第七章生物可降解塑料1第一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一第一節塑料廢物污染和可降解塑料二十世紀七十年代以來塑料工業得到迅猛的發展，無論是工業、農業、建筑業，還是人們的日常生活無不與塑料密切相關。化學合成塑料在自然環境中很難分解，亦不會被腐蝕，燃燒處理又會產生有害氣體，塑料垃圾對環境造成了巨大的危害。第二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一普通塑料對環境污染的特點成分為合成樹脂(1)污染范圍廣(2)污染物增長量快。全世界每年對塑料的需求量為1億噸。美國專家估計每10年產量將增加1倍。1995年我國的塑料需求量為600萬噸，其中對環境有威脅的地膜為88萬噸，包裝用品為150-200萬噸。美國、日本的塑料垃圾占垃圾總量的7%。第三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一普通塑料對環境污染的特點-續(3)處理難。塑料具有耐酸堿、抗氧化、難腐蝕、難降解的特性，埋地處理百年不爛；燃燒時產生大量有毒氣體，如HCl、SOx、CO等。第四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一普通塑料對環境污染的特點(4)回收利用難。塑料制品種類多，填料、顏料多樣，難以分揀回收再利用。(5)生態環境危害大。地膜降低耕地質量，農作物植株矮小，抗病力差。第五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一研究和開發生物可降解塑料已迫在眉捷用可生物降解塑料代替部分石油化工合成塑料，禁用某些塑料制品如意大利已立法規定自1991年起所有包裝用塑料都必須生物可降解，我國也已開始考慮禁用塑料方便餐盒等不可降解的塑料制品。生物可降解塑料第六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一國內外出現的生物可降解塑料PCL-聚已內酰胺;PVA-聚乙烯醇;PE-聚乙烯第七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一生物可降解塑料的特點工藝簡單生產過程污染輕生物可降解性和生物可相容性可進行高分子材料的結構調整：控制營養、環境條件第八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一第二節、PHAs的生物合成與應用采用微生物發酵法生產的聚-β-羥基烷酸(簡稱PHAs)，成為應用環境生物學方面的一個研究的熱點聚-β-羥基丁酸——PHB3-羥基丁酸與3-羥基戊酸的共聚物——P(3HB-co-3HV)或PHBV第九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs除具有高分子化合物的基本特性，如質輕、彈性、可塑性、耐磨性、抗射線等外，還具有生物可降解性和生物可相容性。PHAs香波瓶100年９個月合成塑料PHAs原料降解第十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一一、PHAs的結構、物理化學性質和應用多種微生物在一定條件下能在胞內積累PHAs作為碳源和能源的貯存物。由于PHAs具有低溶解性和高分子量，它在胞內的積累不會引起滲透壓的增加，是理想的胞內貯藏物，比糖原、多聚磷酸或脂肪更加普遍地存在于微生物中。PHAs的通式可寫成：單體數目第十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一R為甲基時，單體為β--羥基丁酸(HB)；R為乙基時，單體為β--羥基戊酸(HV)；R為丙基時，單體為β--羥基已酸(HC)；R為丁基時，單體為β--羥基庚酸(HH)；R為戊基時，單體為β--羥基辛酸(HO)；R為已基時，單體為β--羥基壬酸(HN)；R為庚基時，單體為β--羥基癸酸(HD)；R為辛基時，單體為β--羥基十一酸(HUD)；R為壬基時，單體為β--羥基十二酸(HDD)；R多為不同鏈長正烷基，也可以是支鏈的、不飽和的或帶取代基的烷基第十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一聚合物命名R為甲基時，其聚合物為聚β--羥基丁酸(PHB)R為乙基時，其聚合物為聚β--羥基戊酸(PHV)在一定條件下兩種或兩種以上的單體還能形成共聚物，其典型代表是3HB和3HV組成的共聚物P(3HB-co-3HV)。第十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一每個PHAs顆粒含有數千條多聚體鏈。這些多聚物的物理化學性質和機械性能如韌度、脆性、溶點、玻璃態溫度和抗溶劑性等與單體的組成有極大的關系。例如PHBV共聚物中β－羥基戊酸組分的增加可使熔點從180℃(PHB均聚物)降至75℃(PHBV共聚物中HV組分的摩爾分數為30~40%)。PHAs的結構、物理化學性質HV-β--羥基戊酸第十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一大多數有關細菌PHAs的物化性質的研究是針對PHB和PHBV兩種聚合物進行的。PHB是高度結晶的晶體，結晶度的范圍在55－80%，其在物理性質甚至分子結構上與聚丙烯(PP)很相似，例如熔點、玻璃態溫度、結晶度、抗張強度等，而比重大、透氧率低和抗紫外線照射以及具有光學活性、阻濕性等則是PHB的優點，見表7-2-1。PHAs的結構、物理化學性質-續第十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一第十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHB較脆和發硬，但可通過與適量HV共聚而補償。隨著PHBV中HV組分的增加，聚合物的勁度降低而韌性增加，且共聚物的熔點隨著HV組分的增加而降低，使得較易對其進行熱加工處理。單體4HB的聚合物或3HB與4HB的共聚物P(3HB-co-4HB)則是高彈體，且其生物降解的速度比均聚PHB或PHBV更快。PHAs的結構、物理化學性質-續HV-β--羥基戊酸HB-β--羥基丁酸第十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHB的工業化應用主要存在兩個缺點PHB較差的熔化穩定性，其分解溫度約為200℃，該溫度與其熔點相近(約175℃)；可通過在發酵過程中加入3HV的前體合成PHBV共聚體或將PHB與其它多聚物相混合使用來解決；在環境條件下貯存數日后，PHB易發脆。PHB的老化問題可通過簡單的淬火處理來較大程度地解決。第十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一思考題含有PHAs的微生物能通過什么染料鑒別？能利用糖蜜生產PHB的最有效菌株是什么？工業生產PHAs的微生物菌種需要考慮哪些因素？目前報道利用葡萄糖基質生產PHB的最高記錄是多少？一般發酵過程分為哪兩個階段？第十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的應用shampoobottlesbicyclehelmet

第二十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一二、PHAs的生物合成合成PHAs的主要微生物合成PHAs的主要基質PHAs的代謝途徑與調控第二十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的生物合成一合成PHAs的主要微生物1PHAs的發現及形成機制

PHB最初由Lemoigne于1925年首先發現。從巨大芽孢桿菌（Bacillusmegaterium)分離鑒定。闡明該菌形成芽孢時產生PHB。

20世紀50年代，發現PHB的生成量隨培養基中碳氮比的增加而增加第二十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

能產生PHAs的微生物分布極廣，包括光能和化能自養及異養菌計65個屬中的近300種微生物。目前研究的較多的微生物：產堿桿菌屬(Alcaligeneseurophus,現在更名為Ralstoniaeutropha)假單胞菌屬(Pseudonomas)甲基營養菌(Methylotrophs)固氮菌屬(Azotobacter)紅螺菌屬(Rhodospirilum)（一）合成PHAs的主要微生物第二十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一活性污泥中微生物產生的PHB第二十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一表7-4各種微生物利用不同碳源合成PHVs的情況及水平比較

第二十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一選擇工業生產PHAs的菌種考慮的因素：能利用廉價碳源的能力生長速率問題多聚物合成速率在細胞內最大量積累多聚物的能力第二十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一英國ICI公司進行考察，發現：固氮菌：產生多糖，PHB的比產率降低，技術問題。甲基營養菌：PHB產率中等。真養產堿桿菌：生長快，易培養、胞內PHB含量高、聚合物分子量大并能利用各種較經濟的能源。最終選擇了——

真養產堿桿菌（A.eutrophus）ICI——ImperialChemicalIndustries帝國化學工業公司第二十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一真養產堿桿菌(Ralstoniaeutropha)為革蘭氏陰性的兼性化能自養型細菌積累PHB可達細胞干重的90%以上能利用糖加丙酸或戊酸產生P(3HB-co-3HV)改變基質該菌還能將4HB和5HV結合到3HB的結構中去，形成4HB或5HV單體與3HB的共聚物。采用帶有真養產堿桿菌PHB合成基因的重組大腸桿菌(E.coli)。工業化生產PHAs的微生物第二十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一帶有A.eutrophusPHB合成基因的重組E.coli成為新的選擇！！A.eutrophus重組E.coli1生長快，容易培養（培養條件簡單）2胞內聚合物含量高3聚合物分子量大4提取相對較困難5生產共聚物較容易，易調節共聚比6分子量分布控制較難7已有工業化產品1發酵周期短2胞內聚合物積累量大3胞內無聚合物降解酶，分子量大4易于提取5胞內聚合物顆粒大、結晶度高6能利用多種碳源7在復雜培養條件下，胞內聚合物才能高積累。8有較成熟的高密度細胞培養技術生產PHB(V)的A.eutrophus

和重組E.coli特點第二十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一二合成PHAs的主要基質1糖質碳源2甲醇3氣體（H2、CO2、O2

）4烷烴及其衍生物第三十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一1糖質碳源

葡萄糖A.eutrophus的變異株利用葡萄糖已用于工業生產PHB。Kim等人采用細胞密度培養的方法，50h細胞濃度達164g/L，干細胞中PHB含76％，PHB生產強度為2.42g/(L.h)是目前世界上已報道的最高記錄.第三十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一重組E.coli

利用豐富酵母膏、蛋白胨的葡萄糖培養基培養，42h細胞濃度達117g/L，PHB占細胞干重76％，PHB生產強度2.11g/(L.h)降低成本，用合成培養基培養35h，細胞濃度為71.4g/L，PHB干重22.8％。即在合成培養基上不能大量積累PHB（乙酰CoA不足）。在合成培養基上加有機氮源，改進方法，細胞濃度達116g/L，PHB干重達62.2％。第三十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

蔗糖和糖蜜帶有穩定高拷貝數的pSYL104質粒的重組E.coli

能利用蔗糖生產PHB。在含蔗糖的合成培養基中采用恒定pH的分批補料方式培養48h，細胞濃度達124.6g/L,PHB濃度34.3g/L。加有機氮可以改善。利用糖蜜原料有困難：雜質多，PHB難積累。需精制后使用。第三十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一2、甲醇甲醇是最便宜的基質之一，ICI擁有生產甲醇單細胞蛋白的技術經驗，曾考慮用甲醇作基質生產PHB。甲醇菌積累PHB含量不高，PHB回收成本大，獲得的PHB的分子量較小，故放棄該路線。但可以作為尋求新的菌種和開發更有效的培養方法的途徑。第三十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一第三十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一3、氣體H2/CO2/O2真養產堿桿菌等一些爆鳴氣細菌能利用H2/CO2/O2產生PHB，其中H2作為能源，CO2是碳源。以H2作為基質按其價格和產率而言(見表1)在經濟上是劃算的，且H2又是一種干凈的可再生資源。可以同時解決兩個嚴重的環境污染問題：溫室效應及廢棄的非降解塑料對生態環境的危害。安全性問題：解決混合氣體爆鳴的安全問題和氣體的循環利用問題。控制基質氣相中氧的濃度低于氣體爆炸的下限(6.9%)是安全的。第三十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一4、烷烴及其衍生物假單胞菌能利用中等鏈長的烷烴或其衍生物醇、酸等產生中等鏈長羥基烷酸的共聚物(PHAMCL)，共聚物中單體的組成與基質碳架的長度有關。以辛烷作基質連續培養食油假單胞菌(P.oleovorans)，穩定態細胞濃度11.6g/l，PHA的生產強度為0.58g/L·h，第三十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一（三）PHAs的代謝途徑與調控PHAs的產生機理微生物在碳源過量而其他營養如氮、磷、鎂或氧不足時，積累大量PHAs作為碳源和能源的貯存物，或作為胞內還原性物質還原能力的一種儲備。當限制性營養物再次被提供時，PHAs能被胞內酶降解后作為碳源和能源利用。第三十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

胞中積累的PHAs存在形式以單個粒子的形態存在，每個細胞含有的顆粒數量的大小隨微生物種類而不同，在Ralstoniaeutropha中，每個細胞含有8-10個顆粒，每個顆粒直徑大小為0.2-0.5μm；以非晶體形式存在。具有高度的折光性，顆粒外面包裹著一層膜，沒有生物膜那樣的典型雙層結構，膜中含有PHAs合成酶的降解酶系統。第三十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一ScanningelectronmicroscopeofPHBgranulesinRalstoniaeutropha第四十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一補料分批培養45h收獲的菌體

細胞的電鏡照相第四十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的代謝途徑

不同微生物合成PHAs的途徑不同，基質不同其合成途徑也有差異(圖7-2)。①真養產堿桿菌及多數細菌從糖合成PHB；②深紅紅螺菌從糖合成PHB；③食油假單孢菌等從鏈烴、醇及酸合成具有與基質鏈長有關的HA單位的PHAs；④一株產堿桿菌從長鏈偶碳脂肪酸合成PHB；⑤銅綠假單孢菌等從糖質碳源(如葡萄糖酸)合成具中鏈HA單位的PHAs；⑥真養產堿桿菌等利用糖加丙酸合成PHBV。HA-羥基烷酸第四十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一A第四十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的生物合成和降解同時存在的丁酰CoA第四十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一基因重組細菌20世紀80年代后期開始將重組DNA技術應用于生物合成PHB，來自于多種細菌的PHA生物合成酶——PHA生物合成途徑的關鍵酶，已被在分子水平進行了詳細的研究，PHA生物合成酶基因已被克隆成功。3個實驗室獨立地將真養產堿桿菌H16的PHB生物合成基因phbA、phbB和phbC克隆并在大腸桿菌中表達。第四十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一基因重組細菌研究發現，在真養產堿桿菌中，PHA合成酶的結構基因排列在稱為phbC-A-B的一個操縱子上，分別編碼PHA合成酶、β-酮基硫酯酶和依賴于NADPH的乙酰乙酰CoA還原酶(見圖7-4)。第四十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一三、PHAs的發酵生產PHAs實現大規模工業化生產的主要障礙是生產成本。英國帝國化學公司(ICI)認為影響PHAs生產成本的主要因素有菌種原料操作方式提取方法第四十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一因而降低PHAs的生產成本主要措施(1)采用廉價基質(如CO2、H2和O2，甲醇，乙醇，葡萄糖及來自農業廢物的有機酸等)和提高產物對基質的產率系數，降低發酵原材料的成本；(2)提高生產強度(如選育高產菌株、采用合適的發酵生產方式等)，以降低操作成本；(3)改進提取、純化技術(如不采用價格昂貴的有機溶劑、簡化操作等)，以降低提取成本。第四十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的流加發酵選定了較適宜的菌種、基質和提取方法后，要進一步降低PHAs的生產成本，最主要的關鍵在于采取適當的發酵方式，以獲得高的產物轉化率、高的產物濃度。采取適宜的發酵生產方式是提高聚合物的生產率和改進其質量的關鍵。第四十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一PHAs的流加發酵

在PHAs的生產中，通常采用分批發酵法和流加發酵法，有時用連續培養法來獲得高的生產強度。由于真養產堿桿菌只有在某種營養成份氮、磷或氧等缺乏而碳源過量的不平衡生長條件下才能大量積累PHAs，一般可將發酵過程分成兩個階段來進行控制：第一階段為菌體細胞的形成階段，在此階段微生物利用基質形成大量菌體，而多聚體PHAs的積累量很少；第二階段為多聚體形成階段，當培養基中某種營養耗盡時，細胞進入PHAs形成階段，在此階段PHAs大量形成而菌體細胞基本上不繁殖。第五十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一采用流加發酵法進行PHAs的生產時，可以在某些必須的營養成分成為生長限制性因素之前，對其進行定量流加，延長細胞的對數生長期，從而可以獲得較高的菌體濃度。第五十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一減少菌體細胞在生長階段積累多聚體，也需通過流加法來控制，培養液中氨離子濃度不小于200mg/L，否則會降低共聚體的最終產率。在多聚體形成階段，限制氮源能刺激細胞積累PHAs，但氮源的完全缺乏會極大地損害微生物細胞的合成活性，所以將在PHAs合成階段以較低的速率限量流加氮源。與分批發酵中氮源完全缺乏相比，流加發酵細胞中的PHAs含量增加更快。PHAs的流加發酵第五十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一此外，與傳統的分批發酵相比，流加發酵通常具有染菌和退化的幾率小，可以獲得較高的轉化率，對發酵易實現優化控制等優點。第五十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一1、采用流加培養法生產PHB（1）選擇限制培養基中的氮源作為流加控制的手段，可以提高PHB產率；（2）控制碳氮比相當重要。第五十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一2、采用流加培養法生產共聚物P(HB-CO-HV)

聚羥基烷酸（PHAs）是一類具有廣泛工業應用價值的耐熱塑料，某些共聚物PHA比均聚物PHB具有更有用的熱機械性能，如PHB較脆和發硬，而HB和HV形成的共聚物PHA比PHB的硬度降低而韌度增加。第五十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一在共聚物P(HB-CO-HV)的生產過程當中，流加發酵比分批發酵具有明顯優勢。丙酸和戊酸是生產共聚物P(HB-CO-HV)所必需的基質，由于這些有機酸對菌體細胞具有一定的毒性，故采用簡單的分批發酵不可能獲得高產，采用流加培養法，可以避免由于培養基中有機酸的積累而使細胞活力受到損害，從而達到提高P(HB-CO-HV)產率的目的。第五十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一另外為了減少菌體細胞在生長階段積累多聚體，也需通過流加的方法來控制培養液中銨離子濃度不小于200mg/L，否則會降低共聚體的產率。第五十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一（三）流加培養條件對多聚體相對分子量的影響多聚體的相對分子量常常影響其質量和生物降解的速度。不同用途對生物可降解多聚體的平均相對分子質量大小要求不同，一般來說平均相對分子質量大且相對分子質量分布范圍窄的多聚體具有更廣泛的工業應用前景，并且提取也較為方便。第五十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

多聚體的平均相對分子量大小受流加培養條件的影響。當培養條件恒定時，其平均相對分子量也保持相對恒定，因而只要控制適宜的流加培養條件，就可以將相對分子量控制在所需的范圍之內。第五十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

對于共聚物P(HB-CO-HV)而言，由于大多數微生物即使在氮源和磷等因素不受限制的細胞生長階段也能在胞內積累少量的PHB，因而在加入任何能激發其形成共聚體的基質時，菌體胞內已含有一些均聚物PHB，因而得到的是各種HV單體含量的共聚體的混合物。第六十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

為了得到更均質的共聚體，在共聚物P(HB-CO-HV)的積累階段開始時，應先使培養物處于碳源饑餓狀態，這樣使細胞內源PHB的量大大降低，得到的共聚物也就較為均一。第六十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一另外，共聚體中HB/HV單體比例依賴于流加過程中糖/丙酸或者丁酸/戊酸的比例，且基質流加速率應小于其最大可能的利用速率，以避免對細胞有毒性的基質的積累，確保產生的共聚物具有恒定的HB/HV比例。第六十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一第四節PHAs的提取PHB的提取涉及到兩個方面的問題：一是方法的合理性，主要表現在提取率、產物的純度，提取過程是否對PHB的結構產生影響，以及是否方便操作，預后處理是否復雜、環境是否污染等方面。二是過程的經濟性，表現在提取的材料的費用、能量的消耗和設備的投資等。第六十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一四、PHAs的提取技術有機溶劑法次氯酸鈉提取法酶法表面活性劑-次氯酸鈉法其他方法第六十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一1.有機溶劑法對于由真養產堿桿菌(Ralstoniaeutropha)生產PHB，研究初期通常采用的提取方法是有機溶劑法。包括:氯仿、二氯乙烷、1,1,2—三氯乙烷、乙酸酐、碳酸乙烯酯及碳酸丙烯酯等。原理：有機溶劑一方面能改變細胞壁和膜的通透性，另一方面能使PHB溶解到溶劑中，而非PHB的細胞物質(NPCM)不能溶解，從而將PHB與其它物質分離開來。具體操作步驟如圖7-5所示。第六十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一圖7-5有機溶劑提取PHB的過程示意圖第六十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一(1)當溶劑中含有超過5%(w/v)的PHB時，溶液變得很粘，要去掉細胞的殘余物就變得很困難；(2)提取率難以達到很高；(3)使用大量的有機溶劑；(4)造成嚴重環境污染，操作不便。優點：引起PHB的降解非常小，得到PHB的純度非常高。因此，用有機溶劑提取PHB通常作為一種實驗室方法。有機溶劑的方法的缺點第六十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一2次氯酸鈉提取法次氯酸鈉能夠破胞且對細胞中的非PHB的細胞物質的消化很有效，因而用該方法破胞所得產品的純度較高、提取速度快，避免了有機溶劑提取過程中繁瑣的前、后處理工作。但是PHB分子量只有原來的一半。具體操作過程見圖2。第六十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一圖2次氯酸鈉提取PHB過程示意圖第六十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一次氯酸鈉提取法優點：不使用大量的有機溶劑。缺點：次氯酸鈉對PHB分子有嚴重的降解作用，因而所獲得的PHB的分子量較小。第七十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一次氯酸鈉/氯仿提取法

改進：根據氯仿提取時PHB純度高且被降解程度小，而次氯酸鈉對非PHB細胞物質消化很有效的優點，結合PHB疏水親油物質，而細胞膜具有親水性的特點的原理，發明了用分散的次氯酸鈉/氯仿提取PHB的方法。第七十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

冷凍干燥的菌體+次氯酸鈉+氯仿破壁離心分離氯仿相中加入非溶劑物質使PHB沉淀離心過濾分離烘干成品第七十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一在該方法中次氯酸鈉主要起破胞作用，而氯仿則對破胞產生的PHB起保護作用，因而不但可得到較高純度的PHB，而且PHB被次氯酸鈉降解的程度大大降低。同時由于破胞較完全，因而可以獲得較好的提取收率。第七十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一優點：提取率較高，得到的PHB的分子量較大。缺點：需要大量的有機溶劑，并且操作復雜，限制了工業化生產。第七十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一三、酶法基本原理與次氯酸鈉法相似，即讓大量的NPCM溶解而PHB不溶解，從而達到分離提純的目的。但是由于NPCM通常包括核酸、類脂物、磷脂、肽聚糖以及蛋白質等物質，因此實際上是通過多種酶的多步或協同作用來達到消化NPCM的目的。第七十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

單獨的使用酶來消化細胞中的雜質物質，所得到的PHB的純度不高，往往要結合其他的方法，例如再用表面活性劑處理，才能得到較高純度的PHB。該法包括細胞的熱處理、酶處理和陰離子表面活性劑處理等步驟，因此操作十分復雜。第七十六頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

由于細胞雜質成分比較復雜，特別是酶作用的條件比較苛刻，需要處理的步驟較多、操作較為復雜，因此酶法的應用在提取成本、過程放大方面受到了很大的限制。第七十七頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一四、表面活性劑/次氯酸鈉法

基本原理：當表面活性劑濃度較低時，其單個分子進入到細胞膜的磷脂雙層中；隨著表面活性劑濃度的增加，更多的表面活性劑分子結合到磷脂雙層中，細胞膜的體積就會不斷的增大；一旦磷脂雙層中的表面活性劑飽和，再增加表面活性劑就會使細胞膜收到破壞，表面活性劑與磷脂形成大量的膠團，胞內PHB物質釋放出來。第七十八頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

冷凍干燥菌體表面活性劑破胞離心過濾分離次氯酸鈉洗滌離心過濾分離水洗離心過濾分離烘干產品第七十九頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一

該方法能夠比較方便的實現在水相中提取PHB，這是它的突出優點，但要使用大量的表面活性劑，而且次氯酸鈉的使用不可避免的造成了PHB的降解。第八十頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一五、其他方法

基因工程技術重組大腸桿菌生產PHB的方法，用氨水從這類細胞中提取PHB就是其中的一種方法。第八十一頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一各種提取PHB的方法比較第八十二頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一（一）降解機制1胞內降解胞內PHB的代謝是個循環過程。圖7-9中第四步到第七步是降解過程。首先(第四步)胞內無定形PHB顆粒在解聚酶作用下降解，形成單體和二聚體的混合物。二聚體隨之在二聚體水解酶作用下形成單體。五、PHAs的生物降解

第八十三頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一圖7-9PHB的代謝過程第八十四頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一2胞外降解

聚—羥基丁酸(PHB)的胞外降解有兩種機制，在無菌條件下通過水解進行。這種機制對于PHB在醫療方面的應用(如作為藥物的緩適載體、手術縫線等)特別重要。在自然環境中，是酶降解機制。許多細菌和真菌可分泌外解聚酶，有些甚至可以利用PHB作為唯一碳源生長。第八十五頁，共九十五頁，編輯于2023年，星期一（二）PHB在環境中的降解影響PHB降解速度的因素較多包括環境類型：微生物種群及活力，水份，溫度塑料制品性質：厚度，表面組織形態，孔隙度，制品中的第二組分,如填充料、顏料在自然環境中，能降解PHB的微生物包括細菌、放線