2024屆天津市濱海新區大港第八中學高三下學期聯考生物試題注意事項1．考生要認真填寫考場號和座位序號。2．試題所有答案必須填涂或書寫在答題卡上，在試卷上作答無效。第一部分必須用2B鉛筆作答；第二部分必須用黑色字跡的簽字筆作答。3．考試結束后，考生須將試卷和答題卡放在桌面上，待監考員收回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．如圖為人類的性染色體組成。不考慮突變和基因重組，下列有關敘述不正確的是（）A．紅綠色盲基因位于Ⅱ一2片段，男性發病率高，且女患者的父親和兒子均為患者B．抗維生素D佝僂病基因位于Ⅱ一2片段，女性發病率高，但部分女患者癥狀較輕C．正常情況下，X、Y染色體在減數第一次分裂后期分離D．男性某一細胞中不可能出現2條X染色體2．如圖為生態系統能量流動示意圖，下列敘述錯誤的是（）A．流經該生態系統的總能量是圖中的N2B．N3是生產者用于生長和繁殖的能量C．蜣螂所利用的能量N6屬于初級消費者同化的能量D．第一和第二營養級之間的能量傳遞效率為N5/N2×100%3．下列有關細胞中部分化合物的敘述，錯誤的是（）A．高等動物細胞主要的遺傳物質是DNAB．纖維素是構成植物細胞壁的主要成分C．磷脂是構成細胞中生物膜的重要成分D．蛋白質是人體生命活動的主要承擔者4．向魚鰾內注入適量質量濃度為1．3g/mL的蔗糖溶液，扎緊口并稱重，然后將其浸入質量濃度為1．15g/mL的蔗糖溶液中，每隔11分鐘稱重一次。l小時內，魚鰾重量逐漸增加；l小時后，魚鰾重量不再增加。下列說法錯誤的是（）A．魚鰾重量增加是因為外界水分子的進入B．魚鰾重量不再增加時，水分子的進出處于動態平衡狀態C．魚鰾重量不再增加時，魚鰾內外蔗糖溶液的濃度可能相等D．若實驗開始時，在魚鰾外的蔗糖溶液中加入蔗糖酶，魚鰾重量增加的速率加快5．果蠅的生物鐘基因位于X染色體上，有節律（XB）對無節律（Xb）為顯性；體色基因位于常染色體上，灰身（A）對黑身（a）為顯性。在基因型為AaXBY的雄蠅減數分裂過程中，若出現一個AAXBXb類型的變異細胞，下列分析錯誤的是（）A．該細胞屬于次級精母細胞B．該細胞的核DNA數是體細胞的一半C．該生物完成一次有絲分裂與一次減數分裂過程中染色體的復制次數相同D．形成該細胞過程中，有節律基因發生了突變，且A與a隨同源染色體的分開而分離6．某種植物的花色同時受A、a與B、b兩對基因控制，基因型為A_bb的植株開藍花，基因型為aaB的植株開黃花。將藍花植株（♀）與黃花植株（♂）雜交，取F1紅花植株白交得F2。F2的表現型及其比例為紅花：黃花：藍花：白花=7：3：1：1．則下列分析中正確的是（）A．F2中基因型為Aa的雜合子致死B．F1產生的配子中某種雌雄配子同時致死C．親本藍花植株和F1藍花植株的基因型一定為AAbbD．F1產生的配子中Ab雌配子或Ab雄配子致死7．某種家雞的羽毛顏色由兩對等位基因A、a和B、b控制。當基因B存在時，基因A的作用不能顯示出來。現有兩組該品種的白羽家雞雜交，F1都為白羽，讓F1家雞雌雄個體自由交配，F2中白羽：有色羽＝13：3。下列敘述錯誤的是（）A．兩對基因A、a和B、b的遺傳遵循自由組合定律B．白羽雞的基因型共有7種C．F1白羽雞測交后代的表現型及比例為白羽：有色羽＝1：1D．F2白羽雞中能穩定遺傳的個體占3/138．（10分）蜜蜂的蜂王和工蜂是二倍體，雄蜂是單倍體。下面是相關細胞分裂后期的模式圖（顯示部分染色體），可以存在于蜂王和雄蜂體內的圖像是（）A． B．C． D．二、非選擇題9．（10分）應激是指各種緊張性刺激物(應激原）引起的個體非特異性反應。應激時人體代謝明顯加快，如大面積燒傷病人每日能量需求是正常人的1．5倍。圖表示人體在應激時部分物質代謝變化調節過程，圖中“↑”表示過程加強，“↓”表示過程減弱。請回答：（1）圖示應激反應的調節方式是__。應激過程中，激素A的含量將會____。激素B與糖皮質激素在血糖調節中的關系是____。（1）交感神經細胞與腎上腺髓質細胞之間交流的信號分子是___，這種分子必須與腎上腺髓質細胞膜表面的___結合，才能發揮調節作用。（3）人體全身應激反應一般分為警覺期、抵抗期和衰竭期三個階段。警覺期是人體防御機制的快速動員期，這一時期以途徑④—⑤（交感一腎上腺髓質系統）為主，主要原因是_________。警覺期使機體處于“應戰狀態”，但持續時間____。（4）大面積燒傷時，應激反應可持續數周，臨床上會發現病人出現創傷性糖尿病。試根據圖示過程分析，創傷性糖尿病產生的主要機理：___。10．（14分）中東呼吸綜合征冠狀病毒可引起人體嚴重的呼吸系統癥狀，甚至造成死亡。科研人員為研制針對該病毒的特異性治療藥物進行了系列研究。（1）該病毒主要通過其表面囊膜的S蛋白與宿主細胞膜受體D結合來感染宿主細胞。如圖1所示，S1與受體D結合后導致S1和S2分離，S2的頂端插入到宿主細胞膜上，通過S2蛋白的_________改變從而將兩個膜拉近，發生膜融合過程。病毒進入宿主細胞后，利用宿主細胞內的_________等為原料合成大分子物質組裝成新的病毒，擴散并侵染健康細胞。（2）R是該病毒的S1上與受體D結合的部分。科研人員用從康復者體內篩選出的三種抗體甲、乙、丙進行實驗，研究它們與R的特異性結合能力。另用抗體丁作為對照抗體。實驗流程如圖2所示，結果如圖3。在實驗過程中將______作為抗原固定，分別將______加入反應體系，然后加入酶標記的抗體（能與待檢抗體結合，攜帶的酶可使底物反應顯色），其后加入底物顯色，檢測相應的吸光值（顏色越深吸光值越高）。該實驗中抗體丁可以作為對照抗體的理由是______________________________。實驗結果表明______________________________。（3）研究發現該病毒在感染宿主細胞后，有一種更快速的傳播方式。當被感染細胞表面的病毒囊膜蛋白與健康細胞表面的受體D結合后，膜發生融合實現病毒的轉移。為了探究三種抗體能否抑制病毒在被感染細胞和健康細胞之間的傳播，科研人員展開研究。請在下表中的空白處填寫相應實驗處理，完成實驗方案。（注：鼠受體D與人受體D存在序列和結構上的差異）組別實驗處理實驗結果實驗組抗體甲表達病毒囊膜蛋白的細胞①____________無細胞融合抗體乙部分細胞融合抗體丙部分細胞融合對照組1不加抗體②____________表達鼠受體D的細胞無細胞融合對照組2抗體丁表達病毒囊膜蛋白的細胞③____________部分細胞融合對照組3④_______表達病毒囊膜蛋白的細胞表達人受體D的細胞部分細胞融合實驗結果說明，三種抗體中，甲可以阻斷病毒通過細胞融合的途徑進行傳播，乙和丙效果不明顯。（4）科研人員進一步利用多種方法深入研究了三種抗體與R結合的區域，實驗結果表明，甲與乙結合R上不同的區域，甲與丙結合R的區域部分重疊。綜合以上系列研究結果，研究人員推測將____________兩種抗體聯合使用會具有更強的抗病毒能力。如果希望用聯合抗體治療中東呼吸綜合征患者，還需要進行哪些方面的研究？__________（寫出一個方面即可）11．（14分）突尼斯軟籽石榴是一種熱門水果，深受大家喜愛，但其抗寒能力差，這成為限制該種石榴栽培的重要因素。科學家們利用基因工程對其進行定向改造，以得到抗寒性強的優良品種。下圖表示構建基因表達載體的方法，圖中標注的是限制酶的酶切位點，請回答下列問題：（1）在切割目的基因時選擇的兩種限制酶最好為____________________，選擇兩種限制酶的優勢是可避免________________。（2）可通過________技術對獲得的抗寒基因進行體外擴增，該過程使DNA解旋的方法與細胞內復制時的差異是________________，體外擴增時使用的酶具有的顯著特點是__________________。（3）將重組質粒導入經________（過程）培養成的軟籽石榴的愈傷組織中常用________法。12．茶樹葉片的顏色與基因型之間的對應關系如下表。請回答下列問題。表現型黃綠葉濃綠葉黃葉淡綠葉基因型A_B_（A和B同時存在）A_bb（A存在，B不存在）aaB_（A不存在，B存在）aabb（A、B均不存在）（1）已知決定茶樹葉片顏色的兩對等位基因遵循基因的自由組合定律，基因的自由組合定律適用于_______________生物，其實質是__________________________________________。（2）黃綠葉茶樹的基因型有______________種，其中基因型為_______________的植株與淡綠色植株雜交，F1將出現4種表現型，比例為_______________，這種雜交方式在遺傳學上稱為______________。（3）現以濃綠葉茶樹與黃葉茶樹為親本進行雜交，若親本的基因型為______________，只有2種表現型，比例為_____________________________。（4）茶樹的葉片形狀受一對等位基因控制，有圓形（RR）、橢圓（Rr）和長形（rr）三類。茶樹的葉形、葉色等性狀會影響茶葉的制作與品質。能否利用茶樹甲（圓形、濃綠葉）、乙（長形、黃葉）兩個雜合子為親本，培育出橢圓形、淡綠葉的茶樹?______________。若能，請寫出親本的基因型______________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、D【解題分析】

伴X染色體隱性遺傳病的發病特點：①男患者多于女患者；②男患者將致病基因通過女兒傳給他的外孫（交叉遺傳）。③女患者的父親和兒子均為患者。伴X染色體顯性遺傳病的發病特點：①女患者多于男患者；②男患者的母親和女兒均為患者。【題目詳解】A、X、Y為同源染色體，Ⅱ–1、Ⅱ–2為X、Y染色體的非同源區段，I為X、Y的同源區段。紅綠色盲是伴X隱性遺傳病，紅綠色盲基因（Xb）位于Ⅱ–2片段，女性基因型為：XBXB、XBXb、XBXB，男性基因型為XBY、XbY，男性發病率高于女性，女患者（XbXb）父親和兒子的基因型都是XbY，均為患者，A正確；B、抗維生素D佝僂病是伴X顯性遺傳病，抗維生素D佝僂病基因位于Ⅱ–2片段，女性基因型為：XDXD、XDXd、XdXd，男性基因型為XDY、XdY，女性發病率高于男性，但部分女患者（XDXd）癥狀較輕，B正確；C、減數第一次分裂后期同源染色體（如X和Y染色體）分離，C正確；D、男性某一細胞正常情況下有1條X染色體。在有絲分裂后期著絲點斷裂會出現2條，在減數分裂過程中可能出現0、1或2條，D錯誤。故選D。【題目點撥】本題考查伴性遺傳的遺傳規律和人類遺傳病的類型，意在考查考生對伴性遺傳規律的理解及識記人類遺傳病的類型特點。2、C【解題分析】

題圖分析：N2、N5分別表示生產者光合作用固定的能量、初級消費者同化的能量，能量傳遞效率為該營養級的同化量/上一營養級的同化量×100%，N3為生產者用于生長發育繁殖的能量，N4為初級消費者的攝入量，據此答題。【題目詳解】A、流經生態系統的總能量為生產者所固定的太陽能，即為圖中的N2，A正確；B、同化量等于呼吸量+生長、發育和繁殖量，因此N3是生產者用于生長、發育和繁殖的能量，B正確；C、蜣螂所利用的能量N6屬于生產者同化的能量，C錯誤；D、據分析可知，第一和第二營養級之間的能量傳遞效率為N5/N2×100%，D正確。故選C。3、A【解題分析】

細胞內的有機物的種類、元素組成及功能如下表：糖類單糖、二糖、多糖C、H、O①供能（淀粉、糖原、葡萄糖等）②組成核酸（核糖、脫氧核糖）③細胞識別（糖蛋白）④組成細胞壁（纖維素）脂質脂肪C、H、O①供能（貯備能源）②保護和保溫磷脂（類脂）C、H、O、N、P組成生物膜固醇C、H、O調節生殖和代謝（性激素、Vit.D）蛋白質單純蛋白（如胰島素）C、H、O、N、S(Fe、Cu、P、Mo…)①組成細胞和生物體②調節代謝（激素）⑤催化化學反應（酶）④運輸、免疫、識別等結合蛋白（如糖蛋白）核酸DNAC、H、O、N、P①貯存和傳遞遺傳信息②控制生物性狀③催化化學反應（RNA類酶）RNA【題目詳解】A、高等動物細胞的遺傳物質只有DNA，沒有主要和次要的區分，A錯誤；B、纖維素是構成植物細胞壁的主要成分，B正確；C、磷脂是構成細胞中生物膜的重要成分，C正確；D、蛋白質是人體生命活動的主要承擔者，D正確。故選A。【題目點撥】此題考查細胞中幾種重要化合物的作用，側重考查理解能力。4、D【解題分析】

根據題意分析可知：1.3g/mL蔗糖溶液濃度高于1.15g/mL蔗糖溶液，故1.15g/mL蔗糖溶液水分會流向1.3g/mL蔗糖溶液多，導致魚鰾內蔗糖溶液濃度越來越低，而魚鰾外蔗糖溶液濃度越來越高，當二者濃度達到相等時，水分出入達到平衡，二者濃度不再變化。【題目詳解】魚鰾內盛有1.3g/mL的蔗糖溶液，而魚鰾外是1.15g/mL的蔗糖溶液，依據滲透作用原理，水分子總的滲透方向表現為低濃度運輸到高濃度，則從鰾外向鰾內，從而導致鰾內濃度降低，重量增加，一段時間后，達到平衡。所以在進行實驗的1小時之內，魚鰾重量增加是因為外界水分進入魚鰾內；在進行實驗的1小時后，魚鰾重量不再增加是因為進出魚鰾的水分子處于相對平衡狀態。若實驗開始時，在魚鰾外的蔗糖溶液中加入蔗糖酶，則蔗糖被分解為葡萄糖和果糖，導致魚鰾外濃度比原來升高，那么魚鰾內外濃度差減小，因此魚鰾重量增加的速率減慢。綜上所述A、B、C正確，D錯誤。故選D。5、B【解題分析】

根據題干信息分析，題中兩對等位基因位于兩對同源染色體上，遵循基因的自由組合定律；已知在基因型為AaXBY的雄蠅減數分裂過程中，若出現一個AAXBXb類型的變異細胞，該細胞中沒有a基因和Y染色體，說明同源染色體已經正常分離，其含有2個A基因和B、b基因，說明該細胞應該處于減數第二次分裂過程中，為次級精母細胞，且發生了基因突變（B突變成了b）。【題目詳解】A、根據以上分析已知，該細胞為次級精母細胞，A正確；B、該細胞處于減數第二次分裂過程中，核DNA的含量與體細胞相等，B錯誤；C、根據有絲分裂和減數分裂的過程分析可知，該生物完成一次有絲分裂與一次減數分裂過程中，染色體都進行一次復制，C正確；D、根據以上分析可知，形成該細胞過程中，有節律基因發生了突變（B突變成了b），且A與a隨同源染色體的分開而分離，D正確。故選B。6、D【解題分析】

基因分離定律和自由組合定律的實質：進行有性生殖的生物在進行減數分裂產生配子的過程中，位于同源染色體上的等位基因隨同源染色體分離而分離，分別進入不同的配子中，隨配子獨立遺傳給后代，同時位于非同源染色體上的非等位基因進行自由組合，按照自由組合定律，基因型為AaBb個體產生的配子類型及比例是AB：Ab：aB：ab=1：1：1：1，自交后代A_B_：A_bb：aaB_：aabb=9：3：3：1。【題目詳解】A、由于子二代A_B_：aaB_：A_bb：aabb=7：3：1：1，與9：3：3：1相比，A_B_少了2，A_bb少了2，如果是Aa__的雜合子致死，則A_B_致死的個體應該是2AaBB、4AaBb，A_B_應該少6，A錯誤；B、如果子一代產生的某種基因型的雌配子、雄配子都致死，則后代的雜交組合是9種，而實際上子二代的雜交組合是12種，B錯誤；CD、由于子二代A_B_：aaB_：A_bb：aabb=7：3：1：1，與9：3：3：1相比，A_B_少了2，A_bb少了2，最可能的原因是Ab的雄配子或雌配子致死，因此不存在AAbb的純合體，親本藍花植株和F2藍花植株的基因型一定為Aabb，C錯誤，D正確。故選D。7、C【解題分析】

基因分離定律和自由組合定律的實質：進行有性生殖的生物在進行減數分裂產生配子的過程中，位于同源染色體上的等位基因隨同源染色體分離而分離，分別進入不同的配子中，隨配子獨立遺傳給后代，同時位于非同源染色體上的非等位基因進行自由組合；由題干信息可知，F1家雞雌雄個體自由交配，F2中出現了白羽和有色羽雞兩種類型，其比例為13∶3，是9∶3∶3∶1的變式，因此2對等位基因遵循自由組合定律，且子一代基因型是AaBb，A_B_表現為白羽，由于B存在時基因A的作用不能顯示出來，因此A_bb為有色羽，aaB_、aabb、A_B_均為白羽。【題目詳解】A、根據上述分析可知，兩對基因A、a和B、b的遺傳遵循自由組合定律，A正確；B、白羽雞的基因型是A_B_、aaB_、aabb，共有4+2+1=7種基因型，B正確；C、F1白羽雞（AaBb）測交后代的基因型和比例為AaBb∶aaBb∶Aabb∶aabb=1∶1∶1∶1，表現型及比例為白羽∶有色羽＝3∶1，C錯誤；D、F2白羽雞的基因型是AABB、AABb、AaBB、AaBb、aaBB、aaBb、aabb，其中AABB、aaBB、aabb能穩定遺傳，能穩定遺傳的占白羽雞中的比例為（1/16+1/16+1/16）÷13/16=3/13，D正確。故選C。【題目點撥】本題旨在考查學生理解基因分離定律和自由組合定律的實質，學會根據子代的表現型及比例推出親本基因型和所遵循的遺傳規律，應用遺傳規律進行相關概率計算。8、B【解題分析】

雄蜂是由蜂王產生的卵細胞發育而成，其體細胞中含有一個染色體組。【題目詳解】A項為二倍體生物減數第一次分裂后期的圖像，不能存在于雄蜂體內，A錯誤；B項可能是二倍體生物減數第二次分裂后期的圖像,也可能是只含一個染色體組的單倍體生物有絲分裂后期的圖像，B正確；C項為雄蜂減數第一次分裂后期的細胞圖像，不會發生在雌蜂細胞中。C錯誤；D選項為二倍體生物有絲分裂后期的圖像，不能存在于雄蜂體內，D錯誤。

故選B。【題目點撥】本題以“蜜蜂的蜂王為二倍體,雄蜂為單倍體”作為命題切入點，以圖形為信息載體，考查考生對減數分裂和有絲分裂過程的理解。二、非選擇題9、神經調節和體液調節增加拮抗作用神經遞質特異受體這一調節途徑中有神經參與，對外界刺激作出反應速度快短在應激狀態下，病人體內胰島素分泌減少，胰高血糖素、腎上腺素和糖皮質激素分泌增加，導致病人出現高血糖癥狀，形成糖尿【解題分析】

據圖分析可知：機體受應激源刺激后，下丘腦分泌的促腎上腺皮質激素釋放激素含量會升高，最終使蛋白質分解加快，脂肪轉為糖的速率加快；同時腦干的交感神經興奮，作用于腎上腺髓質，進而引發機體的一系列反應，此過程中既有神經調節，也有體液調節。【題目詳解】（1）據圖分析可知，圖示既有下丘腦和腦干參與的神經調節，也有多種激素參與的調節，故為神經調節和體液調節；據圖分析可知，激素A是由胰島A細胞分泌的胰高血糖素，根據作用結果為肝糖原分解加快，可判斷胰高血糖素的含量為增加；糖皮質激素的作用是促進非糖物質轉化為糖，激素B（胰島素）的作用是促進糖轉化為非糖物質，故兩者血糖調節中的作用是拮抗。（1）交感神經細胞與腎上腺髓質細胞（靶細胞）通過信號分子神經遞質進行交流；神經遞質必須與靶細胞（腎上腺髓質）細胞膜表面的特異受體結合，才能發揮調節作用。（3）警覺期以途徑④—⑤神經調節（交感一腎上腺髓質系統）為主，是因為與體液調節相比，這一調節途徑中有神經參與，對外界刺激作出反應速度快，但該調節方式持續時間短。（4）據圖分析可知:在應激狀態下，病人體內胰島素分泌減少，胰高血糖素、腎上腺素和糖皮質激素分泌增加，導致病人出現高血糖癥狀，形成糖尿,故若應激反應可持續數周，臨床病人會出現創傷性糖尿病。【題目點撥】本題結合題圖考查神經調節與體液調節的關系，要求考生能明確各種激素的作用，熟悉體液調節和神經調節的聯系與區別，進而結合題圖作答。10、空間結構核苷酸、氨基酸R不同濃度的甲、乙、丙和丁抗體丁不與R結合不同濃度下甲、乙和丙均與R特異性結合，甲和乙的結合能力強于丙表達人D受體的細胞表達病毒囊膜蛋白的細胞表達人D受體的細胞不加抗體甲與乙制備甲與乙聯合抗體的方法；比較單一抗體與甲乙聯合抗體的抗MERS-CoV效果；對感染MERS-CoV的動物使用甲乙聯合抗體治療，檢測治療效果；評估甲乙聯合抗體對動物體主要組織器官和正常細胞是否具有副作用【解題分析】

病毒不具備細胞結構，僅含有核酸（DNA或RNA）和蛋白質外殼。病毒侵入機體后，外殼破裂，核酸釋放出來，利用宿主的原材料合成自身的蛋白質外殼和核酸，然后組裝成新一代病毒并釋放。【題目詳解】（1）由圖1看出，S2與S1分離，其頂端插入到宿主細胞膜上后，S2的形態結構發生改變（即空間結構改變），從而將兩個膜拉近，便于膜的融合。病毒進入宿主細胞后，利用宿主細胞內的核苷酸、氨基酸等為原料合成核酸、蛋白質等大分子，進一步組裝成新的病毒。（2）由題干分析，該實驗的目的是研究甲、乙、丙三種抗體與R的特異性結合能力，故將R作為抗原固定，再分別加入不同濃度的甲、乙、丙和丁抗體（丁抗體不與R結合，作為對照），然后再加入酶標記的抗體，以便進行檢測。分析圖3結果可知，與丁抗體和空白組相比，不同濃度下甲、乙、丙抗體均與R特異性結合，且甲、乙抗體與R的結合能力強于丙抗體。（3）結合題干和圖表分析，該實驗的目的是探究三種抗體能否抑制病毒在被感染細胞和健康細胞之間的傳播，自變量為抗體種類和受體D種類，因變量為細胞融合情況。故②作為無關變量應與其他組一致，即表達病毒囊膜蛋白的細胞；實驗組與對照組2和3相比，自變量為抗體種類不同，實驗組3為空白對照，故④為不加抗體；①、③為無關變量應與實驗組3一致，即表達人D受體的細胞。（4）由題干信息可知，甲與乙結合R上不同的區域，甲與丙結合R的區域部分重疊，故選用甲、乙兩種抗體聯合使用，抗病毒能力更強。若要使用聯合抗體，需進一步研究制備甲與乙聯合抗體的方法；比較單一抗體與甲乙聯合抗體的抗MERS-CoV效果；對感染MERS-CoV的動物使用甲乙聯合抗體治療，檢測治療效果；評估甲乙聯合抗體對動物體主要組織器官和正常細胞是否具有副作用等方面。【題目點撥】本題的關鍵是準確獲取題干信息，并結合所學的病毒相關知識及實驗思路解題。11、SmaI和PstI質粒自身成環和質粒與目的基因的反向連接PCR體外擴增目的基因利用加熱至90~95℃的高溫使DNA解旋，細胞內復制目的基因使用解旋酶使DNA解旋耐高溫（或具有熱穩定性）脫分化農桿菌轉化【解題分析】

分析題圖可知：HindIII的切割位點會破壞質粒的標記基因，AluI會破壞目的基因，故不能用上述兩種酶切割。【題目詳解】（1）根據圖中各種限制酶的切割位點，既可以獲得目的基因又不能破壞質粒上的標記基因，故選用SmaI和PstI；選擇兩種酶的優勢是可避免含有目的基因的外源DNA自身環化，可以防止質粒自身環化，也可避免質粒與目的基因的反向連接。（2）對獲得的抗寒基因進行體外擴增，可用PCR技術；在細胞內DNA復制需要解旋酶將雙鏈解