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基因工程藥物促紅細胞生成素(EPO)基因工程藥物1EPO的概念EPO的用途EPo的純化歷EPO的銷售情及其療效史及工藝流程情況及其前景EPO2什么是EPO?EPO:是促紅細胞生成素(Erythropoietin)的英文簡稱e促紅細胞生成素:最初是從腎臟中分離出來能刺激前體紅細胞增生、分化的一種細胞因子。e人體血液中的促紅細胞生成素:是由腎臟和肝臟分泌的一種激素樣物質,能夠促進紅細胞生成。它與其受體(EPOR結合后共同介導缺氧的生理反應什么是EPO?3EPo的用途e醫療用途:增加紅血球的數目,用于貧血、組織斷離、早產兒,用在癌學和血液學方面ca體育用途(興奮劑):增加訓練耐力和訓練負荷,屬于國際奧委會規定的違禁藥物。在2019年北京奧運會中第一例的興奮劑。EPo的用途4EPO的療效31、腎性貧血患者EPO水平較低,在進行治療過程中,往往通過注射EPO來提高體內EPO水平進行治療,從而幫助病人增加紅細胞數量,此時EPO水平有所上升。32、其他貧血如缺鐵性貧血、巨細胞性貧血患者EPO水平不降低,但也可以使用EPO治療,此時濃度也會有所升高33、再生障礙性貧血和骨髓造血功能不全患者EPo水平升高。EPO的療效5EPo的純化歷史1、Miyake的七步法:純化步驟太多,對設備及操作要求也較高,不適合工業生產的特點。2、Spivak利用凝集素親和層析純化EPO:由于凝集素親和層析凝膠易被雜蛋白不可逆吸附,使得分離效果降低,成本增高,也不利于大規模生產。>3、近年來則利用三步層析法三步純化基本流程等EPo的純化歷史6EPO的工藝流程①三步層析法1、染料配基親和層析→反相疏水層析→離子交換層析;>2、染料配基親和層析→反相疏水層析→分子篩層析>3、反相疏水層析→離子交換層析→分子篩層析。EPO的工藝流程7EPO的工藝流程②三步純化基本流程>第一步:反相柱色譜樣品濃縮約967%透析>第二步:DEAE離子交換色譜>第三步:分子篩色譜總回收率〉30%比活1510U/g蛋白EPO的工藝流程8第一步:反相色譜◆C6反相柱(2cm*2cm)(創新生物技術公司)令流程:上樣50mmin(柱結合量約5mg蛋白/m介質)去離子水平衡至檢測基線10%~80%乙醇胍線性梯度洗脫檢測并收集含EPO主峰ELSA測定令結果:60%乙醇-1moL鹽酸胍洗出EPo第一步:反相色譜9透析令透析液:10倍體積的10mmol/LTrisHCl(pH75}-2%蔗糖緩沖液透析次數:2令時間:5~6h透析10基因工程藥物——促紅細胞生成素課件11基因工程藥物——促紅細胞生成素課件12基因工程藥物——促紅細胞生成素課件13基因工程藥物——促紅細胞生成素課件14

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