流式細(xì)胞技術(shù)測定2型糖尿病辨證分型的客觀指標(biāo)

根據(jù)最近的研究，2型糖尿病也存在異常的體液和細(xì)胞免疫功能，脾虛證在許多2型糖尿病患者中發(fā)揮著重要作用。2型糖尿病脾氣虛證與細(xì)胞免疫關(guān)系的研究以往有從T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能方面進(jìn)行的,但尚未見與CD16+CD56、CD25之間關(guān)系的研究報道。我們采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測2型糖尿病脾氣虛證患者的CD16+CD56、CD25,以探討2型糖尿病脾氣虛證與CD16+CD56、CD25關(guān)系,并為糖尿病的辨證分型尋找一些客觀指標(biāo)。1病例選擇及檢測方法1.1一般資料本資料共101例,2型糖尿病(中醫(yī)辨證屬脾氣虛證)患者共61例,均為本院1998年1月～2000年6月的住院患者,其中男性34例,女性27例;病程最短10天,最長18年;年齡最小31歲,最大69歲,平均(55.8±7.1)歲。正常對照組系本院體檢的健康人群,共40例,其中男性21例,女性19例;年齡最小35歲,最大68歲,平均(56.2±6.3)歲。兩組比較,其年齡、性別基本匹配。1.2診斷及病例選擇標(biāo)準(zhǔn)1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn)既符合世界衛(wèi)生組織1985年糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn),又符合中國中醫(yī)藥學(xué)會消渴病專業(yè)委員會1992年擬定的消渴病(糖尿病)辨證診斷參考標(biāo)準(zhǔn)。1.2.2病例選擇標(biāo)準(zhǔn)所有明確診斷為2型糖尿病,中醫(yī)辨證屬脾氣虛證者均為納入觀察對象,排除70歲及以上患者及合并嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病、心腦腎疾病的患者。1.2檢測方法空腹血糖(FBS)檢測采用葡萄糖氧化酶法;外周血淋巴細(xì)胞表型中CD16+CD56,CD25,由本院血液病實驗室專人檢測,檢測儀器為FACSCalibur流式細(xì)胞儀,美國Becton-Bickinson(B-D)公司產(chǎn)品。所使用的抗體,均為熒光異硫氨酸熒光素(FITC)或藻蛋白(PE)標(biāo)記的鼠抗人單克隆抗體,由美國B-D公司提供。1.3治療方法每天1次40～60mL黃芪注射液(上海福達(dá)制藥有限公司生產(chǎn),批號990704,規(guī)格:10mL相當(dāng)于黃芪20g)加入到0.9%生理鹽水250mL中靜滴,療程2周。控制血糖采用口服降糖藥。1.4統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)處理采用t檢驗。2結(jié)果見表1,表2。3討論3.1糖尿病的病因病機(jī)中醫(yī)辯治糖尿病向以“陰虛燥熱”立論,近年來隨著對糖尿病病因病機(jī)探討的逐步深入,有較多學(xué)者認(rèn)為“脾氣虛”在糖尿病的發(fā)病過程中占有重要地位。如熊氏認(rèn)為脾氣虛弱與糖尿病的發(fā)病病機(jī)密切相關(guān),脾氣虛弱是其主要證候之一;錢氏等認(rèn)為糖尿病的多種病因都可直接或間接地?fù)p傷脾臟,使脾失健運,不能散精布液,導(dǎo)致糖尿病諸多癥狀的發(fā)生,同時用益氣健脾的治療方法可收到良好的療效。我們對在觀察期內(nèi)收住院的79例2型糖尿病的癥狀進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其中61例患者在病程的各個階段都不同程度地存在著消瘦、神疲、乏力、舌淡胖有齒痕等癥狀,占總例數(shù)的75.9%,與國內(nèi)有關(guān)報道相近。因此我們試圖從這一具有一定普遍性的證候入手,探討2型糖尿病脾氣虛證與細(xì)胞免疫功能的關(guān)系。3.22cd25細(xì)胞生物學(xué)特性目前的研究認(rèn)為2型糖尿病患者不但存在著胰島素分泌的相對不足和胰島素抵抗,而且還存在著體液免疫和細(xì)胞免疫的異常,其表現(xiàn)不僅有血清白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的異常表達(dá),而且也有T淋巴細(xì)胞功能的紊亂。CD16+CD56雙表達(dá)反映自然殺傷(NK)細(xì)胞的活性。NK細(xì)胞是機(jī)體非特異性免疫監(jiān)視功能的主要細(xì)胞成分,它能分泌TNF-α、干擾素(IFN-γ)等多種細(xì)胞因子,具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用。NK細(xì)胞受白介素-2(IL-2)的正向調(diào)節(jié),它可持續(xù)表達(dá)低親和力的白介素-2受體(IL-2R),可在任何時間針對較高濃度的IL-2而出現(xiàn)反應(yīng)。我們的觀察表明2型糖尿病脾氣虛證患者的CD16+CD56水平低于正常對照組(P<0.01),說明存在著NK細(xì)胞功能低下的情況,從而導(dǎo)致糖尿病患者細(xì)胞免疫功能的紊亂。CD25細(xì)胞是反映外周血免疫活性細(xì)胞膜IL-2R(mIL-2R)α鏈的結(jié)合表達(dá)鏈,也是活化T淋巴細(xì)胞的標(biāo)志,而IL-2是輔助性T淋巴細(xì)胞分泌的一種可溶性淋巴因子,能激活調(diào)節(jié)T、B、NK和淋巴細(xì)胞激活的殺傷(LAK)細(xì)胞,從而發(fā)揮免疫效應(yīng),但這種生物活性必須通過和mIL-2R的相互作用來完成。當(dāng)血清中IL-2含量正常情況下,CD25細(xì)胞越多,與IL-2結(jié)合越高,免疫效應(yīng)也越強(qiáng)。我們的觀察發(fā)現(xiàn),2型糖尿病脾氣虛證患者CD25的水平高于正常對照組(P<0.01),從而打破了體內(nèi)免疫應(yīng)答的動態(tài)平衡,引起細(xì)胞免疫功能的紊亂。3.3治療糖尿病的t-b-c6-cd5為了進(jìn)一步觀察2型糖尿病脾氣虛證與CD16+CD56、CD25之間的關(guān)系,我們對空腹血糖控制在7mmol/L以下的12例糖尿病脾氣虛證患者,采用黃芪注射液治療,也取得了陽性結(jié)果的苗頭,初步結(jié)果表明:黃芪注射液不但能顯著改善脾氣虛癥狀,而且對CD16+CD56、CD25水平紊亂也有一定的調(diào)節(jié)作用,但差異還沒有顯著性意義(P>0.05)。黃芪具有僅次于人參(包括黨參)的健脾益氣功效,只是由于積累的病例數(shù)較少,療程較短,尚難以真正說明它們之間的內(nèi)在聯(lián)系。但已經(jīng)為揭示大劑量黃芪