WST491—2016梅毒非特異性抗體檢測操作指南簡介目錄1拼音2英文參考3標(biāo)準(zhǔn)基本信息4前言5標(biāo)準(zhǔn)正文5.11

范圍5.22

規(guī)范性引用文件5.33

術(shù)語和定義5.44

縮略語5.55

檢測原理

原理

方法5.2.1

VDRL5.2.2

RPR5.2.3

TRUST5.66

儀器耗材

微量移液器6.1.1

基本要求6.1.2

維護(hù)校準(zhǔn)

水平旋轉(zhuǎn)儀6.2.1

基本要求6.2.2

維護(hù)和校準(zhǔn)

樣品采集器

樣品容器

反應(yīng)板6.5.1

VDRL反應(yīng)板6.5.2

RPR/TRUST反應(yīng)板

專用抗原滴針5.77

樣品采集和保存

采集處理7.1.1

血清7.1.2

血漿7.1.3

CSF

樣品檢查

保存5.88

試驗(yàn)操作步驟

總述

RPR/TRUST定性試驗(yàn)RPR/TRUST半定量試驗(yàn)

VDRL試驗(yàn)8.4.1

抗原工作液配制8.4.2

VDRL定性試驗(yàn)一血清樣品8.4.3

VDRL半定量試驗(yàn)一血清樣品8.4.4

VDRL定性試驗(yàn)CSF樣品8.4.5

VDRL半定量試驗(yàn)CSF樣品5.99

結(jié)果描述和表示

定性試驗(yàn)

半定量試驗(yàn)

報(bào)告格式9.3.1

陰性反應(yīng)的檢測報(bào)告9.3.2

陽性反應(yīng)的檢測報(bào)告5.1010

質(zhì)量控制

基本要求

對照品5.10.310.3

質(zhì)控品5.10.410.4

反應(yīng)板5.10.510.5

專用滴針5.10.610.6

結(jié)果判定5.10.710.7

室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)5.1111

臨床意義

輔助診斷

療效監(jiān)測5.1212

局限性

概述

假陽性反應(yīng)5.12.312.3

假陰性反應(yīng)5.12.412.4

前帶現(xiàn)象5.12.512.5

血清固定5.12.612.6

血漿樣品6附錄6.1附錄A（規(guī)范性附錄）抗干擾性能初步評估6.2附錄B（規(guī)范性附錄）抗干擾性能評估——驗(yàn)證廠家聲明6.2.1B.1

基本要求6.2.2B.2

驗(yàn)證真空采集器的抗干擾能力6.2.3B.3

驗(yàn)證試劑的抗干擾能力6.2.4B.4

判斷標(biāo)準(zhǔn)7參考文獻(xiàn)8標(biāo)準(zhǔn)1拼音WS/T491—2016méidúfēitèyìxìngkàngtǐjiǎncècāozuòzhǐnán2英文參考Guidelineoftestmethodofnonspecificantibodiesfortreponemalpalliduminfection3標(biāo)準(zhǔn)基本信息ICS11.020C50中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T491—2016《梅毒非特異性抗體檢測操作指南》（Guidelineoftestmethodofnonspecificantibodiesfortreponemalpalliduminfection）由中華人民共和國衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會于2016年07月07日發(fā)布，自2016年12月15日起實(shí)施。4前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：上海市皮膚病醫(yī)院、上海市臨床檢驗(yàn)中心、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院、中國疾病預(yù)防控制中心性病控制中心、上海市疾病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：顧偉鳴、楊陽、王慶忠、郭瑋、尹躍平、吳磊、薛以樂。5標(biāo)準(zhǔn)正文梅毒非特異性抗體檢測操作指南5.11

范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梅毒非特異性抗體檢測的方法、試驗(yàn)操作步驟、結(jié)果描述與表示、質(zhì)量控制等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展梅毒非特異性抗體檢測的各類實(shí)驗(yàn)室。5.22

規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。JJG646—2006

移液器5.33

術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1血清固定

serofast少數(shù)患者經(jīng)過足量驅(qū)梅治療，梅毒非特異性抗體維持在相對恒定的低滴度狀態(tài)。注1：判斷血清固定，應(yīng)具備3個要素：流行病學(xué)病史和臨床表現(xiàn)排除復(fù)發(fā)、重新感染；連續(xù)2個隨訪周期（≥6月）血清抗體維持在±1滴度范圍之內(nèi)的低滴度水平（一般≤1：8），即變化趨勢方向不明；無實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)性和方法學(xué)誤差。注2：個別患者可終生存在血清固定現(xiàn)象。5.44

縮略語下列縮略語適用于本文件。CSF：腦脊液（cerebrospinalfluid）RCF：相對離心力（relativecentrifugalforce）RPR：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（rapidpla***areagincirclecardtest）TRUST:甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（toluidineredunheatedserumtest）VDRL：性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（venerealdiseaseresearchlaboratorytest）5.55

檢測原理

原理感染梅毒螺旋體后，被損害的宿主細(xì)胞及梅毒螺旋體本身釋放的類脂質(zhì)物質(zhì)，引起宿主產(chǎn)生IgA、IgM和IgG抗類脂質(zhì)抗體，這種抗體在體外與人工按一定比例配置的含心磷脂、卵磷脂和膽固醇的抗原溶液發(fā)生作用，產(chǎn)生絮狀凝集現(xiàn)象，不同反應(yīng)強(qiáng)度的凝集現(xiàn)象與抗體濃度成正相關(guān)，在一定程度上反映了梅毒感染的活動狀態(tài)。

方法5.2.1

VDRL商品化VDRL試劑盒包含VDRL抗原、VDRL緩沖液和說明書。VDRL抗原是含有心磷脂、卵磷脂和膽固醇的無水乙醇溶液。VDRL緩沖液含氯化鈉、40%甲醛水溶液（中性）溶液、磷酸氫二鈉（無水）和磷酸二氫鉀的磷酸鹽溶液，pH6.0±0.1。用緩沖液配置的VDRL抗原工作液與樣品中的抗體發(fā)生反應(yīng)，在顯微鏡下觀察到絮狀凝集。5.2.2

RPR商品化試劑盒包含抗原、陰陽性反應(yīng)對照、滴針、反應(yīng)板和說明書。是一種改良的VDRL試驗(yàn)，將VDRL抗原結(jié)合到作為示蹤物質(zhì)的炭顆粒上，當(dāng)抗原與樣品中的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，肉眼可以觀察到黑色的凝集顆粒。RPR抗原溶液中，添加氯化膽堿起到化學(xué)滅活效果，添加EDTA起到穩(wěn)定試劑性能的作用。5.2.3

TRUST商品化試劑盒包含抗原、陰陽性反應(yīng)對照、滴針、反應(yīng)板和說明書。TRUST的檢測原理同RPR，將VDRL抗原結(jié)合到作為示蹤物質(zhì)的甲苯胺紅染色粒子上，當(dāng)抗原與樣品中的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，肉眼可以觀察到紅色的凝集顆粒。TRUST抗原溶液中，含有氯化膽堿和EDTA的作用同RPR。5.66

儀器耗材

微量移液器6.1.1

基本要求

宜使用50μL固定式的微量移液器，吸取血清、血漿和CSF樣品以及半定量試驗(yàn)中的無菌生理鹽水。

宜使用微量移液器吸取和滴加抗原，滴加抗原量應(yīng)符合6.6.2和（或）6.6.3的技術(shù)要求。6.1.2

維護(hù)校準(zhǔn)

應(yīng)定期對微量移液器進(jìn)行保養(yǎng)和校準(zhǔn)，保存相應(yīng)記錄。

可由生產(chǎn)廠商對微量移液器進(jìn)行校準(zhǔn)，并出具報(bào)告。

可自行制定標(biāo)準(zhǔn)化文件對微量移液器進(jìn)行比對，最大允許誤差應(yīng)符合JJG646—2006。

水平旋轉(zhuǎn)儀6.2.1

基本要求

水平狀態(tài)轉(zhuǎn)速符合100r/min±2r/min、或180r/min±2r/min的要求。

時(shí)間控制精度符合±1s/min的要求。

數(shù)字化電子控制部件可預(yù)設(shè)RPR/TRUST和VDRL試驗(yàn)的固定反應(yīng)程序。

水平樣品托盤附有夾槽用于固定反應(yīng)板，避免在旋轉(zhuǎn)時(shí)反應(yīng)板滑出水平旋轉(zhuǎn)儀。

不應(yīng)使用旋鈕式調(diào)節(jié)裝置的水平旋轉(zhuǎn)儀。6.2.2

維護(hù)和校準(zhǔn)

應(yīng)定期對水平旋轉(zhuǎn)儀進(jìn)行保養(yǎng)和校準(zhǔn)，保存相應(yīng)記錄。

可由生產(chǎn)廠商對水平旋轉(zhuǎn)儀的轉(zhuǎn)速和時(shí)間控制進(jìn)行校準(zhǔn)，并出具報(bào)告。

可自行制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化文件，進(jìn)行日常維護(hù)。

樣品采集器6.3.1

采集血液樣品時(shí)，宜使用無添加劑或內(nèi)壁經(jīng)硅化處理的真空采集器。6.3.2

含有添加劑（促凝劑、抗凝劑）的真空采集器，使用前應(yīng)進(jìn)行抗干擾性能評估（見附錄A和附錄B）。

樣品容器6.4.1

宜采用密閉、無菌容器。6.4.2

CSF以及分離的血清和血漿樣品，可使用玻璃試管、塑料試管、離心管存放。6.4.3

新鮮全血樣品不應(yīng)直接注入普通塑料試管收集，否則將導(dǎo)致血塊收縮不良。

反應(yīng)板6.5.1

VDRL反應(yīng)板

宜使用專用VDRL反應(yīng)板進(jìn)行試驗(yàn)，替代反應(yīng)板應(yīng)符合和的反應(yīng)網(wǎng)圈直徑和防溢要求。

用于血清樣品檢測的反應(yīng)板上有直徑14mm的反應(yīng)圓圈，沿圓圈邊緣的膠漆或陶瓷防溢環(huán)可防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出，反應(yīng)孔中間透明，便于直接在顯微鏡下觀察。

用于CSF樣品檢測的反應(yīng)板上有直徑16mm的反應(yīng)圓圈，反應(yīng)孔中間為深度1.75mm凹面，防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出。6.5.2

RPR/TRUST反應(yīng)板

商品化試劑盒中的反應(yīng)板上有若干個直徑18mm的反應(yīng)圓圈。

沿反應(yīng)網(wǎng)圈內(nèi)側(cè)邊緣可呈凹面，防止旋轉(zhuǎn)時(shí)液體溢出。

專用抗原滴針6.6.1

專用抗原滴針的內(nèi)外壁宜經(jīng)硅涂層處理。6.6.2

用于血清和血漿樣品檢測時(shí)，專用抗原滴針每次滴出的抗原量是17μL，或符合59滴/mL±1滴/mL的技術(shù)要求。6.6.3

用于CSF樣品檢測時(shí)，專用抗原滴針每次滴出的抗原量是10μL，或符合100滴/mL±2滴/mL的技術(shù)要求。5.77

樣品采集和保存

采集處理7.1.1

血清血清樣品適用于RPR、TRUST、VDRL的定性試驗(yàn)和半定量試驗(yàn)。采集步驟如下：a）

用真空采集器（或一次性注射器），抽取3mL～5mL靜脈血液；b）

待血液凝固、血塊收縮后，RCF1200g～1700g離心15min;c）

吸出上層血清，置于合適的容器中保存?zhèn)溆谩?.1.2

血漿血漿樣品適用于RPR、TRUST的定性試驗(yàn)。僅限特殊情況下應(yīng)用（詳見12.6）。采集步驟如下：a）

用含抗凝劑的真空采集器，抽取3mL～5mL靜脈血液；b）

當(dāng)血液升至標(biāo)示刻度時(shí)，立刻輕輕顛倒混勻8次～10次，保證血液與抗凝劑充分混合，沒有血液凝塊；c）

靜置片刻后，RCF1200g～1700g離心15min;d）

吸出上層血漿，置于合適的容器中保存?zhèn)溆谩?.1.3

CSFCSF樣品適用于VDRL的試驗(yàn)。抽取CSF應(yīng)由具有專業(yè)資質(zhì)人員操作。采集步驟如下：a）

受檢者側(cè)臥于硬質(zhì)床，兩手抱膝緊貼腹部，頭向前胸屈曲，使軀干呈弓形，以髂后上棘連線與后正中線的交點(diǎn)為穿刺點(diǎn)，相當(dāng)于第3～4腰椎棘突間隙；b）

消毒處理后，用2%利多卡因白皮膚到椎間韌帶作局部麻醉；c）術(shù)者用左手固定穿刺皮膚，右手持穿刺針以垂直背部方向緩緩刺人，針尖稍斜向頭部，成人進(jìn)針深度約4cm～6cm，兒童約2cm～4cm；d）

當(dāng)針頭穿過韌帶與硬腦膜時(shí)，有阻力突然消失落空感；e）

此時(shí)可將針芯慢慢抽出，即可見CSF流出，分別收集3mL～5mL于無菌的容器中；f）

應(yīng)使用第1管CSF做微生物培養(yǎng)，第2管CSF做免疫學(xué)和生化檢測，第3管CSF做一般性狀和顯微鏡檢查。

樣品檢查原則上不合格樣品應(yīng)予以退回。如屬于特殊病例的標(biāo)本，在與臨床醫(yī)師和護(hù)師充分溝通的情況下，可對樣品進(jìn)行初步檢測，報(bào)告中應(yīng)注明“樣品可能污染，結(jié)果僅供參考”。以下樣品可干擾檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性：a）

嚴(yán)重溶血和脂血或被其他物品污染的血清、血漿樣品；b）

CSF樣品中含有肉眼可見的顆粒物質(zhì)；c）

CSF樣品肉眼觀察呈現(xiàn)粉紅色，提示有可能是采集過程中被血液污染（相當(dāng)于每1mLCSF含有≥3μL血液，或含有4×109/L～12×109/L紅細(xì)胞）。

保存7.3.1

血漿或血清樣品在4h內(nèi)檢測，可置室溫存放；5個連續(xù)T作日內(nèi)檢測，分離樣品可置2℃～8℃存放；否則應(yīng)置20℃或更低溫度保存。7.3.2

CSF樣品在4h內(nèi)檢測，可置室溫存放；5個連續(xù)工作日內(nèi)進(jìn)行檢測，樣品可置2℃～8℃保存，不可凍存。5.88

試驗(yàn)操作步驟

總述如使用商品化試劑盒，應(yīng)遵照試劑盒說明書結(jié)合所在實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況編寫標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），并經(jīng)性能驗(yàn)證有效。檢測時(shí)嚴(yán)格按SOP進(jìn)行操作。

RPR/TRUST定性試驗(yàn)RPR/TRUST定性試驗(yàn)用于篩查梅毒非特異性抗體。操作步驟如下：a）

吸取50μL待檢血清或血漿樣品、對照品、質(zhì)控品，每個樣品置于反應(yīng)板上的一個圓圈中；b）

將樣品涂布充滿整個反應(yīng)網(wǎng)圈；c）

滴加抗原前，試劑瓶沿水平方向旋轉(zhuǎn)，將抗原混勻，用滴針輕緩地反復(fù)吹吸數(shù)次，直至抗原充分懸浮，吸入滴管；d）

棄去針管中第1滴抗原，從第2滴開始向每個樣品圈中滴加1滴抗原；e）

滴加抗原后，立刻拿起反應(yīng)板，傾斜30°左右旋轉(zhuǎn)數(shù)次，讓抗原和樣品盡快混合；f）將卡片置于水平旋轉(zhuǎn)儀上，啟動儀器的反應(yīng)程序（100r/min，8min）；g）

當(dāng)儀器停止工作后，3min之內(nèi)用肉眼觀察結(jié)果；h）

按照9.1給出的定性試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷。注1：涂布樣品時(shí)移液頭與卡片的夾角接近30°，避免移液頭劃破反應(yīng)板表面防水涂層。注2：本案以專用抗原滴針為例（下同）。混勻抗原懸液時(shí)不可劇烈吹吸。保持垂直狀態(tài)、以自由落體方式滴加抗原。不可使用最后一滴抗原滴加到樣品中。針管中的抗原將用盡時(shí)，按8.2c）、8.2d）給出的描述重復(fù)操作。注3：定性試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)將樣品連續(xù)的倍比稀釋后，進(jìn)行半定量試驗(yàn)。RPR/TRUST半定量試驗(yàn)RPR/TRUST半定量試驗(yàn)用于判定梅毒非特異性抗體相對濃度、和（或）排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a）

吸取50μL生理鹽水，分別加至反應(yīng)板上數(shù)個連續(xù)的網(wǎng)圈中；b）

吸取50μL待檢血清樣品（或?qū)φ掌贰⒒蛸|(zhì)控品），與反應(yīng)板上第1個圓圈的生理鹽水充分混合，稀釋過程中，樣品與生理鹽水應(yīng)反復(fù)吹吸≥6次，避免氣泡，不可將樣品吹出反應(yīng)網(wǎng)圈；c）

吸取第1個圓圈中倍比稀釋的樣品50μL，與反應(yīng)板上第二個圓圈的生理鹽水充分混合；d）

重復(fù)吸取前一個網(wǎng)圈的50μL稀釋樣品與后一個網(wǎng)圈中生理鹽水混合的操作，至最后一個生理鹽水的圓圈充分混合后，吸出50μL的稀釋樣品，棄用；e）

從最高稀釋度開始往低稀釋度方向，逐一將稀釋樣品均勻地涂滿整個圈；f）

按8.2c）、8.2d）給的的描述和步驟滴加抗原；g）

按8.2e）和8.2f）給m的描述和步驟啟動反應(yīng)程序的操作；h）

當(dāng)儀器停止工作后，3min之內(nèi)用肉眼觀察最高稀釋度出現(xiàn)9.1.3或9.1.4反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷，以+或±表示檢測結(jié)果；i）

半定量試驗(yàn)應(yīng)做到最終稀釋度。

VDRL試驗(yàn)8.4.1

抗原工作液配制在試驗(yàn)前應(yīng)配制VDRL抗原的T作液。新鮮配制的抗原工作液檢測血清時(shí)8h內(nèi)有效，檢測CSF時(shí)2h內(nèi)有效。操作步驟如下：a）

吸取VDRL抗原稀釋液0.4mL，加入容量為30mL的帶蓋、底部直徑35mm的平底玻璃瓶，緩慢傾斜小瓶使VDRL抗原緩沖液覆蓋整個瓶底；b）

吸取VDRL抗原0.5mL，一邊平緩地沿水平方向轉(zhuǎn)動玻璃瓶（以3r/s的速度繞5cm的圓周直徑旋轉(zhuǎn)），一邊在位于玻璃瓶的上1/3處，在6s內(nèi)連續(xù)地將0.5mLVDRL抗原逐滴地流入到抗原緩沖液中；c）

最后一滴抗原滴出后，再持續(xù)轉(zhuǎn)動玻璃瓶10s；d）

吸取抗原稀釋液4.1mL，沿瓶壁加入（不可直接滴至抗原中）；e）蓋上瓶蓋，10s內(nèi)上下顛倒30次，抗原呈均勻懸浮后，即為抗原工作液；f）

每次試驗(yàn)時(shí)平緩地旋轉(zhuǎn)含抗原工作液的小瓶，讓抗原均勻懸浮。8.4.2

VDRL定性試驗(yàn)一血清樣品VDRL定性試驗(yàn)用于篩查血清中梅毒非特異性抗體。少數(shù)境外患者在初診時(shí)采用VDRL試驗(yàn)，入境后進(jìn)行療效隨訪時(shí)宜采用VDRL進(jìn)行血清樣品的試驗(yàn)。操作步驟如下：a）

血清樣品應(yīng)滅活處理（56℃，30min），滅活后的血清樣品超過4h檢測，應(yīng)在試驗(yàn)前重新快速滅活處理（56℃，10min）；b）

吸取50μL血清，在專用反應(yīng)板上均勻地涂滿整個反應(yīng)網(wǎng)圈；c）

按8.2c）、8.2d）給出的描述和步驟滴加抗原；d）

將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，啟動儀器的反應(yīng)程序（180r/min，4min）；e）

當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察凝集狀態(tài)（10倍目鏡，10倍物鏡）；f）按照9.1給出的定性試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷。8.4.3

VDRL半定量試驗(yàn)一血清樣品半定量試驗(yàn)用于判定血清中梅毒非特異性抗體相對濃度、和（或）排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a）

按8.4.2a）處理血清樣品；b）

按照8.3a）、8.3b）、8.3c）、8.3d）和8.3e）給出的步驟稀釋樣品；c）

按8.2c）、8.2d）給的的描述和步驟滴加抗原；d）

將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，啟動儀器的反應(yīng)程序（180r/min，4min）；e）

當(dāng)儀器停止工作后，5min之內(nèi)在顯微鏡下觀察最高稀釋度工現(xiàn)9.1.3或9.1.4反應(yīng)結(jié)果的描述作工判斷，以+或±表示檢測結(jié)果。8.4.4

VDRL定性試驗(yàn)CSF樣品VDRL定性試驗(yàn)用于篩查CSF中梅毒非特異性抗體。CSF樣品不需滅活處理。操作步驟如下：a）

吸取50μLCSF，注入專用反應(yīng)板（CSF）上的反應(yīng)圓圈；b）

按8.2c）、8.2d）給出的描述和步驟滴加抗原；c）

將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，啟動儀器的反應(yīng)程序（180r/min，8min）；d）

當(dāng)儀器停止工作后，5min內(nèi)在顯微鏡下觀察凝集狀態(tài)（10倍目鏡，10倍物鏡）；e）

按照9.1給出的定性試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷。8.4.5

VDRL半定量試驗(yàn)CSF樣品半定量試驗(yàn)用于判定CSF中梅毒非特異性抗體相對濃度、和／或排除前帶現(xiàn)象。操作步驟如下：a）

按8.3a）、8.3b）、8.3c）、8.3d）和8.3e）給出的步驟稀釋樣品；b）

按8.2c）、8.2d）給出的描述和步驟滴加抗原；c）

將反應(yīng)板固定在水平旋轉(zhuǎn)儀上，啟動儀器的反應(yīng)程序（180r/min，8min）；d）

當(dāng)儀器停止工作后，5min之內(nèi)在顯微鏡下觀察最高稀釋度出現(xiàn)9.1.3或9.1.4反應(yīng)結(jié)果的描述作出判斷，以+或±表示檢測結(jié)果。人體體表面積計(jì)算器BMI指數(shù)計(jì)算及評價(jià)女性安全期計(jì)算器預(yù)產(chǎn)期計(jì)算器孕期體重增長正常值孕期用藥安全性分級（FDA）五行八字成人血壓評價(jià)體溫水平評價(jià)糖尿病飲食建議臨床生化常用單位換算基礎(chǔ)代謝率計(jì)算補(bǔ)鈉計(jì)算器補(bǔ)鐵計(jì)算器處方常用拉丁文縮寫速查藥代動力學(xué)常用符號速查有效血漿滲透壓計(jì)算器乙醇攝入量計(jì)算器醫(yī)學(xué)百科，馬上計(jì)算！5.99

結(jié)果描述和表示

定性試驗(yàn)9.1.1

強(qiáng)陽性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）顯見團(tuán)塊狀的絮狀凝集物，懸液背景清亮。以“+++”或“++++”格式表示；9.1.2

陽性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）顯見比較小的絮狀凝集物，懸液背景較清亮。以“++”格式表示；9.1.3

弱陽性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）可辨細(xì)小散在的絮狀凝集物，懸液背景渾濁。以“+”格式表示；9.1.4

臨界陽性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）可辨較粗糙的抗原顆粒，懸液背景渾濁。以“±”格式表示；9.1.5

陰性反應(yīng)：RPR/TRUST肉眼（VDRL鏡下）抗原顆粒均勻分布。以“”或“陰性”格式表示。

半定量試驗(yàn)呈現(xiàn)弱陽性反應(yīng)或臨界陽性反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)，為半定量試驗(yàn)的滴度。以1:X+或1:X±格式表示（其中X為稀釋倍數(shù)值）。

報(bào)告格式9.3.1

陰性反應(yīng)的檢測報(bào)告應(yīng)有“試驗(yàn)方法”（如RPR或TRUST或VDRL）和“結(jié)果表示”兩部分組成。示例：VDRL（陰性）注：原始樣品定性試驗(yàn)符合9.1.5給出的細(xì)節(jié)。提示：陰性反應(yīng)。9.3.2

陽性反應(yīng)的檢測報(bào)告除了試驗(yàn)方法外，還應(yīng)有“定性”（原倍）和“半定量”（滴度）結(jié)果共3個部分組成。示例1：RPR++++，1：64+示例2：TRUST，1：256+注1：原始樣品定性試驗(yàn)符合9.1.1給出的細(xì)節(jié)；半定量試驗(yàn)中，經(jīng)過連續(xù)稀釋至1：128符合9.1.5給出的細(xì)節(jié)，而1：64符合9.1.3給出的細(xì)節(jié)。提示：定性試驗(yàn)強(qiáng)陽性反應(yīng)，無前帶現(xiàn)象，呈高滴度狀態(tài)，半定量試驗(yàn)已經(jīng)至最終稀釋度。注2：原始樣品定性試驗(yàn)符合9.1.5給出的細(xì)節(jié)；半定量試驗(yàn)中，經(jīng)過連續(xù)稀釋至1：512符合9.1.5給出的細(xì)節(jié)，而1：256符合9.1.3給出的細(xì)節(jié)。提示：定性試驗(yàn)有前帶現(xiàn)象，呈高滴度狀態(tài)，半定量試驗(yàn)已經(jīng)至最終稀釋度。5.1010

質(zhì)量控制

基本要求10.1.1

試驗(yàn)溫度

試驗(yàn)區(qū)域溫度宜在18℃～29℃之間。

所有從低溫環(huán)境下取出的標(biāo)本、試劑、對照品、質(zhì)控品等，應(yīng)放置在室溫至少30min才可以進(jìn)行試驗(yàn)。

過低的環(huán)境溫度可增加假陽性。10.1.2

生物安全本文件涉及傳染性生物樣品，應(yīng)注意生物安全防護(hù)。10.1.3

隱私保護(hù)本文件涉及性傳播感染，應(yīng)保護(hù)患者信息和試驗(yàn)結(jié)果等個人隱私。10.1.4

技術(shù)人員

技術(shù)人員應(yīng)有醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)教育背景，上崗前應(yīng)獲得性病實(shí)驗(yàn)技術(shù)的培訓(xùn)資格證，在崗期間應(yīng)定期參加專業(yè)知識的復(fù)訓(xùn)。

在崗人員應(yīng)定期進(jìn)行能力測試。

對缺乏經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員，可將高滴度的樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋，觀察每個反應(yīng)圓圈中的抗原抗體凝集狀態(tài)，根據(jù)9.1給出的細(xì)節(jié)，掌握辨別弱陽性結(jié)果的能力。

對照品10.2.1

對照品應(yīng)隨試劑盒保存，不可凍存。10.2.2

不同試劑盒中的對照品不可混用。10.2.3

對照品不可作為監(jiān)測檢測質(zhì)量穩(wěn)定性的質(zhì)控品。10.2.4

應(yīng)記錄每次對照品的檢測結(jié)果，并保存記錄。10.2.5

每一次試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)隨待檢樣品同步檢測陽性反應(yīng)和陰性反應(yīng)的2種對照品。10.2.6

對照品檢測符合預(yù)期結(jié)果，說明本次檢測有效。10.2.7

對照品檢測不符合預(yù)期結(jié)果，說明本次檢測無效，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測。10.2.8

如重復(fù)檢測仍然不符合預(yù)期結(jié)果，提示該試劑盒失效，應(yīng)更換新試劑盒。5.10.310.3

質(zhì)控品10.3.1

質(zhì)控品為已知陽性反應(yīng)的血清制品。有適當(dāng)敏感度、明確的指定值（半定量試驗(yàn)時(shí)滴度通常為1：8）。性狀的穩(wěn)定期應(yīng)≥1年。10.3.2

每一個批次的質(zhì)控品，至少可滿足一年的檢測用量，應(yīng)置于螺口帶密封膠圈的凍存管中20℃或更低溫度保存。每一支分裝保存體積≥500μL。10.3.3

連續(xù)5個工作日內(nèi)使用的質(zhì)控品，應(yīng)置于2℃～8℃保存，避免反復(fù)凍融。10.3.4

應(yīng)記錄每次實(shí)驗(yàn)時(shí)質(zhì)控品的指定值、批號、生產(chǎn)日期、失效日期、當(dāng)日檢測結(jié)果，并保存記錄。10.3.5

每個工作日至少一次，隨待檢樣品、對照品同步檢測質(zhì)控品。10.3.6

質(zhì)控品的檢測符合預(yù)期結(jié)果，表明檢測系統(tǒng)受控，檢測有效。可發(fā)送臨床樣品檢測報(bào)告。10.3.7

質(zhì)控品的檢測不符合預(yù)期結(jié)果，本次檢測失控。不可發(fā)送臨床樣品檢測報(bào)告。查找整個檢測系統(tǒng)的試劑、技術(shù)和管理等的失控原因。糾正失控后，可發(fā)送報(bào)告。5.10.410.4

反應(yīng)板10.4.1

VDRL專用反應(yīng)板重復(fù)使用前應(yīng)潔凈處理。10.4.2

反應(yīng)板正面是樣品的反應(yīng)區(qū)，避免直接接觸和污染。10.4.3

RPR/TRUST試劑盒打開后，紙質(zhì)反應(yīng)板應(yīng)保存在干燥的室溫下，不可置于冰箱保存。10.4.4

紙質(zhì)反應(yīng)板表面覆蓋塑料涂層有適當(dāng)?shù)谋砻鎻埩Α＜匆后w在反應(yīng)網(wǎng)圈內(nèi)既不會白由流動，也不會呈荷葉上露滴狀。如發(fā)生不能均勻地涂布樣品到整個圓圈，應(yīng)更換反應(yīng)板。10.4.5

反應(yīng)板應(yīng)整體平坦，儲藏和檢測時(shí)不會凸起或凹陷。5.10.510.5

專用滴針10.5.1

初次使用的專用滴針，應(yīng)檢查是否符合6.6.2和6.6.3給出的要求。保存檢查記錄。10.5.2

當(dāng)日檢測完成后，宜用蒸餾水或去離子水沖洗針管。不要擦拭針頭，這樣會磨損硅涂層，可能影響滴加抗原的準(zhǔn)確性。10.5.3

每6個月更換專用滴針。5.10.610.6

結(jié)果判定10.6.1

使用紙質(zhì)反應(yīng)板替代玻璃片進(jìn)行VDRL試驗(yàn)時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后吸取反應(yīng)液置載玻片上，覆上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。10.6.2

應(yīng)在明亮的光線下，肉眼觀察RPR/TRUST結(jié)果。不可使用顯微鏡觀察。10.6.3

少數(shù)樣品在檢測后發(fā)現(xiàn)反應(yīng)圓圈的周邊均勻懸浮著細(xì)小顆粒凝集，而中心部位呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。可手持反應(yīng)板傾斜30°，輕輕地轉(zhuǎn)動數(shù)次，可幫助識別臨界陽性反應(yīng)的結(jié)果。10.6.4

臨床診斷提示早期梅毒／或疑似早期梅毒病例的樣品，即使定性試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，也應(yīng)將樣品稀釋到1:16進(jìn)行半定量試驗(yàn)。通過半定量試驗(yàn)來排除前帶現(xiàn)象。10.6.5

當(dāng)判斷為前帶現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步稀釋樣品進(jìn)行檢測，報(bào)告最終滴度。有前帶現(xiàn)象的患者，免疫應(yīng)答系統(tǒng)機(jī)制更容易發(fā)生賈赫氏反應(yīng)（JarischHerxheimerreaction），檢測報(bào)告中應(yīng)包含前帶現(xiàn)象的信息（按9.3.2給出的規(guī)定），有利于臨床醫(yī)生采取適當(dāng)措施來降低診療風(fēng)險(xiǎn)。10.6.6

當(dāng)無前帶現(xiàn)象時(shí)，報(bào)告中應(yīng)注明已經(jīng)過1:16稀釋，呈陰性反應(yīng)。5.10.710.7

室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)10.7.1

應(yīng)開展梅毒血清學(xué)的室內(nèi)質(zhì)控。10.7.2

應(yīng)每年至少2次參加由專業(yè)管理機(jī)構(gòu)組織的室室間質(zhì)量評價(jià)活動。10.7.3

定性試驗(yàn)的檢測結(jié)果與預(yù)期值一致，為合格。半定量試驗(yàn)的檢測結(jié)果≤±1滴度預(yù)期值的范圍，為合格。5.1111

臨床意義

輔助診斷11.1.1

梅毒螺旋體感染后，人體會產(chǎn)生抗類脂質(zhì)物質(zhì)的抗體。梅毒非特異性抗體檢測呈陽性反應(yīng)，與活動性梅毒有關(guān)，是判斷“現(xiàn)癥感染”的指標(biāo)。應(yīng)結(jié)合梅毒特異性抗體檢測結(jié)果可確診梅毒。11.1.2

超過10%的靜脈藥癮者的滴度>1：8，部分早期梅毒和潛伏梅毒的滴度<1：8。低滴度值不可用于排除假陽性反應(yīng)。11.1.3

VDRL是唯一診斷神經(jīng)梅毒的標(biāo)準(zhǔn)方法，對CSF有較高的特異性。呈陽性反應(yīng)的患者，可結(jié)合流行病資料和臨床表現(xiàn)診斷神經(jīng)梅毒。11.1.4

VDRL/RPR/TRUST有如下結(jié)果，可作為判斷先天梅毒的參考依據(jù)：——新生兒的血清、CSF中梅毒非特異性抗體水平高于同期母親2個滴度；——新生兒CSFVDRL呈陽性反應(yīng)；——出生后3個月內(nèi)，與初期的血清、CSF中梅毒非特異性抗體水平增加2個滴度。

療效監(jiān)測11.2.1

對監(jiān)測治療效果的病例，應(yīng)采用與初次檢測相同的方法和試劑。11.2.2

應(yīng)掌握初診時(shí)患者的定性和半定量試驗(yàn)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將每次隨訪的定性和半定量試驗(yàn)結(jié)果，分別與前一次和／或初診時(shí)的滴度水平進(jìn)行動態(tài)的比較，給予臨床最佳解釋。11.2.3

在連續(xù)的療效監(jiān)測過程中，抗體滴度水平和變化趨勢有著不同的臨床意義：——抗體下降≥2個滴度（例：從1:64下降至1:16，4倍），判斷治療有效。——抗體下降≥2個滴度，并且連續(xù)2個監(jiān)測周期的定性試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，判斷治愈。——抗體滴度下降<2個稀釋度，或上升<2個稀釋度，在排除重新感染和實(shí)驗(yàn)室技術(shù)性誤差的情況下，繼續(xù)隨訪監(jiān)測。——抗體上升≥2個滴度（例：從1：16上升至1：64，4倍），或定性試驗(yàn)從陰性反應(yīng)轉(zhuǎn)變成陽性反應(yīng)，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)史和臨床體征，可判斷復(fù)發(fā)、或再感染、或治療失敗。5.1212

局限性

概述雖然VDRL、RPR、TRUST的檢測原理基本相同，但因采用的抗原原料和生產(chǎn)T藝的不同，各種方法和試劑之間可能存在一定范圍的敏感性和特異性的系統(tǒng)性差異。任何2種方法的定性和半定量結(jié)果，相互間不可直接比較。當(dāng)采用梅毒非特異性抗體作梅毒篩查用途時(shí)，應(yīng)選擇敏感性高的方法或試劑。

假陽性反應(yīng)12.2.1

個別品牌真空采血管中含有的添加劑成分，可干擾檢測結(jié)果引起假陽性反應(yīng)。12.2.2

與梅毒感染無關(guān)的其他因素，如急性和慢性疾病、自然組織損傷等，梅毒非特異性抗體試驗(yàn)也可呈陽性反應(yīng)。常見的疾病因素有系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻風(fēng)病、瘧疾、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、腫瘤、其他螺旋體疾病等可引起假陽性反應(yīng)。常見的生理性因素有孕婦、老年人群可發(fā)生假陽性反應(yīng)。5.12.312.3

假陰性反應(yīng)12.3.1

感染梅毒螺旋體后，機(jī)體免疫應(yīng)答需要一定過程，抗類脂質(zhì)的抗體濃度尚處于實(shí)驗(yàn)方法的檢測限之下，稱為窗口期。可發(fā)生假陰性反應(yīng)。12.3.2

少數(shù)早期梅毒和神經(jīng)梅毒以及部分晚期梅毒，可發(fā)生定性試驗(yàn)假陰性反應(yīng)。5.12.412.4

前帶現(xiàn)象部分早期梅毒（1%～2%二期梅毒、0.5%～1%一期梅毒）的樣品可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。5.12.512.5

血清固定部分晚期潛伏梅毒、少數(shù)其他病程的樣品可發(fā)生血清固定現(xiàn)象。5.12.612.6

血漿樣品12.6.1

血漿中的抗體濃度顯著高于血清，同一個患者血清與血漿的檢測結(jié)果不可直接比較。12.6.2

用血漿進(jìn)行檢測時(shí)，應(yīng)在樣品類型中注明“血漿”。12.6.3

血漿樣品不可做VDRL試驗(yàn)。12.6.4

僅在特殊情況下，用RPR/TRUST檢測血漿樣品。如：血庫、無離心機(jī)的實(shí)驗(yàn)室、無法獲得血清樣品的狀況。6附錄6.1附錄A（規(guī)范性附錄）抗干擾性能初步評估A.1

干擾物質(zhì)可能來自內(nèi)源或外源物質(zhì)。常見的異常標(biāo)本（例如溶血、黃疸及脂血）、標(biāo)本處理過程中的添加物（例如抗凝劑、促凝劑）、采集及處理過程中接觸標(biāo)本的物質(zhì)（例如標(biāo)本收集容器及塞子）。A．2

向真空采集器生產(chǎn)商，了解添加劑的成分及其對檢驗(yàn)項(xiàng)目的抗干擾性能。主要添加劑成分不明確的真空采集器，應(yīng)謹(jǐn)慎選擇。A.3

向梅毒非特異性抗體檢測的試劑盒生產(chǎn)商，了解對常見干擾物質(zhì)的抗干擾性能。A.4

從國家和地區(qū)質(zhì)量控制管理部門，獲得試劑盒、真空采集器抗干擾試驗(yàn)的質(zhì)量評估信息。6.2附錄B（規(guī)范性附錄）抗干擾性能評估——驗(yàn)證廠家聲明6.2.1B.1

基本要求B.1.1

應(yīng)使用新鮮樣品進(jìn)行抗干擾性能評估。B.1.2

應(yīng)選擇具有溯源性的干擾物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，進(jìn)行抗干擾性能評估。包括：游離型膽紅素（Bil.F）、結(jié)合型膽紅素（Bil.C）、溶血素（Hb）和乳糜微粒（CM）。6.2.2B.2

驗(yàn)證真空采集器的抗干擾能力B.2.1

選擇10例健康人和10例不同病程的梅毒病例。梅毒病例應(yīng)包含3份臨界水平、3份低滴度、4份高滴度的樣品。B.2.2

使用1種無添加劑的潔凈玻璃管作對照。B.2.3

擬選真空采集器和對照管同時(shí)采集一個受檢者靜脈血，分離血清或血漿。B.2.4

分別進(jìn)行梅毒非特異性抗體檢測的定性和半定量試驗(yàn)。B.2.5

比較檢測結(jié)果差異情況，判斷真空采集器的抗干擾能力。6.2.3B.3

驗(yàn)證試劑的抗干擾能力B.3.1

選擇被評估試劑。B.3.2

樣品選擇符合B.2.1規(guī)定。B.3.3

靜脈抽血，分離血清或者血漿備用。B.3.4

干擾物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)復(fù)溶后，按照最高生理濃度水平，與待檢的血清或血漿樣品混合。B.3.5

對添加干擾物質(zhì)前后的血清或血漿樣品，分別進(jìn)行定性和半定量試驗(yàn)。B.3.6

比較同一個受檢者，添加干擾物質(zhì)前后的樣品，檢測結(jié)果的差異情況。B.3.7

綜合判斷該試劑抗干擾物質(zhì)的能力。6.2.4B.4

判斷標(biāo)準(zhǔn)B.4.1

以對照管的檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，含添加劑的真空采集器的樣品，梅毒非特異性抗體的定性試驗(yàn)無相反的結(jié)果；半定量試驗(yàn)的結(jié)果≤±1滴度。判斷真空采集器具有抗干擾能力。B.4.2

以不加干擾物質(zhì)的原始樣品的結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，含干擾物質(zhì)的血清或血漿的樣品，梅毒非特異性抗體的定性試驗(yàn)無相反的結(jié)果；半定量試驗(yàn)的結(jié)果≤±1滴度。判斷該試劑具有抗干擾能力。7參考文獻(xiàn)[1]顧偉鳴，楊陽，吳磊，等．梅毒血清學(xué)試劑性能評估方案的優(yōu)化及應(yīng)用．醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，201429（11）：11691174[2]楊陽，吳磊，顧偉鳴，等．梅毒非特異性類脂質(zhì)反應(yīng)素抗體試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的建立及應(yīng)用評價(jià)．中華皮膚科雜志，2011,44（5）:336338[3]楊陽，顧偉鳴，金月蘭，等．上海市梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評價(jià)．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009,24（12）：922926[4]顧偉鳴，楊陽，金月蘭，等．梅毒血清學(xué)檢測質(zhì)量亟需提高．中華皮膚科雜志，2009,42（5）:5051[5]王治國，王薇，李婭，等．臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009:340348[6]顧偉鳴，趙根明，楊陽，等．先天梅毒患兒的血清學(xué)隨訪．中華傳染病雜志，2007,25（2）:117119[7]尹躍平．性傳播疾病實(shí)驗(yàn)室診斷指南．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2007:78[8]王千秋，張國成．性傳播疾病臨床診斷指南．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2007:216[9]體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）．國食藥監(jiān)械[2007]229號[10]GuWeiMing,YangYang,WuLei,etal.ComparingthePerformanceCharacteristicsof

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