ICSFORMTEXTFORMTEXT點擊此處添加中國原則文獻分類號FORMTEXTXX/TFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT基質效應的評定FORMTEXTEvaluationofMatrixEffectsFORMTEXT點擊此處添加與國際原則一致性程度的標記FORMTEXT（本稿完畢日期：.6.10FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX公布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT中華人民共和國衛生部中國國標化管理委員會公布目次TOC\h\z\t"前言、引言標題,1,參考文獻、索引標題,1,章標題,1,參考文獻,1,附錄標記,1,一級條標題,3,附錄章標題,3,附錄一級條標題,4"前言 II引言 III1范疇 12規范性引用文獻 13術語和定義 14評定原理 25實驗辦法 25.1材料 25.2環節 35.3數據分析 35.4可能的變異 5附錄A（資料性附錄）數據分析-酶法肌酐測定試劑盒基質效應評定-直線回歸 6附錄B（資料性附錄）制備樣品基質效應評定 7前言本原則參考NCCLSEP14-A2基質效應的評定（EvaluationofMatrixEffects）本部分的附錄A、附錄B為資料性附錄。本部分由衛生部醫政司提出。本部分由衛生部原則委員會下屬臨床檢查原則分委員會歸口。本部分起草單位：衛生部臨床檢查中心。本部分重要起草人：張傳寶、閆穎、周偉燕、張天嬌、趙海艦、陳文祥本原則由衛生部委托衛生部臨檢中心負責解釋。本部分于200X年X月初次公布引言檢查成果的精確可比是檢查領域的工作目的，實現這一目的的有效手段是建立和確保不同辦法測定成果的計量學溯源性，即常規辦法與參考辦法相聯系的過程。檢測成果的精確可比有賴于辦法的特異性及其計量學溯源性，由自動分析儀、試劑盒及其校準品構成的常規分析系統或常規測定辦法中，在確保儀器性能的狀況下，試劑盒的分析原理及參數決定了分析系統或辦法的特異性，分析系統或辦法的特異性體現在其抗干擾能力和對特定樣本的基質效應。校準品是溯源鏈傳遞的重要工具，是確保常規分析系統對的度的重要載體，校準品的基質效應及其定值辦法是影響分析系統校準偏差的重要因素。校準品大多數為制備樣品，與新鮮臨床病人樣品存在一定的差別。同一校準品在不同分析系統間使用時，不能將其標定值用于其闡明書規定的使用范疇以外的系統，除非經實驗證明該校準品在這兩個系統上未體現出基質效應。室內質控物作為分析系統精密度控制的制備樣品，在常規分析系統中，其基質效應也是廣泛存在的，同一質控品在不同系統使用時，不能使用相似靶值，更不能將質控品當作校準品來對分析系統進行校準。在室間質評計劃中，最抱負分析物應在全部系統上都沒有基質效應。然而，室間質評物是存在基質效應的，且對室間質評造成了以下影響：首先，只能按照辦法學或者分析系統進行分組，采用組內的均值或中位數作為本組的靶值，其成果只能用于評定組內不同實驗室間成果的一致性，而不同組別之間的成果缺少可比性；另首先，參加室間質評實驗室的成果不能和參考辦法測定成果相比較以評定常規辦法的校準偏差，限制了參考辦法在室間質評中的作用。本原則是對臨床化學干擾評定實驗的補充。干擾評定實驗和基質效應評定實驗的目的相似：即擬定誤差來源，改善檢測辦法；兩者之間重要差別以下：基質效應評定重要關注制備樣品和臨床病人樣品的差別，而干擾實驗關注的是特定的物質和條件對臨床病人樣品測定成果的影響。為了評定干擾的影響，基質效應評定重要比較制備樣品和臨床病人樣品測定成果的統計學差別；而干擾實驗評定是通過在臨床病人樣品中加入已知干擾物質，來評論對測定成果的影響。基質效應評定實驗中，干擾因素存在與否的判斷的根據是臨床病人樣品測定成果在最佳直線/曲線周邊的分散程度；而干擾實驗則是通過重復測量一系列含有不同濃度已知干擾物質的樣品后計算偏差，擬定干擾的存在。本原則比較了制備樣品和臨床病人樣品的測定偏差，而干擾實驗的目的是為了定量評定偏差。基質效應的評定范疇本原則合用于體外診療產品生產商、臨床實驗室、室間質評和能力驗證提供機構及有關衛生行政部門。本原則是對制備樣品基質效應評定的方案，制備樣品涉及原則物質、校準物、室內質控物和室間質評/能力驗證物質。本原則有助于有關人員理解基質效應對實驗室質量評定的影響。例如，制備樣品在某種測定辦法上可能體現出基質效應，測定成果和預期成果不一致，從而將原本對的的成果判斷為錯誤。相反，拿些“可接受”的質評成果也并不能表明測定辦法是真的沒有問題。臨床實驗室在運用多個不同原理的測定辦法對不同類型的分析物進行定量測定時，無論有無參考辦法，都可使用該原則。該原則有助于實驗人員分辨來源于測定辦法本身或者制備樣品的問題，本原則對基質效應產出的具體機制未作描述。體外診療產品生產商和室間質量評定/能力驗證提供者應為有關衛生行政管理部門提供有關制備樣品基質效應的資料，以助于對的評定實驗室所使用的測定辦法的性能。規范性引用文獻下列文獻對于本文獻的應用是必不可少的。但凡注日期的引用文獻，僅所注日期的版本合用于本文獻。但凡不注日期的引用文獻，其最新版本（涉及全部的修改單）合用于本文獻。術語和定義基質：基質（某一物質系統的）matrix(ofamaterialsystem)： 一種物質系統中除被分析物之外的全部成分[EN12286]基質效應：獨立于被分析物質存在的樣品特性，對測量和可測量數值的影響【EN12287】。互通性：指在不同的（指定的）測量系統中，進行一套相似量（參考物）的測量時，某一物質在測量成果間產生的數字關系，當用此相似測量程序測量其它有關類型的物質（如：實際臨床樣品）時所獲得的盼望關系（數字關系）一致度的能力【EN12287】。對用于校準生物源性樣品的測量程序的參考物質來說，“其它有關類型的物質”涉及大量的由健康和有關疾病的個體所獲得的樣品。溯源性（traceability）：通過一條含有規定不擬定度的不間斷的比較鏈，使測量成果或測量原則的值能夠與規定的參考原則，普通是與國標或國際原則聯系起來的特性。[VIM：1993，定義6.10]評定原理臨床實驗中，能觀察到反映強度（如吸光度變化）除了與測物的實際活性或濃度有關外，普通還受測定時的反映體系的環境、條件（如溫度或基質）的影響。只有極少數的分析測量技術是完全特異的，因此兩個測量程序之間的關系極大程度依賴于所選擇的比對樣品的性質。臨床實驗室常規工作是面對臨床病人樣本的，故可用其作為比對的原則樣品。基質效應大小的評定方式以下：用兩種測定辦法同時對選定的一系列臨床病人樣品和制備樣品進行分析，運用兩種辦法測定的臨床樣品成果建立數學關系。而制備樣品的測定成果偏離這一數學關系的程度反映了其基質效應的大小。普通來說，制備樣品與臨床病人樣品的性質差別越大，數據的偏離程度將越大。制備樣品在兩種測定辦法間的成果的數學關系與臨床病人樣品在兩種測定辦法間成果的數學關系相比較，以評定基質效應。在回歸圖上，相似樣本間的測定成果偏離回歸線的離散現象代表待評定辦法的不精密和非特異性造成引入的不擬定度。（本原則采用的回歸技術假設X軸代表的比對辦法是沒有誤差的。）增加重復測定的次數可減少由于測定程序的不精密帶來的不擬定度分量；因此在這些分析中，造成離散的首要因素是已知或未知物質的內源性干擾（即基質效應），這一離散度用預測區間體現，表達待評定辦法測定臨床病人樣品時的非特異性大小。根據這一離散度，擬定在一定概率范疇內（如P=0.95），制備樣品能否代表臨床病人樣品，若制備樣品的成果超出預測區間，表達存在基質效應。另外，若一系列制備樣品基質性質相似，例如某一混合血清制備而成（如某公司同一批次不同濃度水平的質控物），則可將用兩種辦法測定這些制備樣品測定成果進行回歸，和最佳擬合直線和預測區間進行比較，這也是一種評定方式。當基質效應在預測區間內，而全部制備樣品的成果呈現一致關系時，這種評定辦法尤為有效。本實驗的結論僅限于被評定的特定制備樣品（如某一批次、添加分析物的來源、穩定劑等）。實驗辦法材料兩種辦法（比對辦法和評定辦法）所用的試劑、校準物和儀器。規定比對辦法對于制備樣品（校準物或質控樣品）沒有或只有輕微基質效應。比對辦法選擇次序以下： 一級參考測量程序（猶如位素稀釋質譜法測定膽固醇） 二級參考測量程序（如Abell-Kendall法測定膽固醇） 比對辦法 普通使用的常規辦法抱負的比對辦法應無基質效應。實際狀況下，也可選用普遍使用的常規測定程序作為比對辦法，此時，如果體現出基質效應，只能闡明兩種辦法測定臨床病人樣品的成果之間的關系和測定制備樣品成果之間的關系沒有可比性。 制備樣品（如參考物質、校準物、質控品） 二十個新鮮臨床病人樣本，其分析物濃度或活性濃度平均分布，并可包含制備樣品的濃度范疇。選擇代表性的就診者（如健康人和患者）樣本用于分析，避免使用含有已知干擾物的樣品。若冰凍過程對測定沒有影響，亦可選用冰凍病人樣本。環節準備待評定的制備樣品。將制備樣品隨機穿插在20個新鮮病人樣品中，用評定辦法在一批內對全部樣品進行測定；再重復分析兩次（最佳在一天內完畢全部批次，以消除可能的漂移帶來的影響），各批次實驗分別校準。對每個樣本得到3個測定成果，可根據CLSI/NCCLS文獻EP-9（使用患者樣品進行辦法比對和偏倚評定）推薦的辦法剔除離群點。同時，按照上述樣本排列次序，在一批或者一次實驗中使用比對辦法進行測定，然后重復兩次，每次測定分別校準，根據CLSI/NCCLS文獻EP-9進行離群點剔除。如果不能用比對辦法和評定辦法同時分析，需確保樣本儲存不會影響比對辦法的成果。將實驗樣本冰凍（最佳-70℃）保存。如果在數據分析過程中發現問題，可能需要用另一種比對辦法對樣品重新分析（如決定性辦法或參考測量辦法）。需要注意的是，數據分析將20個新鮮臨床病人樣品及制備樣品重復測定成果的均值（使用不同符號）進行作圖，y軸為評定辦法成果，x軸為比對辦法成果。根據評定辦法和比對辦法測定新鮮臨床病人樣品成果均值的分布方式，選擇適宜的回歸分析辦法： 線性回歸分析 評定辦法和比對辦法測定臨床病人樣品成果呈線性關系，無明顯彎曲。 在實驗濃度范疇內，回歸線的y軸的數據呈均勻分布。 檢查數據與否適合回歸分析（參考最新版CLSI/NCCLS文獻EP6-定量測定程序的線性評定：統計辦法；EP9-使用患者樣品進行辦法比對和偏倚評定）。 然后使用評定辦法測定臨床病人樣品的均值作為y值，比對辦法測定臨床病人樣品的均值作為x值，進行線性回歸分析（見附錄A） 多項式回歸分析待評定辦法和比對辦法測定新鮮臨床病人樣品的成果間的線性關系應按照CLSI/NCCLS文獻EP6（定量測定程序的線性評定：統計辦法）中的程序進行檢查，采用每個辦法重復檢測的均值，計算多項式回歸分析的最佳擬合模式。這樣產生的預測區間（見下）將最小，檢測明顯基質效應的能力最佳。舉例，若最佳擬合多項式為二次多項式，評定辦法成果的均值為y值，比對辦法成果的均值為x值（見附錄C，例2），則：y=a0+a1+a2x2(1)若二次多項式回歸方程中的系數a2與0有統計學差別（如t檢查成果p<0.05），則使用二次多項式。若a2與0無統計學差別（如p>0.05），則使用一次多項式方程。當20個臨床病人樣品的濃度范疇分布較窄時，多項回歸分析的最佳擬合曲線很可能是非線性，這種狀況下，建議增加樣本以得到范疇更寬的x值。若對于非線性辦法的數據，經回歸分析符合一次多項式（而非多次多項式），將難決定與否存在基質效應。但由于線性回歸分析普通較為方便，在基質效應較大時，使用線性回歸亦可滿足規定。另外，除非對比對辦法及參考測量程序的性質完全理解，否則僅憑本次實驗將無法擬定非線性是來源于評定辦法、比對辦法擬或兩者皆有。若對兩組事實上呈曲線有關的數據采用線性回歸模式，計算出來置信區間會變寬，將更難以擬定制備樣品和臨床病人樣品之間的真正偏差（基質效應）。若臨床病人樣品測定成果分布近似等比數列（如24.,40,80,160），而非等差數列(如20,30,40,50,60,70)，可將兩種辦法測定成果進行對數轉換后再作圖。需注意的是，采用的是經對數轉換后的均值進行作圖和線性或二次多項式回歸分析，而不是均值本身。為了有效評定數據點的分散程度，數據點的變異及其轉化形式須保持一致。下列公式用以計算給定x值下（重復測量均值），新鮮臨床病人樣品y均值的雙側95%置信區間。式中：：根據回歸曲線，在Xi值時y的預測值；n：新鮮患者樣本數量；g：線性回歸時為2，二次回歸時為3；：回歸原則誤，計算公式為；公式？：x軸上第i個值（比對辦法均值）；：y軸上第i個值（評定辦法均值）；：比對辦法均值的整體均值。將每個制備樣品的平均值y與計算的95%置信區間上下限相比較。提需注意的是，若兩種辦法間特異性差別較大，則成果的有關性將較差（產生較大的置信區間），減少本原則評定方案的效能。另外，將x值對應的y值置信區間在回歸線兩邊標記出來。按照附錄C描述辦法，將制備樣品的點與圖表上的95%置信區間比較，若制備樣品的點落在置信區間之外則闡明存在基質效應（見附錄C，例1）。若制備樣品的點在置信區間內，則可能不存在基質效應（見附錄C，例2）。但是，若一批或一組制備樣品出現一種持續偏倚，且其中某些或者全部偏差在置信區間內，則不能排除基質效應。若這些制備樣品性質相似，如來自同一主樣品盤，使用5.4.2描述的程序進行評定。在任何濃度點的殘差的允許限和可接受限將根據各自的原則進行評定。注意CLIA公布的PT控制限（允許總誤差）乃基于質控物的單次測定，而本原則中推薦使用三次測定的均值。因此，不推薦使用PT控制限作為評定基質效應存在與否的原則。若評定的制備物是室內質控品，統計學上有明顯意義的基質效應可能不太影響在臨床檢查的使用。然而，若評定的制備樣品為校準物，同意大小