分子印跡固相萃取結合超高效液相熒光法測定螺類中15種多環芳烴

多環芳烴（pahs）是一種高度毒性的碳氫化合物。PAHs具有疏水性、半揮發性及難降解等特點,容易在生物體內富集貝螺類具有營濾食性生活和代謝率低的特點,極易富集污染物,常用作海洋生態系統污染暴露于效應的生物指示。PAHs在環境中不易降解并且具有親脂特性,經鰓絲、體表滲透和攝食等方式進入海洋生物,環境中PAHs的生物富集系數可高達幾千至幾百萬倍,因此海洋貝螺類已廣泛地應用于海洋環境中有機污染物的檢測分子印跡技術是借助人工制備的分子印跡聚合物(molecularlyimprintedpolymer,MIP)針對目標分子實施特異性識別、分離、凈化以及富集處理,同時多種MIP和SPE柱結合起來的應用,通過分子印跡材料能夠避免到內源性干擾,在有效去除樣品基質干擾的同時,還可以特異性結合分析物1材料和方法1.1儀器、試藥和儀器H-CLASS型超高效液相色譜儀(美國Waters公司);MG-2200型氮吹儀(日本EYELA公司);QT-1型漩渦混合器(上海琪特分析儀器有限公司);12位固相萃取真空裝置(德國CNW科技公司);SB-5200DT型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司);5810R型離心機(德國Eppendorf公司);電子天平(德國bt25s公司);MIP-PAHs多環芳烴專用小柱(上海安譜科技股份有限公司),填料規格為1g·(6mL)乙腈(色譜純),正己烷(色譜純),二氯甲烷(色譜純);15種多環芳烴混合標液:萘(Nap)、苊(Ace)、芴(Flu)、菲(Phe)、蒽(Ant)、熒蒽(Fln)、芘(Pyr)、苯并(a)蒽(BaA)、1.2樣品預處理1.2.1超聲水浴時間稱取5g均質(精確至0.01g)試樣于50mL離心管A,加入10mL正己烷,渦旋振蕩10s后,放入40℃超聲水浴30min,4500r·min1.2.2親脂ptfe針式濾器ptfe過濾依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化MIP-PAHs多環芳烴專用小柱,將待凈化樣上到小柱上,再用2mL正己烷潤洗30mL玻璃離心管B,上樣到柱上,用6mL正己烷淋洗小柱并棄流出液,再用6mL二氯甲烷收集洗脫液于5mL玻璃離心管中,將收集液在40℃下用氮氣吹干,用1mL乙腈定容,超聲1min,再漩渦混合10s,過0.22μm親脂PTFE針式濾器,待上機檢測。1.2.3測量取試樣溶液10μL,注入超高效液相色譜儀,記錄色譜圖,從標準曲線上查得樣品中多環芳烴的濃度。1.3流動相及洗脫梯度色譜柱為AglientZORBAXEclipsePAH柱(4.6mm×150mm,3.5μm),柱溫30℃;流動相A為乙腈,B為超純水。洗脫梯度為0.0~2.0min,50%A;2.0~22.0min,50%~100%A;22.0~28.0min,100%A;28.0~28.1min,100%~50%A;28.1~32min,50%A;流速為1.5mL·min多波長熒光檢測器,采用程序定時控制熒光檢測波長變化,測定除苊烯以外的15種多環芳烴,見表1。1.4計算結果15種多環芳烴含量的計算公式:其中,X為樣品的多環芳烴含量,μg·kg2結果與分析2.1標準曲線的線性范圍配置1、5、10、20、50和100ng·mL2.2返回率和準確度為了確保分析數據的準確性、精密性和可比性,在空白螺類樣品中添加含有15種PAHs的混標(添加水平分別為5、10、20μg·kg2.3螺類樣品中多環芳烴的含量運用本研究建立的方法對浙江省內部分地區的螺類樣品進行分析檢測。檢測分析結果(表4)表明:15種組分中Phe的平均含量最高,檢測樣品中Phe的含量在5.83~30.21μg·kg浙江省內部分地區的螺類樣品中多環芳烴平均含量見圖1。可知,溫州洞頭被測樣品的PAHs總和含量最高,平均含量約為57.02μg·kg2.4螺類多環芳烴組分PAHs大致可分為2環的萘,3環的苊烯、苊、芴、非和蒽,屬于低分子質量多環芳烴,易揮發,對水生生物有一定毒性;4環的熒蒽、芘、苯并[a]蒽和浙江省內部分地區PAHs組分特征見圖3。2環PAHs是臺州三門和溫州洞頭被測螺類體內多環芳烴的優勢組分;臺州椒江被測樣品的PAHs以4環為優勢組分;舟山普陀的組分特征結構較平均,2、3、4環結構含量在5.41~5.87μg·kg3螺類中pahs的組成及含量本研究建立了分子印跡固相萃取-超高效液相色譜熒光檢測15種多環芳烴含量的方法,具備了操作步驟簡單、回收率穩定、結果準確的優點。超聲波提取法增強了溶劑穿透復雜基質,對水產品中PAHs的分析更有優勢。PAHs在1~100ng·mL浙江省內部分地區螺類中15種PAHs總含