DB22-T 3455-2023 分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測 實時熒光PCR法_第1頁
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文檔簡介

65.020

05

DB22

22/T

3455—2023分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測實時熒光PCR

Shallot 吉林省市場監督管理廳

DB22/T

2023前言本文件按照

GB/T

XXXX分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒檢測 實時熒光

法

本文件描述了分蘗洋蔥中洋蔥黃矮病毒實時熒光

PCR

GB/T

6682-2008

RT-PCR

提取分蘗洋蔥總

Taq

PCR擴增反應（采用

SYBR

Green

GreenⅠ

是一種具有綠色激發波長的染料，能夠與雙鏈

DNA

SYBR

Green

DNA

結合后，

5.1

Trizol

實時熒光

PCR

試劑盒。

Pyrocarbonate）。

XXXX

DEPC

5.1.10

DEPC

處理的

DEPC

5.2

引物用水稀釋成

10

保存備用。

實時熒光

PCR

儀。

微量移液器：0.1

L～2.5

L，20

L。

冰箱：4

，-20

離心管：DEPC

mL。

L。

7.2

采集新鮮管狀葉為宜，也可采集地下鱗莖。裝入密封袋，置于冰盒中，4

保存不超過12

核苷酸引物dNTP

混合溶液(10

mmol/L)

2.5rnase

ddH5.55×PrimeScriptⅡ

rnase

U/μL)0.5primeScriptⅡ

U/μL)rnase

ddH4.5

XXXX

稱取

0.1

樣品液氮充分研磨（檢測鱗莖時，選擇中部層取樣。），轉入

0.1%

DEPC

（焦碳酸

15

min，4

15

0.5

mL

DEPC

處理的

75%乙醇，渦旋震蕩

12000

r/min

DEPC

行下步操作或-80

用核酸蛋白分析儀測定

RNA

濃度。

利用反轉錄試劑盒合成

cDNA

1、表

反應體系-1，65

℃溫浴

42

h。

見表3。2×Magic

SYBR

Mixtrue101×

0.60.3

μM

0.60.3

μM10

ng200

ng

XXXX

min，變性95

30

根據

Ct

值判定檢測結果，在陽性對照、陰性對照和空白對照檢測結果與預期一致的前提下：a)

b) 檢測樣品的

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