smilax定金的化學成分及其抗氧化活性

野生稻是百合科植物的一種干燥的幼苗，通常被稱為金剛藤，具有收斂、解毒和散瘀的功效。常用于治療風濕性疼痛、跌倒、毆打損傷、胃腸炎和痢疾。主要成分有黃酮、類和肥皂。菝葜的醋酸乙酯部位在抗炎和抗腫瘤方面有著獨特的療效。為了尋找菝葜的抗炎、抗腫瘤活性成分,本實驗對菝葜乙醇提取物醋酸乙酯部位的化學成分及其抗氧化活性進行了系統研究。本研究從中獲得了7個化合物和1個混合物,分別鑒定為:cinchonainIb(Ⅰ)、catechin-(7,8-bc)-4β-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅱ)、catechin-(5,6-e)-4β-(3,4-dihydr-oxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅲ)和catechin-(5,6-e)-4α-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone(Ⅳ)的混合物、二氫山柰酚(Ⅴ)、二氫槲皮素(Ⅵ)、兒茶素(Ⅶ)、棕櫚酸(Ⅷ)、β-胡蘿卜苷(Ⅸ);抗氧化實驗結果表明,化合物Ⅰ～Ⅶ均具有較強的抗氧化活性。其中化合物Ⅰ～Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。1儀器、色譜和材料Perkin-ElmerSpectrumOneFT-IR紅外光譜儀(KBr壓片);BrukerAV400型核磁共振儀,TMS為內標;FinniganMAT95型EI質譜儀;Perkin-ElmerModel341旋光儀;JASCOJ-810圓二色光譜儀;UV-756MC紫外-可見分光光度計;ABTS[2,2′-azinobis(3-ethylbenzothiaoline-6-sulfonicacid),diammoniumsalt]自由基、Trolox(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid),均為美國Sigma公司產品,購自北京豐特斯化工材料有限公司;柱色譜和薄層用硅膠為青島海洋化工廠產品;反相硅膠和SephadexLH-20為FlukaBioChemika公司產品;其余試劑均為分析純,購自上海化學試劑公司。菝葜藥材采自湖北鄖西縣,經華中科技大學同濟醫學院藥學院張長弓教授鑒定為百合科菝葜屬植物菝葜SmilaxchinaL.的干燥根莖。2萃取-濃縮萃取菝葜根莖5.0kg粉碎后,用50%乙醇回流提取3次,每次1h,將提取液合并,減壓濃縮得浸膏。然后將浸膏混懸于3.0L蒸餾水中,依次用石油醚(3×3L)、醋酸乙酯(3×3L)進行萃取,將萃取液分別進行減壓濃縮得浸膏。醋酸乙酯部位40g經氯仿-丙酮(20∶1→1∶2)梯度洗脫,再反復運用硅膠、反相硅膠、SephadexLH-20等色譜方法分離純化,得到化合物Ⅰ～Ⅸ。3化合物cihnonif化合物Ⅰ:C24H20O9,淺黃色粉末,[α]25D25D+10°(c0.18,MeOH);CD(c0.0024,MeOH),λ(Δε)211(-7.59),231(+7.76),252(-2.03),285(+1.43)nm;UVλΜeΟΗmaxMeOHmaxnm(lgε):218(4.47),282(3.84);IRνΚBrmaxKBrmax(cm-1):3338,1747,1618,1523,1450,1339,1282,1164,1112,1067,922,787;EI-MS(m/z):452[M]+(1),434(24),416(4),342(7),324(12),228(6),191(12),178(6),123(16),110(100),92(10),64(26);1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.81(1H,d,J=1.9Hz,H-2′),6.70(1H,d,J=8.1Hz,H-5″),6.67(1H,d,J=8.2Hz,H-5′),6.61(1H,d,J=2.2Hz,H-2″),6.60(1H,dd,J=8.1,1.9Hz,H-6″),6.52(1H,dd,J=8.2,2.2Hz,H-6′),6.21(1H,s,H-6),4.84(1H,s,H-2),4.41(1H,m,H-β),4.18(1H,brs,H-3),2.95(1H,dd,J=16.0,7.0Hz,H-α),2.92(1H,dd,J=15.5,4.3Hz,H-4),2.80(1H,dd,J=15.5,3.0Hz,H-4),2.79(1H,dd,J=16.0,5.0Hz,H-α);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:80.6(C-2),67.4(C-4),29.7(C-4),105.7(C-4a),157.7(C-5),96.9(C-6),152.5(C-7),106.6(C-8),154.0(C-8a),38.7(C-α),35.6(C-β),171.3(C=O),132.2(C-1′),115.5(C-2′),146.2(C-3′),146.4(C-4′),116.4(C-5′),119.9(C-6′),135.7(C-1″),115.8(C-2″),145.6(C-3″),146.8(C-4″),117.1(C-5″)。以上數據與文獻對照,鑒定化合物Ⅰ為cinchonainIb。化合物Ⅱ:C24H20O9,淺黃色粉末,[α]20D-78°(c0.18,MeOH);UVλΜeΟΗmaxnm(lgε):226(4.14),282(3.95);IRνΚBrmax(cm-1):3338,1747,1618,1523,1448,1282,1163,1112,1057,1015,817;EI-MS(m/z):452[M]+(2),434(8),342(2),324(5),228(4),191(7),178(8),123(13),110(100),92(22),64(70);1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.80(1H,d,J=1.9Hz,H-2′),6.68(1H,m,H-6″),6.67(1H,d,J=8.2Hz,H-5″),6.65(1H,d,J=2.2Hz,H-2″),6.59(1H,d,J=8.23Hz,H-5′),6.52(1H,m,H-6′),6.21(1H,s,H-6),4.65(1H,d,J=7.0Hz,H-2),4.39(1H,m,H-β),3.99(1H,m,H-3),3.00(1H,dd,J=16.0,7.1Hz,H-α),2.88(1H,dd,J=17.0,6.4Hz,H-4),2.79(1H,dd,J=16.0,5.0Hz,H-α),2.60(1H,dd,J=17.0,8.0Hz,H-4);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:83.2(C-2),68.7(C-3),28.5(C-4),106.2(C-4a),157.3(C-5),96.8(C-6),152.6(C-7),106.4(C-8),153.4(C-8a),39.0(C-α),35.8(C-β),171.2(C=O),132.1(C-1′),115.5(C-2′),146.4(C-3′),146.5(C-4′),116.7(C-5′),120.1(C-6′),135.7(C-1″),115.6(C-2″),145.6(C-3″),146.7(C-4″),117.0(C-5″),120.0(C-6″)。以上數據經與文獻對照,鑒定化合物Ⅱ為catechin-(7,8-bc)-4β-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone。化合物Ⅲ和Ⅳ:灰白色粉末,UVλΜeΟΗmaxnm(lgε):220(4.56),283(4.06);IRνΚBrmax(cm-1):3309,1750,1633,1607,1522,1445,1283,1240,1166,1119,1060,1003,817,790;EI-MSm/z:452[M]+(2),123(3),110(100),92(12),64(32);1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.91(1H,brs,H-2′),6.82(1H,d,J=8.0Hz,H-5′),6.77(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6′),6.73(1H,d,J=8.2Hz,H-5″),6.66(1H,brs,H-2″),6.54(1H,dd,J=8.0,2.2Hz,H-6″),6.26(1H,s,H-8),4.69(1H,d,J=7.6Hz,H-2),4.66(1H,m,H-β),4.09(1H,m,H-3),3.10(1H,m,H-α),3.00(1H,dd,J=16.0,5.5Hz,H-4),2.90(1H,m,H-α),2.67(1H,dd,J=16.0,8.4Hz,H-4);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:82.4/82.6(C-2),67.3/67.4(C-3),28.0(C-4),101.4(C-4a),151.4(C-5),106.3/106.4(C-6),153.8(C-7),99.0(C-8),155.20/155.23(C-8a),37.5(C-α),34.36/34.44(C-β),167.7(C=O),131.4(C-1′),114.8(C-2′),145.4(C-3′),145.5(C-4′),115.5(C-5′),119.6/119.7(C-6′),134.48/134.51(C-1″),114.6(C-2″),144.4(C-3″),145.6(C-4″),115.8(C-5″),118.7(C-6″)。上述UV、IR和NMR數據與化合物Ⅰ和Ⅱ的數據十分相似,但在13C-NMR譜中有部分碳信號成對出現,用HPLC進行純度分析后發現,化合物色譜峰頂端分叉,表明該化合物是由2個結構非常類似的化合物組成的混合物。以上數據經與文獻對照,確定Ⅲ和Ⅳ分別為catechin-(5,6-e)-4β-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone和catechin-(5,6-e)-4α-(3,4-dihydroxyphenyl)-dihydro-2(3H)-pyranone。化合物Ⅴ:白色粉末,UV、EI-MS、1H-NMR和13C-NMR數據經與文獻對照,化合物Ⅴ鑒定為二氫山柰酚。化合物Ⅵ:白色粉末,[α]20D+28°(c0.08,MeOH);UV、EI-MS、1H-NMR和13C-NMR數據經與文獻對照,化合物Ⅵ鑒定為二氫槲皮素。化合物Ⅶ:白色粉末,[α]25D-10°(c0.13,MeOH);UV、EI-MS、1H-NMR和13C-NMR數據經與文獻對照,化合物Ⅶ鑒定為兒茶素。化合物Ⅷ:白色粉末,EI-MS、1H-NMR數據經與文獻對照,化合物Ⅷ鑒定為棕