水稻莖線蟲檢疫鑒定方法MethodsforquarantineandidentificationofDitylenchusangustus(Butler)Filipjev一、背景由來水稻莖線蟲1912年首次在孟加拉發現，人們稱之為Ufra、DakPora。二、地理分布水稻莖線蟲目前主要分布于亞洲和非洲的水稻生長區，包括孟加拉、緬甸、泰國、烏茲別克、印度、菲律賓、印度尼西亞、巴基斯坦、越南、柬埔寨、埃及、蘇丹、南非、阿聯酋、馬達加斯加、古巴等國家。我國目前未見分布報道三、寄主水稻（Oryzaesativa）是該線蟲的最主要寄主，另外，該線蟲還寄生稻屬植物的其他一些種。外寄生于水稻，生殖只能在稻株內進行，主要寄居于花梗的基部、莖桿末節以上以及穎片之內，這些地方大多有包括卵到成蟲各個階段的大量線蟲。四、危害癥狀世界發病區平均減產水稻30％，部分地區更嚴重。如印度尼西亞水稻受害減收50％，泰國水稻少收20％～90％，還有少數地區水稻受害后絕收，中國未見報道。田間早期癥狀表現為病株幼葉基部捻卷，出現白色或淺綠色斑點，葉片和葉鞘產生褐色斑，葉緣卷縮，葉尖彎曲，叫鞘扭曲。病株抽穗后基部通常卷曲，不能結實，或只有頂部小穗能產生正常稻粒，花軸和枝梗為暗褐色，穗和劍葉扭曲。有些病株在下部節位可能腫大，并產生不規則的分支，穗包在葉鞘內不能抽出或僅部分抽出。四、危害癥狀在發病的水稻植株發育的各個階段，都可發現水稻莖線蟲的卵、幼蟲和成蟲。在水稻秧苗移栽后幾天，在花芽頂端就可發現該線蟲，并且隨植物的生長到新形成的組織器官上營外寄生生活。在水稻的花期和抽穗期，線蟲主要在莖的柔嫩部位，葉鞘、莖稈、未授粉的扭曲的谷粒和畸形花梗中活動。被為害的植株矮化，葉片常萎縮。最后一個節間上方的葉鞘和枝芽扭曲，蜷曲。總花梗蜷曲，花梗產生未授粉的小穗。在線蟲所處部位以上的一至幾個莖節上產生特征性病變。四、危害癥狀

膨腫型

線蟲破壞始于穗形成的早期，這種病穗緊裹葉鞘里面，不能抽出，呈紡錘形腫大，剝去葉鞘，可見病穗已變為褐色，并捩曲歪扭，不結實。花的各部也退化難辨。

成熟型

穗形成的早期已過，線蟲開始破壞。這種病穗，可以從葉鞘中抽出，并能結成一些正常谷粒，特別是靠近穗的頂部，但穗的下部小花全不受精，或僅有部分小花結實。花梗呈暗褐色到黑色。

中間型

穗僅部分抽出，顯示細弱而不結實。病株常在被害處，形成分枝，即在同一葉鞘內伸出2～4根扭曲的穗。其中有只有主穗形成的穗，大小正常。五、病原菌水稻莖線蟲學名：Ditylenchusangustus（Butler，1913）Filipjev。英文名:Ricestemnematode。分類地位:線蟲門，側尾腺綱，墊刃目Tylenchida，粒線蟲科Anguinidae，莖線蟲屬DitylenchusFilipjev，19361、分類地位五、病原菌稻莖線蟲一生中同樣經過卵、一齡幼蟲(卵中渡過)、二齡幼蟲、三齡和四齡幼蟲及成蟲幾個階段，是典型線蟲生活史型。線蟲在病稻草、稻茬、種子及混在種子里的病殘碎片中越冬，并成為初侵染源。水稻播種出苗后，潮濕條件下，稻的莖葉表面有水時，帶到田里的病原線蟲就從土壤往上爬，入侵莖桿的有關部位，為害生長點附近的葉和穗，據報道，在水稻移栽后幾天內，生長點的頂芽上就發現了該病原線蟲，并逐步蔓延到葉鞘、莖種子周圍幼嫩的莖里，產生各種病害癥狀雖然稻株各部都能發現線蟲，但它們只外寄生在各部幼嫩組織內寄生。

2、生物學五、病原菌在干旱和稻接近成熟時，病原線蟲卷曲停止取食并變得不活躍，形成間生態，聚集成棉花團狀，進行休眠，以渡過不良壞境。休眠的該種線蟲在干燥條件下能活15個月以上，待潮濕條件出現或水稻生長季中，它們立即恢復活動，在水中能存活4個月。病原線蟲入侵寄主的最適溫度是20℃一30℃。五、病原菌·一般在耕種后5-7月份、11月份，線蟲就在寄主植物內繁殖。Buttler(1936b)報道線蟲一季可繁殖3代，每條雌蟲能產卵50-100個。Miah和Bahr(1977)觀察到在溫度為28-30℃、相對濕度超過80%的條件下有利于線蟲感染、病害發生及其繁殖。一齡幼蟲在卵內完成，整個發育階段從二齡幼蟲開始只須15天；在人為條件下，整個生活史則需24天完成。在一般的條件下，如果卵直接產生在濕莖中，二齡幼蟲就不用再花時間去尋找宿主，這樣整個發育階段就有可能縮短。四種幼蟲可根據其體長不一來進行區分。8月份，植株處在未成熟階段而在水分充足的條件下，成蟲數量達到頂峰，經過繁殖，成蟲可由1增加到3000。Catling等（1979）報道在一水稻莖桿中有30000條線蟲，而且在寄主植物上可看到其生活史的各個階段。五、病原菌水稻莖線蟲運動和發育都需要高濕度，從水稻播種開始，如果一生中雨水都多，濕度大，有利于病原線蟲繁殖、運動和入侵寄主，病害發生就會加重，干旱季節，發病就輕。國外資料表明，在孟加拉國，一年種幾季水稻，在雨季中長的水稻受害重，秋稻受害輕，固為線蟲群體密度還沒有達到高峰時，水稻就成熱收獲了。而1月到4月生長的第三季稻，因生長期是當地的干旱季節，幾乎不受感染。另外，線蟲在冬天和春天能活下來的群體數量越多，下一個生長季節就很活躍，加重病害發生。六、傳播途徑

本病原可從秧苗移植傳到大田，再靠田間排水、灌水及雨水，由一塊田傳到另一塊田。在潮濕的條件下，病健株間彼此接觸摩擦也可傳播，收獲后病田內的根莖、病株殘體為下一年的初侵染源。病種子也能傳播該線蟲。1、適用范圍稻種中的水稻莖線蟲稻草中的水稻莖線蟲稻草編織物（袋、繩、席等）中的水稻莖線蟲七、檢疫鑒定方法2、原理水稻莖線蟲Ricestemnematode，學名：Ditylenchusangustus（Butler，1913）Filipjev，線蟲門，側尾腺綱，墊刃目，粒線蟲科，莖線蟲屬。外寄生于水稻，生殖只能在稻株內進行，主要寄居于花梗的基部、莖桿末節以上以及穎片之內，這些地方大多有包括卵到成蟲各個階段的大量線蟲。水稻受害后葉面出現淺綠色斑點，葉緣卷縮，葉尖彎曲，整張葉片扭曲或呈畸形，嚴重時花穗捻轉或包在葉鞘內不能抽出，小穗不孕，形成空粒。七、檢疫鑒定方法2、原理本病主要由稻種內潛伏的線蟲作遠距離傳播，通過引種傳帶到新稻區，還可通過患病的稻草作遠距離傳播。土壤中殘留的線蟲以及帶線蟲的病稻草、稻茬、種子或混在種子里的病殘碎片為當地次年發病的主要來源。它的侵染循環、傳播途徑、寄主范圍、生物學和形態學特征是該檢疫鑒定方法的依據。3、儀器、用具生物顯微鏡體視顯微鏡凹玻片試管載玻片蓋玻片加熱板（

80oC以下）燒杯（500ml、1000ml）漏斗漏斗架研缽培養皿剪刀跳針干燥器冰箱3、儀器、用具打孔器酒精燈乳膠管紗布止水夾指形管玻璃纖維（3mm～5mm）４、藥品指甲油TAF固定液（40%甲醛7ml、三乙醇胺2ml和蒸餾水91ml混合而成）乳酚油（苯酚20ml、乳酸20ml、甘油40ml和蒸餾水混合而成）石蠟5、現場檢疫5.1.1抽樣方法：5.1抽樣

棋盤式、五點式、隨機抽樣5.1.2抽樣數量5.1.2.1稻種

按總件數的5%～20%抽樣，最低抽檢10件。取樣的數量為：10kg以下取2kg；11kg～100kg取4kg；101kg～500kg取6kg；501kg～１000kg取8kg；1001kg～2000kg取10kg；2001kg～5000kg取12kg；5001kg～10000kg取14kg；10001～100000kg每增加5000kg增取2kg；不足5000kg余量記取2kg。

按總件數的5%~20%抽樣，每次檢查不得少于10件且不少于500根。取樣的數量為：50根以下取5根，51根~200根取10根；201根~1000根取15根；1001根~5000根取20根；5001根以上，每增加5000根增取5根樣品，不足5000根的余量計取5根樣品。

5、現場檢疫5.1.2.2稻草及其編織品5.2外觀癥狀的檢查5.2.1水稻種子的檢查

首先要注意檢查褐色畸形種子，其次要看稻種內是否混有稻草或其他水稻殘體，同時注意是否夾帶泥土等，收集后與采樣的樣品一并送實驗室進行檢查。5、現場檢疫5.2.2稻草及其編織品的檢查注意檢查葉鞘顏色異常、葉緣卷縮、葉尖彎曲、整張葉片扭曲或呈畸形、草稈短小的稻草及其編織品。收集上述可疑植物材料及所夾帶的土壤等與采集的樣品一并帶回實驗室檢驗。6、實驗室檢驗抽樣所得種子，可將稻種去殼，利用漏斗法分離穎殼中可能帶有的線蟲。分離所得的線蟲制成臨時玻片，在顯微鏡下觀察，并根據形態鑒定特征進一步鑒定。

6.1稻種檢驗方法對于畸形、不飽滿的種子，可直接在體視顯微鏡下解剖，檢查有無線蟲。如有線蟲，制成臨時玻片，在顯微鏡下觀察，并根據形態鑒定特征進一步鑒定。貝曼漏斗法

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淺盤貝曼漏斗法分離線蟲過程簡介

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淺盤貝曼漏斗法分離線蟲過程簡介網盤漏斗乳膠管止水夾試管面巾紙

*淺盤貝曼漏斗法分離線蟲過程簡介

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*淺盤貝曼漏斗法分離線蟲過程簡介6、實驗室檢驗6.2稻草及其編織品的檢驗方法

將采得的樣品適當處理成小段，用漏斗法分離。收集所分離的線蟲，在體視顯微鏡下觀察，并挑取若干條線蟲至載玻片上，制成臨時玻片，在顯微鏡下觀察，并根據形態鑒定特征進一步鑒定。7、形態鑒定特征

雌蟲：一般不肥大，不彎成螺旋形，長0.6mm～1.5mm，有的可達2mm；表皮有很細的環紋，側區有四至六條刻線；口針細小，多數長度為7μm～11μm；中食道球有或無瓣，偶爾無明顯的中食道球，峽部與后食道腺之間無縊縮，后食道腺短或長，不覆蓋、短覆蓋或長覆蓋腸；單生殖腺、前伸，卵巢短或長，有時伸達食道區或轉折，卵母細胞一行至二行排列，子宮柱狀部有四排細胞（每排四個細胞），后陰子宮囊有或無。7.1莖線蟲屬鑒別特征7、形態鑒定特征雄蟲：精巢不轉折，精細胞大（通常直徑3μm～5μm），交合傘不伸到尾端，延伸至尾長的四分之一至四分之三處。交合刺窄細，基部寬大，其上具特殊的突起。兩性尾形相似，呈長圓錐形到近柱形，偶爾絲狀，多數Ｃ‘（尾長÷肛門或泄殖腔處體寬）為４～７。寄主不形成蟲癭。

幼蟲：在總的形態方面與成蟲相似。食道按比例長于成蟲的食道。7.2

水稻莖線蟲形態鑒定特征7.2.1測記值雌蟲：I＝800～l200微米；a＝50～62；b=6—9；c＝18~24；c＝5．2～5．4；V＝78～80；st=l0-1l微米。雄蟲：L＝700-l180微米；a＝40-55；b=6～8；c＝19~26；st=10微米；sp＝16—21微米。

7、形態鑒定特征7、形態鑒定特征7.2.2形態描述

雌蟲：體細長，較直，側帶區有刻線4條，外側較明顯。唇區低，前端平圓，不縊縮。口針強壯，9-11μm長，針錐較細，稍短于針干，基部球小而清晰，前緣向后頃斜，其寬度約2微米，中食道卵圓形，肌肉發達，食道狹部向后漸漸膨大，連接食道后部。食道腺近末端分小叉，略蓋腸前端。生殖系統為前生卵巢。單生殖腺，向前直伸，卵母細胞單列，受精囊長袋狀；后子宮囊長度為肛陰距的50％～67％；陰門斜裂，其長度為陰門處體寬的1／2。尾呈均勻收細的圓錐形，約為肛徑的5倍長。尾近末端急收成尖銳的指狀，似一個尾尖突。

7、形態鑒定特征雄蟲體形除生殖系統和尾部形態外與雌蟲相似，交合傘端生，交合刺墊刃型，16—21μm長，伸至尾末端，引帶6-9μm長。幼蟲與成蟲相似,只是食道要比成蟲長。8、結果判定符合第7條形態特征鑒定的可鑒定為水稻莖線蟲八、防治1、農業防治

毀掉病株是疫區最有效的治理措施，病區也可以在干旱季節犁田，將稻根翻到表面曝曬，大量的稻根用人工清理出田外燒掉，這樣作可以減少下一季的侵染基數。輪作或休閑也是有效的防除措施。利用稻莖線蟲只寄生稻屬作物的特點，輪種其他非寄主植物1年或讓病田休閑1年，就可以餓死田間土壤中的病原線蟲。如水稻與芥菜輪作可明顯減少莖線蟲量；黃麻栽種在受過線蟲感染的田塊中也能減輕Ufra癥狀。播種或移栽深水稻要比平常