免疫血清的制備第二節抗血清的鑒定和保存一、抗血清的鑒定二、抗血清的保存第三節抗血清的純化一、特異性IgG抗體二、單價特異性抗血清第一節抗血清的制備一、免疫動物的選擇二、免疫程序三、動物采血法

概述

利用微生物及其代謝產物等特異性抗原作為免疫原，經反復多次注射同一動物體，這樣所生產的含有特異性抗體的血清，被稱為免疫血清或高度免疫血清，亦稱為抗血清。使用這種通過人工免疫法獲得的免疫血清，可治療或預防某些相應的疾病，并且具有很高的特異性。用作被動免疫，對相應傳染病進行治療或緊急預防，效果佳良，是緊急防疫和治療藥品中的一種特效制劑。免疫血清的概念

高度免疫血清之所以具有預防和治療急性傳染病的作用，是由于它含有特異性免疫球蛋白—抗體。抗病血清或抗毒素血清，具有很強的特異性，一種血清只對相應的一種病原微生物或毒素起作用。免疫血清的作用機理根據免疫血清作用的對象不同，可將其分為抗病血清和抗毒素兩類。近幾年來，卵黃抗體已成為免疫血清的重要替代品，而且越來越受到人們的重視。卵黃抗體可以在一定程度上克服血清抗體成本較高、生產周期較長的弱點，并且具有用同批動物連續生產的優點。目前生產較多的抗病血清有：抗豬瘟血清、抗炭疽血清、破傷風抗毒素，此外還有禽用的小鵝瘟血清、小鴨肝炎血清和法氏囊病血清。抗毒素包括破傷風抗毒素、肉毒抗毒素以及抗大腸桿菌腸毒素等。免疫血清的種類

目前，雖然免疫血清的生產量不大，但是抗病血清的特殊作用仍是不容忽視的。有些病的治療雖然可以使用抗生素類制劑，而要徹底控制和消滅傳染病，在特定情況下，抗病血清的作用是抗生素不能全部代替的。免疫血清用作緊急預防注射，通常是在已經發生傳染病或受到傳染病威脅的情況下使用，其優點是注射后立即產生免疫，疫苗是起不到這種作用的。但是這種免疫力維持時間較短，一般僅2-3周，因此，在注射血清后2-3周仍需再注射一次疫苗，才能獲得較長時間的抗傳染能力。在人工被動免疫中，以抗毒素血清的效果最佳，應用最廣，如破傷風抗毒素、肉毒抗毒素和葡萄球菌抗毒素等。抗毒素血清必須早期應用才能效果顯著，如果癥狀十分明顯之后，即使大量應用也效果極差。免疫血清的應用動物的選擇免疫原的生產制定免疫程序血液的采集與血清的提取測試、分裝、保存免疫純化檢驗免疫血清的基本制備過程第一節抗血清的制備

抗血清的制備是將制備好的免疫原按照一定的免疫程序接種給所選擇的動物，該動物在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內多個B細胞克隆被激活并產生針對某一抗原多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗體單克隆抗體多克隆抗體(polyclonalantibody,pcAb)：天然抗原刺激多種B淋巴細胞克隆產生的多種抗體的混合物

抗原來源與動物種屬的關系

種屬差異越遠，免疫原性越強

動物個體的選擇

適齡、健康、體重符合要求

抗原的性質按需要量選擇大小不同的動物。一、免疫動物的選擇

能作免疫接種用的動物主要是哺乳類和禽類如兔、綿羊、豚鼠、雞、山羊和馬。

免疫原的劑量

中間劑量范圍內，免疫原劑量增加可獲得高效價抗體

免疫間隔時間

第一次和第二次間隔10～20天，三次及以后間隔7～10天免疫途徑

皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結

二、免疫程序

二、免疫方法3.免疫方案①全量免疫法：弗氏佐劑抗原多次注射②微量免疫法：卡介苗7天弗氏佐劑1月抗原③混合免疫法：綜合皮下、淋巴結和靜脈免疫方法

1.免疫原的注射劑量

2.免疫途徑：免疫反應產生速度依次為靜脈＞腹腔＞肌肉＞皮下＞皮內＞淋巴結＞足掌頸動脈采血法：家兔、綿羊、山羊

心臟采血法：

家兔、豚鼠、大鼠、雞

靜脈采血法：

家兔、山羊、綿羊

三、動物采血法第二節抗血清的鑒定和保存抗體特異性的鑒定：雙向免疫擴散法抗體效價的鑒定：凝集試驗、雙向免疫擴散試驗、ELISA抗體純度的鑒定：SDS、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳抗體親合力的鑒定：平衡透析法、ELISA、RIA競爭結合試驗

一、抗血清的鑒定2℃～8℃保存：短期保存冰凍保存：保存5年真空干燥保存：保存5～10年二、抗血清的保存第三節抗血清的純化

抗原免疫動物制備的抗血清是成分復雜的混合物，除含有特異性抗體外，還存在與目的抗體不相關的成分。純化目的是除去這些不相關成分，防止抗血清中其他雜抗體干擾試驗結果。鹽析法：硫酸銨鹽析法、硫酸鈉鹽析法凝膠過濾法：常結合鹽析法離子交換層析法：DEAE纖維素、QAE-sephadex、QAE纖維素親和層析法：純化抗原或SPA交聯Sepharose4B制成親和層析柱

一、特異性IgG抗體親和層析法：雜抗原交聯Sepharose4B柱吸附劑方法：借助雙功能試劑用不含特異抗原的抗原混合液制成固相吸附劑二、單價特異性抗血清幾種重要免疫血清的制造

選擇5-12歲營養良好的馬匹，先用破傷風類毒進行基礎免疫，第一次注射精制破傷風類毒素油佐劑抗原1m1（或明礬沉降類毒素10ml），第二次注射2ml（或明礬沉降類毒素20ml），1-3個月后進行高度免疫。第一程高度免疫注射5-8次，第1-4次每次間隔2-3天；第5-8次每次間隔4-6天。抗原量每次遞增1-2m1。第五次開始試血至第八次。最后一次免疫后6-7天采血，隔1天再次采血，檢測效價。抗毒素效價每毫升不低于1200單位（AE）。第一程采血后，休息14-16天，進行第二程免疫，一般免疫3次，間隔5-7天，最后一次免疫后7-9天采血。破傷風血清，用胃酶消化，按次序加入15%、20%硫酸鉸進行沉淀，然后加入10%的明礬使明礬含量為1%，靜置使之沉淀。取沉淀后的上清加38%的硫酸銨沉淀，沉淀物經透析即成精制破傷風抗毒素。（一）破傷風抗毒素破傷風抗毒素高度免疫程序表程次日期抗原計量（ml）備注I11325384115-6試血156-7試血207-8試血258-10試血1（下月）采血3采血II18-20423-25528-306

目前國內使用的疫苗還不能完全有效地控制某些雞病（如雞傳染性法氏囊病，IBD）的流行，又無相應的高免血清，故在此種情況下，制備高免卵黃抗體液進行現地防治，常能收到較好效果。以IBD為例，其卵黃抗體液的制備過程是，選擇健康無病的產蛋雞群，以免疫原性良好的油佐劑滅活苗對開產前或已開產的蛋雞，每只肌肉注射2m1，7-10日后，重復注射一次，再過7-10日再注一次，油苗劑量適度遞增，第三次免疫后定期檢測卵黃抗體水平，待瓊擴效價達1:128時開始收集高免蛋，4

C貯存備用，瓊擴效價降到1:64時停止收蛋。高免蛋合格時間大約持續一個月。（三）卵黃抗體的制備與提純

將高免蛋用0.5%新潔爾滅溶液浸泡或清洗消毒，再用酒