氣郁證動物模型研究進展

【關鍵詞】氣郁證動物模型造模方法病理改變

絡氣郁滯是指絡氣輸布運行障礙，升降出入之氣機失常。由于循行于體內臟腑的“臟腑隸下之絡”已成為所在區域臟腑功能的重要組成部分，經絡之氣也隨其分布區域而體現為所屬臟腑的功能［１］。百病皆生于氣，生于郁，臨床上多由于情志抑郁不舒引起絡氣郁滯，絡氣郁滯主要是指肝主疏泄功能失調。基于絡氣郁滯、絡氣虛滯引起的絡脈自穩狀態功能異常與血管內皮功能障礙具有內在一致性，均為“脈絡-血管系統病”的始動因素并貫穿病變全過程，成為運用絡病理論研究血管病變的切入點［2］。為了建立絡氣郁滯－內皮功能障礙病證結合模型，研究中絡氣郁滯的模型多為肝郁證的模型，現將近年來有關肝郁證的動物模型研究作一綜述。

1造模方法

１．１藥物造模法

１．１．１艾葉煎液注射法現代藥理學研究發現，其成分艾葉油有擬腎上腺的作用，臨床口服大量艾葉可引起中毒性肝炎，還對中樞神經有興奮作用。湖南醫學院選用１９～２８ｇ的小鼠，腹腔注射艾葉煎液，用藥量為１２．８ｇ／，用藥４５～６０ｄ即出現肝郁癥狀：小鼠活動增加，興奮撕打，不易抓到［3］。

１．１．２腎上腺素皮下注射法和嵐等［4］用注射腎上腺素模擬“氣滯”復制急慢性血淤證模型，大劑量０．１％腎上腺素皮下注射，０．１ｍｌ／只１次，小劑量０．１％腎上腺素皮下注射，０．０１ｍｌ／只，１次／ｄ，連續７ｄ。一次大劑量注射Ａｄｒ模擬機體暴怒狀態，多次小劑量注射Ａｄｒ模擬較長時間情感不舒，均造成了大鼠血黏度增高，紅細胞變形能力降低，易于聚集。

１．２情志刺激造模法

１．２．１頸部帶枷法毛海燕［５］、劉蓮等［６］選用Ｗｉｓｔａｒ遠交系雌性大鼠為實驗對象，用２塊３．５cm×４cm×０．2ｃｍ的鋁片制成近似枷鎖型模具，套在大鼠的脖子上，模具影響了大鼠日間理毛、撓癢等活動，使其“郁怒而不得發”。在不影響其正常進食、飲水的情況下，從而引起大鼠情志變化，帶枷大鼠在造模初期表現為煩躁不安，抓咬模具，碰撞籠具，易激惹，但無自立、嘶叫等過激反應。７～１０ｄ后，模型大鼠反應和行為遲緩，精神萎靡不振，皮毛枯黃，眼睛瞇小，有眼眵，甚至目赤，糞便干、少、小，倦怠食少，與臨床肝郁證的表現基本相符。

１．２．２夾尾激怒法須惠仁［７］用夾尾刺激引發大鼠打斗的方法造模。他將雄性Ｗｉｓｔａｒ遠交系大鼠，體重３００～４００ｇ，３～７只同置于一籠中，用以紗布包裹尖端的止血鉗夾住其中的一只大鼠的尾巴，令其與其他大鼠打斗，進而激怒全籠大鼠，每次刺激３０ｍｉｎ，刺激１次／３ｈ，刺激４次／ｄ。大鼠被激怒后身體豎立對峙，前肢離地，互相嘶咬，隨刺激次數的增加，大鼠撕咬加劇，連續刺激２ｄ后大鼠間劇烈撕打減弱，飲水和吃食也明顯減少，甚至不思飲食，多呈困倦狀態，毛發變暗、枯黃，體重下降。

１．２．３捆綁法呂志平［8，9］喬明琦［10］采用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，體重為ｇ，高蕭楓［11］用ＳＤ大鼠，用繃帶細帶束縛其四肢，使之行走困難，并裝入飼養籠內，定時觀察并記錄大鼠狀態。初期大鼠表現為打斗、撕咬、尖叫等情緒過激行為。隨著造模時間的推移，上述過激行為逐漸減少，精神萎靡，胡須下垂，叫聲尖細，貼邊，扎堆及飲食、飲水量減少，伴大便稀溏，反應遲鈍，毛色失去光澤，明顯消瘦。趙益業等［12］、豐勝利［13］用健康雄性昆明小鼠，體重ｇ，制作肝郁模型，用醫用膠布束縛小鼠四肢限制其自由活動，放入自由活動小鼠在造模籠內加強致郁，連續捆綁７ｄ，肝郁證模型小鼠可見皮毛枯干，眼睛瞇小，有眼眵，糞便干，倦怠食少，爪甲紫暗，尾巴棕紅且有鱗片，活動減少，叫聲變細，反應遲鈍。

１．２．４束縛盒熊振芳等［14］用束縛盒，用硬塑料特制的束縛筒。該筒呈管狀，長約２５ｃｍ，筒口外徑７ｃｍ，內徑５ｃｍ，筒內前端置一直徑小于筒的內徑，并可以前后調節的無底、圓嘴的玻璃瓶，其瓶口為通氣口，后端為開關閘門。將Ｗｉｓｔａｒ大鼠單籠飼養，束縛于特制的束縛盒，３ｈ／ｄ，共３周，模型大鼠１％的蔗糖水攝取量減少。嚴燦等［15］選用Ｗｉｓｔａｒ大鼠，將造模大鼠置于自制的束縛制動筒內，通過移動插片而逐步縮小大鼠的活動空間，調節到其不產生強烈反抗的緊張程度，束縛制動１次／ｄ，每日開始時間及束縛制動時間不同，第１天為４ｈ，其后增加３０～６０ｍｉｎ／次，連續２周。造模大鼠在制動期間禁食、禁水。

１．２．５不可預知的慢性應激刺激方法金光亮等［１６］以不可預知的慢性應激刺激方法制作模型，刺激方法包括：斷食、水２４ｈ，各３次；冰水游泳５ｍｉｎ，共３次；４５℃熱環境５ｍｉｎ，共３次；１６０次／ｍｉｎ水平震蕩３０ｍｉｎ，共３次；夾尾刺激１ｍｉｎ，共３次；２４ｈ明暗顛倒，共３次。上述刺激１種／ｄ，隨機安排，使動物不能預知次日的刺激，刺激時間共３周。金光亮［１7］認為用此方法比較符合肝郁證的臨床發病學特征，蔗糖水消耗量減少可模擬肝郁證的核心癥狀。

１．３藥物合情志刺激造模法此法結合前兩種方法，目前采用的多為夾尾加腎上腺素注射法。楊冬花［１8］采用ＳＤ大鼠，雌雄各半，將大鼠用海綿鉗夾住大鼠的尾巴尖部，激怒大鼠，使之與其它大鼠保持相斗狀態，刺激４５ｍｉｎ／ｄ，同時每周給予每只大鼠腎上腺素注射液０．２ｍｇ皮下注射，造模時間為３０ｄ。鉗夾鼠尾后，大鼠前肢離地，與鄰近大鼠相互對峙，或追逐撕咬視野中所見大鼠或鼠籠，呼吸喘氣、豎耳、拱背、張牙舞爪，毛發豎起、小便失禁，毛發浸濕；１ｄ后，飲水、攝食減少，毛發枯糙、尿黃、神情萎頓但易激怒尖叫、對峙；１周后，活動逐漸減少，精神萎靡不振，蜷臥，嗜睡，反應遲鈍。

2肝郁證模型在循環、神經內分泌、免疫系統的病理改變

陳家旭［１9］認為，肝郁證是在抑郁、焦慮、悲痛等負性情緒心理應激狀態下，以高級神經中樞調節機制紊亂為前提，神經、內分泌、免疫、循環、消化、感覺、運動等多個系統的某些病理改變、病證表現的有機概括。

２．１肝郁證模型血液循環系統的病理改變血液的運行和津液的輸布代謝有賴于氣的升降出入運動，氣機的郁結會導致血行的障礙。實驗研究表明，肝郁能夠導致機體微循環障礙和血液流變學的改變。須惠仁［7］用夾尾法造肝郁模型中發現：肝郁大鼠的血小板的含量要比對照組高５８％，全血粘度、血漿比粘度明顯高于對照組，復鈣時間明顯延長，其相應的粘度上升率、紅細胞比容則明顯地減少，血沉顯著快于對照組。呂志平［8，9］用束縛法造模，測定大鼠模型血漿６－酮－前列腺素Ｆ１α明顯降低，血栓素Ｂ２明顯升高，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α／ＴＸＢ２比值明顯下降。李松濱等［20］用夾尾加腎上腺素的方法造模，發現模型組與生理鹽水組比較，全血粘度與血漿粘度及紅細胞聚集指數均明顯增高，說明血液粘滯性增大，血液流動性差。和嵐等［4］用注射腎上腺素模擬“氣滯”復制急慢性血淤證模型，注射Ａｄｒ后，紅細胞通過核孔濾膜時間延長，變形能力下降，低切度率下全血粘度增加，紅細胞變形指數、聚集指數均增高。

２．２肝郁模型神經內分泌系統的病理改變毛海燕等［5］用頸部帶枷法造模，觀察１周和４周的肝郁證大鼠中樞神經遞質變化，發現造模１周組各腦區５－ＨＴ無顯著變化，ＤＡ含量減少，造模４周組各腦區的５－ＨＴ含量比正常對照組明顯增多，ＤＡ含量顯著升高，經用逍遙散治療后降至正常。高蕭楓［11］用慢性束縛應激造模，發現模型大鼠腦內ＮＥ與ＤＡ的含量均明顯降低，應用逍遙散和柴胡治療后ＮＥ、ＤＡ含量明顯升高。熊振芳等［14］用束縛筒造模，發現模型大鼠ＡＣＴＨ增高。朱清靜等［21］用束縛應激方法建立肝郁證動物模型，發現應激時，血漿和下丘腦β－內啡肽均明顯升高，而柴胡疏肝散和腎氣丸均能降低應激導致的大鼠血漿和下丘腦β－ＥＰ的水平。王希浩［22］、黃保民［23］用加尾刺激激怒法制作模型，發現大鼠血清ＦＳＨ，ＬＨ，Ｅ２，Ｐ水平下降，Ｔ水平升高。陳家旭［24］用慢性束縛應激法，連續束縛７ｄ后大鼠大腦皮層的ＮＴ３開始下降，至２１ｄ模型組與正常對照組相比均有顯著下降；連續束縛７，２１ｄ后大鼠海馬ＣＡ１區的ＮＴ３與正常對照組相比積分光密度明顯降低。嚴燦等［25］用慢性束縛應激法，發現模型大鼠血漿皮質酮、ＡＣＴＨ以及下丘腦促腎上腺皮質激素釋放激素含量升高，說明下丘腦－垂體－腎上腺軸興奮性升高。嚴燦等［26］還發現應激大鼠血漿和下丘腦ＤＡ，５－ＨＴ含量明顯降低，血漿ＮＥ，Ｅ含量明顯升高，而下丘腦ＮＥ含量無明顯變化。血漿５－ＨＴ／ＮＥ，５－ＨＴ／Ｅ及下丘腦５－ＨＴ／ＮＥ均明顯降低。加味四逆散可以升高應激大鼠下丘腦和血漿中ＤＡ，５－ＨＴ含量，并能降低血槳中ＮＥ，Ｅ含量，升高下丘腦和血漿５－ＨＴ／ＮＥ以及血漿５－ＨＴ／Ｅ。腎氣丸、四君子湯及人參總皂苷雖然對有些指標有影響，但對心理應激的整體調節作用不如加味四逆散。

２．3肝郁模型免疫系統的病理改變劉蓮［6］用頸部帶枷鎖法造模，在實驗中發現肝氣郁結證大鼠免疫器官重量明顯減輕，Ｔ細胞亞群比例失衡；白細胞介素２水平降低，血漿皮質酮水平明顯升高。保神開郁沖劑能夠恢復肝郁所致大鼠的免疫抑制狀態，對維護神經－內分泌－免疫三大系統的功能穩定起著重要作用。趙益業等［12］發現肝郁造模組的動物脾淋巴細胞轉化率、溶血素水平低于正常組，白細胞介素２產生能力明顯受抑制。豐勝利［13］用慢性束縛法制作肝郁證小鼠，發現ＣＤ３、ＣＤ４細胞數量減少，ＣＤ４／ＣＤ８比值降低，血白細胞及淋巴細胞數量減少。楊冬花等［18］亦采用夾尾加腎上腺素注射法造模，在實驗中發現肝氣郁結證模型大鼠ＩＬ－４ｍＲＮＡ表達明顯降低，ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表達則明顯升高，Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞因子處于失衡狀態，Ｔｈ細胞向Ｔｈ１偏移。陳松［27］、許輝等［28］用夾尾加腎上腺素法制作肝郁證模型與脾虛證模型大鼠比較，ＩｇＧ的水平無明顯變化，ＩｇＭ的水平均降低，但肝郁證降低得更為明顯，柴胡疏肝散對ＩｇＭ的水平沒有影響，四君子湯對肝郁證與脾虛證ＩｇＭ的水平均有一定的升高作用，肝郁證Ｔ細胞轉化率顯著升高，而柴胡疏肝散可使之恢復正常，四君子湯對其無明顯影響，脾虛證Ｔ細胞轉化率顯著降低，四君子湯可使之恢復正常，而柴胡疏肝散對其則無明顯影響，肝郁證Ｂ細胞轉化率也表現為升高的趨勢，柴胡疏肝散和四君子湯均能使之恢復正常。

3結語

綜上所述，近年來肝郁證模型的研究取得了較快的發展，目前仍存在著幾個問題需要解決：①目前尚無肝郁證動物模型的統一制作及判定標準，不利于科學研究。②中醫的證是疾病的病因、病位及病邪性質的概括。藥物造模如艾葉油、腎上腺素等均造成了實質性肝臟的急慢性損傷，有學者認為不符合肝郁證的中醫理論，然而是否與臨床上藥物中毒或藥物的副作用或飲食、居住、工作環境的污染所造成的氣機郁滯相似。③隨著競爭的激烈，臨床上多為情志不暢郁而不發造成氣機郁滯，“怒則氣上”與“久怒成郁”和“情志不暢，郁而不發”之間有什么不同。④幾種造模方法所造成的動物模型在神經、內分泌、免疫、循環等系統方面是否存在差異。⑤肝郁證已經引起大鼠的循環、神經、內分泌、免疫等系統方面的改變，是否引起血管內皮功能的改變，值得探討。⑥肝郁證模型與氣滯血淤、肝郁脾虛證等模型存在哪些差異，特異性的指標是什么。這些問題均有待進一步深入研究。

筆者認為，中醫證候動物模型的研制方法應以中醫的理論為指導，既要符合現代醫學發病因素的特點，又要符合臨床自然發病的過程。應采取多種方法造模，研究各種造模方法之間的不同。制定出統一的肝郁證模型的造模方法和判定標準，促進科研水平的提高。研究肝郁證與氣滯血淤證、肝郁脾虛等證之間的區別，利用藥物來反證模型的制作，為建立病證結合模型打下基礎。

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