演示文稿實驗一普通光學顯微鏡的結構與使用方法當前第1頁\共有38頁\編于星期四\3點（優選）實驗一普通光學顯微鏡的結構與使用方法當前第2頁\共有38頁\編于星期四\3點一、實驗目的和要求

了解顯微鏡的構造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用技術和保養措施學會簡易臨時玻片的制作方法和生物繪圖方法

當前第3頁\共有38頁\編于星期四\3點二、實驗內容在顯微鏡下練習觀察動、植物玻片標本。制作洋蔥鱗葉內表皮細胞臨時裝片，進行顯微鏡操作練習。在顯微鏡下觀察池塘水樣中的微小生物。當前第4頁\共有38頁\編于星期四\3點三、相關知識與實驗原理要知道的幾個重要的分辨率人眼：0.2mm/250mm光學顯微鏡：0.2um電子顯微鏡：0.2nm當前第5頁\共有38頁\編于星期四\3點

顯微鏡是觀察細胞的主要工具。根據光源不同，可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。1.光學顯微鏡普通生物顯微鏡由3部分構成：①照明系統：包括光源和聚光器。②光學放大系統：由物鏡和目鏡組成，是顯微鏡的主體。③機械裝置：用于固定材料和觀察方便，包括鏡臺(載物臺)、調節器和、物鏡轉換器(旋轉器)等。

尼康E-600顯微鏡

顯微鏡概述當前第6頁\共有38頁\編于星期四\3點普通光學顯微鏡的構造目鏡粗準焦螺旋鏡筒細準焦螺旋轉換器物鏡鏡臂聚光器反光鏡鏡座當前第7頁\共有38頁\編于星期四\3點2.熒光顯微鏡

尼康E800熒光DIC顯微鏡

熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍色）

當前第8頁\共有38頁\編于星期四\3點3.激光共聚焦掃描顯微鏡

LCSM照片藍色為細胞核，綠色為微管

當前第9頁\共有38頁\編于星期四\3點4.暗視野顯微鏡

darkfieldmicroscope聚光鏡中央有擋光片，視野背景是黑的，只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡，物體邊緣是亮的。可觀察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍。當前第10頁\共有38頁\編于星期四\3點把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處。環形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。5.相差顯微鏡當前第11頁\共有38頁\編于星期四\3點當前第12頁\共有38頁\編于星期四\3點Fourtypesoflightmicroscope●

Bright-fieldmicroscope:theimageobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughacellinculture●Dark-fieldmicroscope:thecellappearsasabrightobjectagainstadarkbackground●Phase-contrastmicroscope:visualizinglivingcells●Differential-interference-contrastmicroscope:visualizinglivingcells當前第13頁\共有38頁\編于星期四\3點

普通光學顯微鏡的基本結構普通光學顯微鏡的構造可分為兩部分：一為機械裝置，二為光學系統。機械裝置由鏡座、鏡筒、物鏡轉換器、載物臺、推動器、粗動螺旋和微動螺旋等組成。光學系統由目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、虹彩光圈等組成當前第14頁\共有38頁\編于星期四\3點組成光學放大系統照明系統機械和支架系統物鏡光源折光鏡聚光鏡濾光片目鏡顯微鏡的結構當前第15頁\共有38頁\編于星期四\3點普通光學顯微鏡基本構造當前第16頁\共有38頁\編于星期四\3點光學顯微鏡基本結構：1.照明燈(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.載物臺和切片夾(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推進器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物鏡(Objectives)6.粗細螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目鏡(Oculars)8.照相機等接口(Connectiontocamera,etc.)當前第17頁\共有38頁\編于星期四\3點1.物鏡

物鏡(objective)是光學顯微鏡成像系統中決定其分辨率或叫分辨本領的最關鍵部件。

物鏡標識當前第18頁\共有38頁\編于星期四\3點2.目鏡目鏡的作用是把物鏡放大的實象再放大一級，并把物象映入觀察者的眼中，實質上目鏡就是一個放大鏡。顯微鏡的分辨率能力是由物鏡的數值孔徑所決定的，而目鏡只是起放大作用。對于物鏡不能分辨出的結構，目鏡放的再大，也仍然不能分辨出。3.聚光鏡聚光鏡裝在載物臺的下方。小型的顯微鏡往往無聚光鏡，在使用數值孔徑0.40以上的物鏡時，則必須具有聚光鏡。聚光鏡不僅可以彌補光量的不足和適當改變從光源射來的光的性質，而且將光線聚焦于被檢物體上，以得到最好的照明效果。當前第19頁\共有38頁\編于星期四\3點顯微鏡的光學原理成像原理

光路：光源→虹彩光圈→聚光鏡→通光孔→標本（一定要透明）→物鏡→鏡筒→目鏡→眼。當前第20頁\共有38頁\編于星期四\3點當前第21頁\共有38頁\編于星期四\3點當前第22頁\共有38頁\編于星期四\3點顯微鏡的放大倍數當前第23頁\共有38頁\編于星期四\3點四、實驗器材

顯微鏡、擦鏡紙、鑷子、小剪、載玻片、蓋玻片、解剖針、表面皿、吸水紙、碘液、清水、香柏油、二甲苯。洋蔥鱗莖，棉花老根橫切玻片標本，池塘水樣

當前第24頁\共有38頁\編于星期四\3點五、實驗方法和步驟

（一）顯微鏡的使用1.取鏡和安放

置顯微鏡于平穩的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約為3~4cm。鏡檢者姿勢要端正。

（取、放顯微鏡時應一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或紀錄。）當前第25頁\共有38頁\編于星期四\3點

2.觀察前的準備工作

(1)觀察者要養成顯微鏡鏡檢的工作習慣，觀察時要雙眼同時睜開，一邊觀察一邊進行記錄或描繪。

(2)觀察時所用的材料、藥品和各種器具要預先準備好。

(3)顯微鏡在使用之前應檢查一下它的各個部件是否完整和正常，并對載物臺、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進行必要的清潔工作。然后進行合軸調節。當前第26頁\共有38頁\編于星期四\3點

3.低倍鏡的操作置顯微鏡于固定的桌上，接通電源，打開光源。將標本片放在載物臺上，用標本夾夾住，調節標本移動螺旋，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調節粗調螺旋，使物鏡（10×）與標本靠近，眼睛在測向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開雙眼向物鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細準焦螺旋，至目的物清晰為止。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部分，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄所觀察到的結果。當前第27頁\共有38頁\編于星期四\3點

4.高倍鏡的操作使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發現目的物后將它移至視野正中處。旋動轉換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，這說明原來低倍鏡并沒有調準，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調節。如果高倍鏡下觀察目的物有點模糊，調節細準焦螺旋，直到視野清晰。調節細準焦螺旋時要注意旋轉方向與載物臺上升或下降的關系，防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或載玻片。當前第28頁\共有38頁\編于星期四\3點5.油鏡的操作如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中，緩慢調節粗調螺旋使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。然后再用細準焦螺旋微微向上調（切忌不用粗準焦螺旋）即可。油鏡觀察完畢，用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。（應特別注意不要因在下降鏡頭時用力過猛，或者調焦時誤將粗調節螺旋向反方向轉動而損壞鏡頭及載玻片）當前第29頁\共有38頁\編于星期四\3點6.換片觀察完一個標本后，如果想要再觀察另一標本時，需先將高倍物鏡（或油竟鏡）轉回到低倍物鏡，取出標本，按放片的方法換上新片，即可觀察。千萬不可在高倍物鏡（或油鏡）下換片，以防損壞鏡頭。7顯微鏡使用后的整理

觀察結束后，調節光源到最小再關掉電源開關。調節粗調螺旋，使載物臺下降到最低，取下玻片，擦干凈鏡體，罩上防塵罩，然后放回原處。當前第30頁\共有38頁\編于星期四\3點六、洋蔥鱗葉內表皮細胞臨時裝片制作取一片干凈的載玻片，用滴管在其中央滴一滴蒸餾水。取洋蔥鱗莖，把它切成八瓣，剝下一片新鮮的肉質鱗葉，用刀片在其內表面劃一個邊長為5mm的正方形，然后用鑷子撕下正方形塊內表皮，將其置于載玻片上的水滴中（注意表皮的外面應朝上），如果內表皮發生卷曲，應細心用解剖針將其展平．蓋上蓋玻片，注意加蓋玻片時，應該用鑷子夾住蓋玻片一側，使蓋玻片另一側邊緣與水滴邊緣相接觸，然后慢慢放下，直到放平為止，這樣可使蓋玻片下的空氣逐漸被水擠出，以免產生氣泡，影響觀察。如果水太多浸出蓋玻片外，可用吸水紙將多余的水吸去把裝好的片子放在顯微鏡載物臺上，先用低倍接物鏡觀察，再換用高倍接物鏡觀察細胞的詳細結構。

當前第31頁\共有38頁\編于星期四\3點當前第32頁\共有38頁\編于星期四\3點七、池塘水樣中微小生物的觀察到綠色池塘中取出水樣，取一潔凈的載玻片，在其中央滴一小滴池塘水樣，蓋上蓋玻片，把裝好的片子放在顯微鏡載物臺上，先用低倍接物鏡觀察，再換用高倍接物鏡觀察微小生物的形態和細胞結構。當前第33頁\共有38頁\編于星期四\3點八、顯微結構圖的繪制

生物繪圖中繪出的圖要清楚，并正確的表示出形態構造的特點，繪圖注意事項如下：(1)繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。(2)圖的大小及在紙上分布的位置要適當。一般畫在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名稱的線條。各引出線條要整齊平列，各部名稱寫在線條右邊當前第34頁\共有38頁\編于星期四\3點(3)畫圖時先用輕淡小點或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準確。較長的線條要向順手的方向運筆，或把紙轉動再畫。同一線條粗細相同，中間不要有斷線或開叉痕跡，線條也不要涂抹。(4)繪出的圖要正確，觀察時要把混雜物、破損、重疊等現象區別清楚，不要把這些現象繪上。(5)圖的明暗及濃淡，應用細點表示，不要采用涂抹方法。點細點時，要點成圓點，不要點成小撇。(6)整個圖要美觀、整潔，還要特別注意準確性。當前第35頁\共有38頁\編于星期四\3點九、顯微鏡的保養及注意事項（1）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再取一張擦鏡紙，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一張新擦鏡紙將鏡頭上殘留的二甲苯擦凈。否則粘固透鏡的膠質會被二甲苯溶解，日久鏡片易移位脫落。（2）下降聚光器，打開虹彩光圈，使反光鏡垂直于鏡座，以免積聚灰塵。（3）用綢布將鏡身擦拭干凈（切不可用手擦拭），除去灰塵、油污、水汽，以免生銹長霉。當前第36頁\共有38頁\編于星期四\3點（4）使顯微鏡的各部件恢復回原位，下降鏡筒，使物鏡呈“八”字形置于載物臺上，然后將顯微鏡送回鏡箱中。（5）顯微鏡應存放在干燥陰涼的地方，不要放在強烈的日光下暴曬，霉雨季節應在顯微鏡箱內放置干燥劑（硅膠），如長時間不用，則光學部分應卸下放在干燥器中，以免受潮生霉。（6）顯微