課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數點此播放教學視頻

課題2點此播放教學視頻課題背景1、尿素的利用:尿素是一種重要的農業氮肥。尿素不能直接被農作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因:CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3脲酶點此播放教學視頻

課題背景1、尿素的利用:尿素是一種重要的農業氮肥。尿素不能直3、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統計菌落數目㈢.設置對照點此播放教學視頻

3、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統計每克土壤（一）篩選菌株水生耐熱細菌Taq耐高溫的TaqDNA聚合酶選擇培養基在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基。啟示?點此播放教學視頻

（一）篩選菌株水生耐熱細菌Taq選擇培養基啟示?點此播放教學15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4思考：①從物理性質看此培養基屬于哪類？固體培養基點此播放教學視頻

15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4②在此培養基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素培養基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發育繁殖，而受到抑制，所以用此培養基就能夠選擇出分解尿素的微生物。3、培養基選擇分解尿素的微生物的原理？點此播放教學視頻

②在此培養基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素1.間接計數法（活菌計數法）⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細胞。每克樣品中的菌落數＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數。2、顯微鏡直接計數：㈡.統計菌落數目：點此播放教學視頻

1.間接計數法（活菌計數法）每克樣品中的菌落數＝(C÷V)×思考書本22頁問題：說明設置重復組的重要性。第一位同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數結果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數值用來求平均值。這個實例啟示學生，在設計實驗時，一定要涂布至少3個平板，作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性。在分析實驗結果時，一定要考慮所設置的重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。思考書本22頁問題：說明設置重復組的重要性。注意事項①為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30——300的平板上進行計數。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經涂布，培養計算出菌落平均數。③統計的菌落往往比活菌的實際數目低。點此播放教學視頻

注意事項點此播放教學視頻計數法直接計數法、活菌平板計數法、比濁法（原理是在一定范圍內，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。）

膜過濾法（當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數）計數法直接計數法、設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。㈢.設置對照：實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統計菌落數目的實驗時，A同學從對應的106倍稀釋的培養基中篩選出大約150個菌落，但是其他同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質)點此播放教學視頻

設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗方案二：將A同學配制的培養基在不加土樣的情況下進行培養，作為空白對照，以證明培養基是否受到污染。結果預測：如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養基的配制有問題。點此播放教學視頻

小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是二.實驗的具體操作

㈠.土壤取樣㈡.制備培養基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養基。點此播放教學視頻

二.實驗的具體操作點此播放教學視頻◆應在火焰旁稱取土壤10g。◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數在30～300之間、適于計數的平板[三]樣品的稀釋點此播放教學視頻

◆應在火焰旁稱取土壤10g。◆分離不同的微生物采用不同的稀釋思考：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍相同嗎？原因：土壤中各類微生物的數量（單位：株/kg）是不同的。結論：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養的條件。點此播放教學視頻

思考：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養皿作好標記。注明培養基類型、培養時間、稀釋度、培養物等。◆如果得到了2個或2個以上菌落數目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數，如果同一稀釋倍數的三個重復的菌落數相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。點此播放教學視頻

㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養皿作好標記。注明培養基類型、培養㈤.微生物的培養與觀察在菌落計數時，每隔24h統計一次菌落數目。選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，以防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目。培養不同微生物往往需要不同培養溫度。細菌：30～37℃培養1～2d放線菌：25～28℃培養5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養3～4d。點此播放教學視頻

㈤.微生物的培養與觀察在菌落計數時，每隔24h統計一次菌落數實驗設計步驟：

1、土壤取樣2、制備培養基：3、樣品的稀釋4、取樣涂布5、微生物的培養與觀察點此播放教學視頻

實驗設計步驟：點此播放教學視頻18微生物的培養與觀察微生物的培養與觀察1、結合對照，分析培養物中是否有雜菌污染以及選擇培養基是否篩選出一些菌落。2、是否獲得了某一稀釋度下，菌落數目在30——300的平板。在這稀釋度下，是否至少有兩個平板的菌落數相近？3、你統計的每克土壤中含有能分解尿素的細菌的菌落數是多少？與其他同學的結果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？三.結果分析與評價對照的培養皿在培養中無菌落生長，說明培養基沒有被雜菌污染。牛肉膏蛋白胨培養基的菌落數目明顯大于選擇培養基，說明選擇培養基具有選擇作用。1、結合對照，分析培養物中是否有雜菌污染以及選擇培養基是否篩四.課外延伸在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑。培養某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。測定飲水中大腸桿菌數量的方法是將一定體積的水用細菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅美藍培養基上培養，大腸桿菌菌落呈現黑色，通過記述得出水樣中大腸桿菌的數量。點此播放教學視頻

四.課外延伸測定飲水中大腸桿菌數量的方法是將一定體積的水用細大腸桿菌呈黑色中心,有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)上典型特征

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大腸桿菌呈黑色中心,有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂22本課題知識小結:點此播放教學視頻

本課題知識小結:點此播放教學視頻23例題解析

例1．對細菌群體生長規律測定的正確的表述是A．在液體培養基上進行B．至少接種一種細菌C．接種一個細菌D．及時補充消耗的營養物質解析：細菌群體生長規律的測定是人們在一定條件下進行的。這些條件是：一種細菌、恒定容積的培養基，液體培養基、定時測定細菌總數。在這些條件下，才能測定出細菌的生長規律。測定時只能用一種細菌的子細胞群體的變化規律表達微生物的生長；恒定容積是給微生物提供一定的生存環境；液體培養基才能通過樣品推測細菌總數。若接種多種細菌，則會發生種間斗爭而不能測定一種微生物的生長規律。在接種時，要保證一定的接種量。答案：A點此播放教學視頻

例題解析例1．對細菌群體生長規律測定的正確的表述是24例2．在微生物群體生長規律的測定中，種內斗爭最顯著最激烈的時期是

A．調整期B．對數期

C．穩定期D．衰亡期

解析：種內斗爭是一種生態因素。種內斗爭反應了種內生物對生存空間和生活資源的爭奪。在生活空間充裕，營養充足的時候，種內斗爭的程度是比較低的。隨著微生物個體數目的增加，每個個體的生存空間越來越少，營養物質也越來越少，每個個體對生存空間和資源的爭奪也越來越激烈，種內斗爭就越來越激烈。由此可知，在穩定期的種內斗爭最激烈。在衰亡期，微生物的數目已經開始減少，pH已經極度不適于微生物的生存，次級代謝產物積累到很高的程度，這時的微生物的生存斗爭主要是與無機環境的斗爭。答案：C點此播放教學視頻

例2．在微生物群體生長規律的測定中，種內斗爭最顯著最激烈253.使用選擇培養基的目的是（）

A.培養細菌

B.培養真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區別4.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素CD點此播放教學視頻

CD點此播放教學視頻5.下列說法不正確的是（）

A.科學家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶

B.統計某一稀釋度的5個平板的菌落數依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數的估計值

C.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度

D.同其他生物環境相比，土壤中的微生物數量最大，種類最多。6.為培養和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養基中加入（）

A.較多的氮源物質B.較多的碳源物質

C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC點此播放教學視頻

5.下列說法不正確的是（）BC點此播放教學視頻利用生物工程生產啤酒、味精、胰島素、酸奶的常用菌種分別是（）A．酵母菌、枯草桿菌、大腸桿菌、乳酸菌B．酵母菌、大腸桿菌、青霉菌、乳酸菌C．酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌、大腸桿菌、乳酸菌D．黃色短桿菌、酵母菌、大腸桿菌、乳酸菌C點此播放教學視頻

利用生物工程生產啤酒、味精、胰島素、酸奶的常用菌種分別是（28測定土壤中細菌數量一般選用104、105和106倍的稀釋液進行平板培養，而測定真菌的數量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是()A．細菌個體小，真菌個體大B．細菌易稀釋，真菌不易稀釋C．細菌在土壤中數量比真菌多D．隨機的，沒有原因C點此播放教學視頻

測定土壤中細菌數量一般選用104、105和106倍的稀釋液進29用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用需要設置的對照是(

)A．未接種的選擇培養基B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養基C．接種了的牛肉膏蛋白胨培養基D．接種了的選擇培養基C選C。將菌液稀釋相同的倍數，在牛肉膏蛋白胨培養基上生長的菌落數目應明顯多于選擇培養基上的數目，因此，應選牛肉膏蛋白胨培養基作為對照。對照遵循的是單一變量原則，所以與選擇培養基一樣接種、培養。點此播放教學視頻

用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用需要設置的對照是()30分離土壤中分解尿素的細菌，對培養基的要求是(

)①加尿素②不加尿素③加瓊脂④不加瓊脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸鹽⑧不加硝酸鹽A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦C土壤中分解尿素的細菌能夠合成脲酶，將尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有機物。培養基中只加尿素，分解尿素的細菌能生長，其他微生物不能生長；分離微生物要用固體培養基；土壤中分解尿素的細菌屬于異養微生物，需要加葡萄糖作為碳源。分離土壤中分解尿素的細菌，對培養基的要求是()C土壤中分31根據實驗原理和材料用具，設計實驗確定細菌質粒的抗菌素基因所抗的抗菌素的類別。實驗原理：作為運載體的質粒帶有標記基因，這一標記基因是抗菌素抗性基因，即有抗性基因的質粒可