璃化冷凍，獲得克隆豬{Lietal.,BioReprod.75:226-230}

/labs/prather/history.php2007年，丹麥奧胡斯大學成功獲得國際首例手工克隆豬{Duetal.,Theriogenology,68:1104-1110}；同年，還得到了玻璃化冷凍手工克隆胚胎的后代{Duetal.,cloningandstemcells,9(4):469-176}。TheJournalofClinicalInvestigationApril2008SEPTEMBER26，

20082005年，中國農大報道國內首例普通克隆豬2006年，東北農大獲得國內首例轉GFP基因克隆豬2007年，上海得到普通克隆豬2007年，廣西大學相繼得到普通克隆豬2007年，中國農大先后獲得世界首例轉溶菌酶基因克隆豬、敲除抑肌素基因克隆豬我國大陸體細胞克隆豬概況克隆豬技術本身的發展卵母細胞：體外成熟（在美國已經有商業化的公司專門提供體外成熟的卵母細胞）。胚胎重構：傳統的顯微操作法Vs.手工克隆法，二者效率相當，但手工克隆法前期投入少，無需貴重儀器。重構胚培養：較為成熟，體外發育囊胚率甚至高于IVF。高效性：與傳統克隆相比，手工克隆在囊胚率、懷孕率上都顯示出較高2.穩定性：手工克隆技術通過囊胚生產，選擇優質囊胚進行移植，效率穩定。3.操作簡便性：手工克隆完全手工完成，在經過短期培訓后，一個擁有普通生物背景的工作人員及能完成全部操作。4.易于推廣：已形成手工克隆實驗室的標準配置以及標準操作流程，更加容易實現整套體系的復制和推廣。5.費用低廉：不需要昂貴的儀器設備、不需要高級科研人才；只需要一臺普通體式顯微鏡、一個生物背景的工作人員、一把刀即可。6.易于推廣商業化：

儀器設備費用低廉、技術易于掌握、人才需求方向廣、生產效率高等優點決定了易于推廣。1531/1562clonedembryos12/12recipients9/1termpregnancies47(3.1%)/1(0.05%)piglets9/2pregnanciesOvulationapprox.24/6hrsPost-transfer!克隆豬的商業化現狀和前景農業動物育種：美國Viagen公司醫學美國Infigen公司丹麥Pixgene公司其他

華大方舟克隆豬商業化突破口尤其是克隆高產優質種豬，可能還會提前；……mostlikely,thefirstclonesutilizedintheswineindustrywillbeboarswithhighgeneticmeritforproductiontraits......{Pratetal.2006,Reproductionsuppl.303-}在美國，克隆豬商業化的主要障礙還是人們的接受程度！有望商業化的不單純是克隆豬、豬肉，伴隨著豬人工授精技術的不斷成熟、大面積推廣，良種公豬的精液需求必將增加。頂級公豬的克隆成功將有助于這項工作。即使在目前的效率下，克隆頂級公豬也能給飼養者帶來較好的經濟效益。而且體細胞克隆技術在環保、降低飼料消耗上也能發揮應有的作用！Ourfuture?Purpose: Commercialproduction ofcloned/transgenicpigs forhumandiseasemodels轉基因克隆抗病育種疾病模型環境友好型肉、乳品質改造生長性能改善、耐粗生物反應器：藥物蛋白我國每年約有1