食品中維生素的測定1第1頁，課件共83頁，創作于2023年2月一、概述二、脂溶性維生素的測定三、水溶性維生素的測定第十一章食品中維生素的測定2第2頁，課件共83頁，創作于2023年2月一、概述

維生素是維持人體正常生命活動所必需的一類微量有機化合物。其種類很多，目前已確認的有30余種，其中被認為對維持人體健康和促進發育至關重要的有20余種。這些維生素結構復雜，理化性質及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺物3第3頁，課件共83頁，創作于2023年2月1.維生素具有的共同特點（1）這些化合物或其前體化合物都在天然食物中存在；（2）不能供給機體熱能,也不是構成組織的基本原料；（3）主要作為輔酶的成分調節代謝過程，需要量極小；（4）一般在體內不能合成，或合成量不能滿足需要，必須經常從食物中攝取；（5）缺乏會導致相應的疾病。4第4頁，課件共83頁，創作于2023年2月2.維生素的分類

脂溶性維生素包括維生素A、D、E、K水溶性維生素包括B族維生素（維生素B1、B2、PP、B6、葉酸、B12、泛酸、生物素）和維生素C。

5第5頁，課件共83頁，創作于2023年2月3.測定意義（1）食品科學研究者需要準確的食品成分分析信息，計算營養素的膳食攝入，以改善人類的營養；（2）食品營養價值評價（3）食品生產工藝設計及強化食品的評價（4）食品資源開發（5）食品標簽的準確性6第6頁，課件共83頁，創作于2023年2月4.測定方法（1）涉及人體和動物的生物分析方法；（2）利用原生生物、細菌和酵母等的微生物分析方法；（3）化學法、分光光度法、熒光法、色譜、酶法、免疫和放射等物理化學分析方法。7第7頁，課件共83頁，創作于2023年2月化8第8頁，課件共83頁，創作于2023年2月脂溶性維生素的理化性質溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、苯、乙醚等有機溶劑。耐酸堿性：VA、VD對酸不穩定，對堿穩定；

VE對酸穩定，對堿不穩定。耐熱性：VA、VD、VE耐熱性好，能經受煮沸耐氧化性：VA易被氧化，光、熱促進氧化

VE易被氧化，光、熱、堿促進氧化

VD性質穩定，不易氧化二、脂溶性維生素的測定9第9頁，課件共83頁，創作于2023年2月在皂化和濃縮時，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑(如焦性沒食子酸、維生素C等)。對于A、D、E、K共存的樣品，或雜質含量高的樣品，在皂化提取后，還需進行層析分離。測定脂溶性維生素的流程皂化樣品水洗去除脂類物有機溶劑提取脂溶性維生素(不皂化物)濃縮溶于適當的溶劑→→→→→測定→10第10頁，課件共83頁，創作于2023年2月

維生素A存在于動物性脂肪中，主要來源于肝臟、魚肝油、蛋類、乳類等動物性食品中。植物性食品中不含VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內可轉變為VA，故稱為VA原。

（一）維生素A的測定11第11頁，課件共83頁，創作于2023年2月12第12頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（1）三氯化銻比色法

（2）紫外分光光度法

（3）熒光法

（4）氣相色譜法

（5）高效液相色譜法。維生素A的測定方法13第13頁，課件共83頁，創作于2023年2月1.三氯化銻比色法

維生素A在氯仿溶液中與三氯化銻相互作用，生成藍色可溶性物質，在620nm波長處有最大吸收峰，其顏色深淺與維生素A的含量在一定的濃度范圍內成正比，故可比色測定。原理

14第14頁，課件共83頁，創作于2023年2月適用于維生素A含量較高的樣品（高于5-10μg/g），對低含量樣品，因受其他脂溶性物質的干擾，不易比色測定該法的主要缺點：是生成的藍色物質的穩定性差。比色測定必須在6秒鐘內完成，否則藍色會迅速消退，將造成極大誤差。適用范圍及特點15第15頁，課件共83頁，創作于2023年2月注意：（1）維生素A見光易分解，整個實驗應在暗處進行，防止陽光照射，或采用棕色玻璃儀器避光。（2）三氯化銻腐蝕性強，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀。因此用過的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。16第16頁，課件共83頁，創作于2023年2月儀器

回流冷凝裝置分光光度計17第17頁，課件共83頁，創作于2023年2月（1）無水硫酸鈉

試劑（2）乙酸酐

（3）乙醚：不含有過氧化物（4）無水乙醇（5）氯仿(三氯甲烷）18第18頁，課件共83頁，創作于2023年2月（6）250g/L三氯化銻—氯仿溶液（7）50％氫氧化鉀溶液（8）0.5mol/L氫氧化鉀溶液

（9）1mg/mL維生素A或視黃醇乙酸酯標準溶液

（10）酚酞指示劑19第19頁，課件共83頁，創作于2023年2月準確吸取維生素A標準液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL容量瓶中，用氯仿定容至刻度。分別吸取上述各標準系列溶液lmL于比色皿中，各加乙酸酐1滴，搖勻，于620nm處，以氯仿調節吸光度零點，將其標準比色液按順序移入光路前，迅速加入9mL三氯化銻—氯仿溶液。于6s內測定吸光度，以維生素A含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。操作步驟（1）標準曲線的繪制20第20頁，課件共83頁，創作于2023年2月

①皂化（2）樣品處理根據樣品性質，處理方法可采用皂化法或研磨法。皂化法：適用于維生素A含量不高的樣品，可減少脂溶性物質的干擾，但全部實驗過程費時，且易導致維生素A損失。

②提取③洗滌④濃縮21第21頁，課件共83頁，創作于2023年2月水層皂化瓶內混合物分液漏斗1號水洗乙醚洗振搖，靜置，分層水層醚層分液漏斗2號振搖，靜置，分層醚層水層分液漏斗3號振搖，靜置，分層醚層分液漏斗1號提取22第22頁，課件共83頁，創作于2023年2月振搖，靜置，分層分液漏斗1號水洗醚層水層KOH溶液洗振搖，靜置，分層醚層KOH溶液層水洗振搖，靜置，分層醚層水層振搖，靜置，分層水洗醚層水層洗滌23第23頁，課件共83頁，創作于2023年2月分液漏斗醚層乙醚洗滌水浴蒸餾減壓抽干氯仿定容（25mL)無水硫酸鈉濃縮24第24頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（3）測定取2支比色皿，分別加入1mL氯仿和lmL樣品溶液，各加入1滴乙酸酐，于620nm波長處以氯仿調節吸光度零點，將其移入光路前，迅速加入9mL三氯化銻—氯仿溶液。于6s內測定吸光度。25第25頁，課件共83頁，創作于2023年2月結果計算C----由標準曲線上查得樣品溶液中維生素A的含量（μg）

m-----樣品質量（g）

V1----樣品提取液的總體積（mL）

V2----測定用樣品提取液的體積（mL）X---VA含量（mg/100g)26第26頁，課件共83頁，創作于2023年2月①研磨研磨法：適用于每克樣品維生素A含量大于5～10μg樣品的測定，如動物肝臟的檢測。步驟簡單，省時，結果準確。②提取③濃縮（3）測定同皂化法27第27頁，課件共83頁，創作于2023年2月結果計算式中：C----由標準曲線上查得樣品溶液中維生素A的含量（μg）

m-----樣品質量（g）

V1----樣品提取液的總體積（mL）

V2----測定用樣品提取液的體積（mL）28第28頁，課件共83頁，創作于2023年2月（1）本法為國家標準方法，適用于食品中維生素A的測定。（2）乙醚為溶劑的萃取體系，易發生乳化現象。在提取洗滌操作中，不要用力過猛，若發生乳化，可加幾滴乙醇。（3）所用氯仿中不應含有水分，因三氯化銻遇水會出現沉淀，干擾比色測定。故在每lmL氯仿中應加入乙酸酐l滴，以保證脫水。

說明與注意事項29第29頁，課件共83頁，創作于2023年2月（4）由于三氯化銻與維生素A所產生的藍色物質很不穩定，通常6s以后便開始褪色，因此要求反應在比色皿中進行，產生藍色后應立即讀取吸光值。（5）如果樣品中含有β--胡蘿卜素(如奶粉、禽蛋等食品)干擾測定，可將濃縮蒸干的樣品用正己烷溶解，以氧化鋁為吸附劑，丙酮—己烷混合液為洗脫劑進行柱層析。（6）三氯化銻腐蝕性強，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀，因此用過的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。30第30頁，課件共83頁，創作于2023年2月（二）胡蘿卜素的測定胡蘿卜素是一種廣泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多種異構體和衍生物，總稱為類胡蘿卜素，其中在分子結構中含有β-紫羅寧殘基的類胡蘿卜素，在人體內可轉變為維生素A，故稱為維生素A原。如α、β、γ胡蘿卜素，其中以β-胡蘿卜素效價最高。31第31頁，課件共83頁，創作于2023年2月胡蘿卜素對熱及酸、堿比較穩定，但紫外線和空氣中的氧可促進其氧化破壞。可用有機溶劑提取,在450nm波長處有最大吸收，故只要能完全分離，便可定性和定量。但在植物體內，胡蘿卜素經常與葉綠素、葉黃素等共存，在提取β-胡蘿卜素時，這些色素也能被有機溶劑提取，因此在測定前，必須將胡蘿卜素與其它色素分開。常用的方法有紙層析、柱層析和薄層層析法。32第32頁，課件共83頁，創作于2023年2月紙層析法是以濾紙及其結合水形成的復合物作為固定相，將待分離的樣品溶液點在濾紙的一端，在密閉的容器中，用適宜的溶劑（展開劑）作為流動相，帶動樣品斑點，從濾紙的一端向另一端遷移，此稱為展開。由于樣品中各組分與濾紙親和力的強弱差異，及在展開劑中溶解度的大小不同，在展開過程中，經過反復的吸附、解吸，經一定時間產生差速遷移，使樣品中各組分得以分離。經顯色劑顯色，可在濾紙上看到分離的斑點，這些斑點就是通常所說的色譜。33第33頁，課件共83頁，創作于2023年2月在兩相中，吸附力弱，溶解度大的組分，遷移速度快，斑點距原點的距離就大；反之則相反。紙層析是一種簡單、迅速、有效的分離、鑒定或定量有機物質的方法。在食品檢驗中，多用于糖類、氨基酸、維生素等成分的分析，以及食品中有害物質如黃曲霉毒素、有機氯農藥和有機磷農藥殘留量的分析。34第34頁，課件共83頁，創作于2023年2月原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他植物色素，以石油醚為展開劑進行紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素分離，剪下含胡蘿卜素的區帶，洗脫后于450nm波長下定量測定。35第35頁，課件共83頁，創作于2023年2月儀器

玻璃層析缸皂化回流裝置分光光度計旋轉蒸發器恒溫水浴鍋點樣器或微量注射器36第36頁，課件共83頁，創作于2023年2月試劑（1）石油醚(沸程30~60℃)（2）丙酮（3）丙酮—石油醚（3：7）混合液（4）無水硫酸鈉（5）50g/L硫酸鈉溶液（6）50％氫氧化鉀溶液（7）無水乙醇（8）500μg/mLβ-胡蘿卜素標準溶液

37第37頁，課件共83頁，創作于2023年2月標定：取標準溶液10μl，加正己烷3.0mL，混勻，在波長450nm測定吸光值，以正己烷為空白，平行測定三份，取平均值。式中：A------標準溶液的吸光度

ρ------胡蘿卜素標準溶液濃度（mg／mL）

E-----β—胡蘿卜素在正己烷溶液中，波長450nm,比色皿厚度為lcm，溶液濃度為1mg/L的吸光系數，其值為0.26383.01/0.01----稀釋倍數

1/1000-----將mg/L換算成mg/mL38第38頁，課件共83頁，創作于2023年2月②蔬菜與其他植物性食物：取可食部分用水洗凈后，用紗布吸去水滴，切碎，用組織搗碎機制成勻漿，貯于塑料瓶內于冰箱中保存備用。（1）樣品的采集和制備①糧食：樣品用水洗凈，置60℃烘箱中烘干，磨碎，貯于塑料瓶內，蓋緊瓶塞保存，備用。測定步驟39第39頁，課件共83頁，創作于2023年2月

以下步驟需在避光條件下進行。

（2）樣品處理：①糧食、蔬菜樣品：取勻漿1.0000～5.0000g，糧食樣品視含量而定，置100mL具塞三角瓶中，加入丙酮20mL，石油醚5mL，振搖lmin，靜置5min，將提取液轉入盛有100mL50g/L硫酸鈉溶液的分液漏斗中，再于三角瓶中加入10mL丙酮+石油醚混合液，振搖lmin，放置5min，將提取液并入分液漏斗中，如此提取2～3次，直至提取物呈無色為止。40第40頁，課件共83頁，創作于2023年2月②植物油和高脂肪樣品：需先皂化，取適量樣品(小于10g)，加入脫醛乙醇30mL，

1:1氫氧化鉀溶液10mL，加熱回流30min，然后用冰水使之迅速冷卻，皂化后樣品用石油醚提取，直至提取液呈無色為止。

（3）洗滌

（4）濃縮與定容（5）紙層析41第41頁，課件共83頁，創作于2023年2月①點樣：在18×30cm濾紙下端距底邊4cm處做一基線，在基線上取A、B、C、D4點，吸取0.1~0.4mL濃縮液在AB和CD間迅速點樣。42第42頁，課件共83頁，創作于2023年2月②展開：待紙上所點樣液自然揮發干后，將濾紙卷成圓筒狀，放于預先用石油醚飽和的層析缸中，進行展開。③洗脫：待胡蘿卜素與其他色素完全分開后，取出濾紙，揮發干石油醚，將位于展開劑前沿的胡蘿卜素層析帶剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞試管中，用力振搖，使胡蘿卜素完全溶于溶劑中。（6）比色測定

以石油醚調節零點，于450nm波長下比色，測吸光度，以其值從標準曲線上查出β-胡蘿卜素的含量。

43第43頁，課件共83頁，創作于2023年2月（7）標準曲線繪制取濃度為50μg/mLβ-胡蘿卜素標準液0、1、2、3、4、6、8mL，分別置于100mL具塞三角瓶中，按樣品測定步驟進行操作，點樣體積為0.1mL，標準曲線各點胡蘿卜素含量依次為0.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μg。在測定低含量樣品時，可在0～2.5μg間加做幾點，以胡蘿卜素含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標準曲線。44第44頁，課件共83頁，創作于2023年2月結果計算式中：ｘ--胡蘿卜素的含量（mg/100g）

C----在標準曲線上所查得的胡蘿卜素的含量（μg）

V1----點樣體積（mL）

V2----樣品石油醚提取液濃縮后的定容體積（mL）

m-----樣品質量（g）45第45頁，課件共83頁，創作于2023年2月1.本法為國家標準方法，適用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡蘿卜素的測定，其最小檢出量為0.11μg。2.濃縮提取液時，一定要防止蒸干，避免胡蘿卜素在空氣中氧化或因高溫、紫外線直射等破壞。3.定容、點樣、層析后剪樣點等操作環節一定要迅速。說明與注意事項46第46頁，課件共83頁，創作于2023年2月（三）維生素D的測定

維生素D是指含有抗佝僂病活性的一類物質，具有維生素D活性的化合物約有l0種，其中最重要的是維生素D2、維生素D3。其結構為環戊烷多氫菲的衍生物。+環戊烷多氫菲菲環戊烷47第47頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（1）三氯化銻比色法

（2）紫外分光光度法

（3）薄層層析法

（4）氣相色譜法

（5）高效液相色譜法維生素D的測定方法

液相色譜法的靈敏度高，操作簡便，精密度高，分析速度快。是目前分析維生素D的最好方法。48第48頁，課件共83頁，創作于2023年2月1.三氯化銻比色法

在三氯甲烷溶液中，維生素D與三氯化銻結合生成一種橙黃色化合物，在500nm處有最大吸收，呈色強度與維生素D的含量成正比。原理

49第49頁，課件共83頁，創作于2023年2月（1）食品中維生素D的含量一般很低，而維生素A、維生素E、膽固醇等成分的含量往往都大大超過維生素D、嚴重干擾維生素D的測定，因此測定前必須經柱層析除去這些干擾成分。（2）操作時加入乙酰氯可以消除溫度的影響。（3）此法測定值是維生素D2和維生素D3的總量。說明及注意事項50第50頁，課件共83頁，創作于2023年2月（四）維生素E的測定

維生素E又稱生育酚，屬于酚類化合物。目前發現有8種。51第51頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（1）比色法

（2）熒光法

（3）氣相色譜法

（4）高效液相色譜法維生素E的測定方法比色法：操作簡單、靈敏度較高、特異性差熒光法：特異性強、干擾少、靈敏、快速、簡便高效液相色譜法：靈敏度高、操作簡便，精密度高，在短時間內可完成同系物的分離定量。52第52頁，課件共83頁，創作于2023年2月1.熒光法

樣品經皂化、提取、濃縮蒸干后，用正己烷溶解不皂化物。在295nm激發波長，324nm發射波長下測定其熒光強度，并與標準α-維生素E作比較，從而計算出樣品中維生素E的含量。原理53第53頁，課件共83頁，創作于2023年2月（1）樣品處理分離稱樣皂化瓶維生素C無水乙醇KOH溶液水分液漏斗乙醚水層乙醚層測定方法乙醚層經無水硫酸鈉過濾，氮氣流真空蒸干，正已烷溶解，定容。54第54頁，課件共83頁，創作于2023年2月激發波長：295nm發射波長：324nm激發狹縫：3nm發射狹縫：2nm樣品及標準溶液分別置于1cm比色杯，測定熒光激發光譜和發射光譜，讀取最大激發波長、最大發射波長下的熒光強度F。（2）熒光測定結果計算X---VE含量（mg/100g)55第55頁，課件共83頁，創作于2023年2月2.比色法維生素E能將高鐵離子還原為低鐵離子，低鐵離子與α，α′-聯氮苯發生顏色反應，在波長520nm處有最大吸收，可以進行比色測定原理56第56頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（1）在皂化時，用氮氣流保護，也可加入焦性沒食子酸作為抗氧化劑，防止維生素E的氧化。（2）此法反應沒有特異性，故處理前應將其他還原性物質除去。（3）也可采用4，7-二苯基-1，10-菲繞啉作為發色劑，其靈敏度比α，α′-聯吡啶高2.4倍。（4）維生素E的各種異構體與試劑的反應速度、呈色強度各不相同。（5）由于光能促進維生素E氧化，因此盡可能避光操作。說明及注意事項57第57頁，課件共83頁，創作于2023年2月三、水溶性維生素的測定

水溶性維生素B和C，廣泛存在于動植物組織中，飲食來源充足。但是由于它們本身的水溶性質，除滿足人體生理、生化作用外，多余的都會隨尿液排出。為避免耗盡，需要經常地由飲食來提供。58第58頁，課件共83頁，創作于2023年2月

水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多數有機溶劑。在酸性介質中很穩定，既使加熱也不破壞；但在堿性介質中不穩定，易于分解，持別在堿性條件下加熱，可大部或全部破壞。它們易受空氣、光、熱、酶、金屬離子等的影響；維生素B2對光，特別是紫外線敏感，易被光線破壞；維生素C對氧、銅離子敏感，易被氧化。59第59頁，課件共83頁，創作于2023年2月（一）維生素Bl的測定

維生素Bl又名硫胺素，通常以游離態，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色蔬菜和牛乳、蛋黃中含量較為豐富。分析方法：GB/T5009.84－2003中唯一的方法是硫色素熒光法。60第60頁，課件共83頁，創作于2023年2月（二）維生素B2的測定

維生素B2即核黃素。在食品中以游離形式或磷酸酯等結合形式存在。膳食中的主要來源是各種動物性食品，其中以肝、腎、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。分析方法：GB/T5009.85—2003中第一法為熒光法。第二法為微生物法。61第61頁，課件共83頁，創作于2023年2月（三）維生素C的測定

維生素C是一種己糖醛基酸，又稱作抗壞血酸。維生素C廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、獼猴桃、柑桔等食品中含量豐富。維生素C具有較強的還原性，對光敏感，氧化后的產物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進一步水解則生成2，3-二酮古洛糖酸，失去生理作用。62第62頁，課件共83頁，創作于2023年2月

測定維生素C的方法

2，6-二氯靛酚滴定法

2，4-二硝基苯肼法熒光法高效液相色譜法磷鉬藍雜多酸比色法碘量法63第63頁，課件共83頁，創作于2023年2月

2，6-二氯靛酚滴定法、碘量法、磷鉬藍雜多酸比色法：測定的是還原型Vc含量，該法簡便，也較靈敏，但特異性差，樣品中的其他還原性物質（如Fe、Sn、Cu等）會干擾測定，使結果偏高。對深色樣液2，6─二氯靛酚滴定法的滴定終點不易辨別。

2，4-二硝基苯肼比色法與熒光法：測定的是Vc的總量。

高效液相色譜法：可以同時測定還原型Vc和脫氫型Vc含量，具有干擾少，準確度高，重現性好，靈敏、簡便、快速等優點。64第64頁，課件共83頁，創作于2023年2月(一）2，6-二氯靛酚滴定法

用2％草酸提取植物組織中的Vc，而后用2，6-二氯靛酚標準溶液進行滴定，根據消耗的2，6-二氯靛酚標準溶液的體積，即可計算出樣品中的Vc含量。原理65第65頁，課件共83頁，創作于2023年2月2，6-二氯靛酚具有酸堿指示劑和氧化還原指示劑的作用氧化型的2，6-二氯靛酚在堿性溶液中呈藍色，在酸性溶液中呈淺紅色，還原型的2，6-二氯靛酚在溶液中呈無色。2，6-二氯靛酚的性質66第66頁，課件共83頁，創作于2023年2月

（1）2％草酸（2）1％草酸儀器植物組織搗碎機試劑（3）0.1mg/mLVc標準溶液（4）2，6-二氯靛酚溶液稱取2，6-二氯靛酚50mg于燒杯中，加入200mL含52mg碳酸氫鈉的熱水中，待冷后置于冰箱中過夜，次日過濾于250mL棕色容量瓶中，定容。67第67頁，課件共83頁，創作于2023年2月標定：吸取Vc標準溶液l0mL于三角瓶中，立即用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈淺紅色，并且30s不褪色，記錄消耗的2，6-二氯靛酚溶液的體積。做空白實驗。計算出1mL2，6-二氯靛酚溶液相當于Vc的mg數（T）。

68第68頁，課件共83頁，創作于2023年2月稱取洗凈、擦干的新鮮果蔬一定量于植物組織搗碎機中，加等量的2％草酸，搗成勻漿稱取勻漿10~20g，用2％的草酸35mL轉移到100mL容量瓶中，最后用1％草酸定容，定容時若泡沫較多，可加1~2滴辛醇消除，搖勻，過濾，濾液備用。操作步驟（1）樣品的處理69第69頁，課件共83頁，創作于2023年2月為什么在制備勻漿時用2%草酸，定容時用1%草酸？

因為2%草酸具有抑制抗壞血酸氧化酶的活性，而1%草酸沒有。70第70頁，課件共83頁，創作于2023年2月吸取濾液10mL于三角瓶中，立即用2，6-二氯靛酚進行滴定至溶液呈淺紅色，并且30s不褪色，記錄消耗的2，6-二氯靛酚溶液的體積。（3）空白實驗（2）樣液測定71第71頁，課件共83頁，創作于2023年2月結果計算X---Vc含量（mg/100g)72第72頁，課件共83頁，創作于2023年2月

1.操作要盡可能快，并防止與鐵、銅器具接觸。

2.草酸與樣品提取液避免日光直接照射。

3.當樣液具有顏色時可加少量白陶土脫色。

說明與注意事項73第73頁，課件共83頁，創作于2023年2月（二）2，4-二硝基苯肼法

樣品中還原型Vc經活性碳氧化為脫氫型Vc，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色的脎，根據脎在硫酸溶液中的含量與總Vc含量成正比，在500nm下進行比色測定。原理74第74頁，課件共83頁，創作于2023年2月

溫水浴鍋可見-紫外分光光度計植物組織搗碎機

儀器75第75頁，課件共83頁，創作于2023年2月試劑（1）4.5mol/L硫酸（2）硫酸（9：1）

（3）2%2，4-二硝基苯肼（4）1%草酸溶液（5）2%草酸溶液