1第十一章-3

其他類型高效液相色譜法超高效液相色譜法UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC2特 點色譜柱填料一直向著更小顆粒，dp僅為1.7μm高壓，色譜儀輸液泵提供的輸出壓力可達140MPa

快速，常規高效液相色譜需要30min完成的樣品分析在超高效液相色譜儀上縮短為僅需5min高效，柱效達20萬塊/m理論塔板數3基本原理

dpH4結果

（一）比HPLC更高的分離度dpnR5結果

（二）比HPLC更高的分析速度柱長縮短會加快分離速度顆粒度越小，最佳流速也越大，進而可以通過提高流速來進一步加快分離速度6結果

（三）比HPLC更高的靈敏度更高的柱效、更窄的色譜峰寬，因為色譜峰變得更窄，峰高也就更高了。因此，UPLC技術在改善分離度的同時亦可提高檢測靈敏度7關鍵技術新型的色譜填料及裝填技術耐壓而且顆粒度分布范圍很窄的1.7μm顆粒填料超高效液相色譜儀泵：密封、高壓動力，精度高高速檢測器：非常高的采樣速度和非常小的時間常數；死體積要盡可能小；光學靈敏度8應 用體內藥物分析、中藥分析、代謝組學分析及其它一些生化領域先導化合物的篩選蛋白質組學研究天然產物的分析9第十一章-4

其他類型高效液相色譜法制備高效液相色譜法PreparativeHighPerformanceLiquidChromatography10與分析型HPLC比較目的：制備一定量的純化合物分析型HPLC制備型HPLC目的獲得樣品的定性和定量信息分離、富集和純化樣品組分特點進樣量夠檢測即可進樣量盡可能大，以得到更多的純品柱內徑1mm～5mm柱內徑1cm～10cm或更大柱填料5μm或更小柱填料7μm或更大輸液泵一般流量為1ml/min輸液泵流量大于10ml/min樣品在流動相中的溶解度通常不重要樣品在流動相中的溶解度很重要流動相的揮發性不重要流動相應具有揮發性理論基礎線性色譜非線性色譜11制備高效液相色譜分離方法的建立12（一）制備型HPLC分離條件的選擇1．柱效（n）色譜柱超載，但不能嚴重超載，否則柱效會類似于呈指數下降，其分離能力急劇下降甚至基本上沒有什么分離能力2．容量因子（k）容量因子不宜過高，一般控制在1~5這個范圍內就可以了，因為容量因子的增大是以時間和大量溶劑消耗為代價的13（一）制備型HPLC分離條件的選擇3．分離因子（α）固定相－分析型色譜柱中的填料最好與后面使用的制備型色譜柱的填料是同一型號的產品流動相－目標物與其最鄰近雜質達到盡可能大的分離度14（一）制備型HPLC分離條件的選擇4．樣品的溶解度

需要將大劑量的樣品溶解在有限量的流動相中pH值或者離子強度替代溶劑加熱樣品并提高色譜柱的柱溫添加表面活性劑

15（二）制備性分離設計1．峰接觸法增加待分離樣品的進樣量，直至待分離組分的色譜峰與最鄰近組分的色譜峰剛好接觸為止2.峰重疊法增大待分離樣品的進樣量，直至待分離組分的色譜峰與最鄰近組分的色譜峰發生重疊16（三）制備規模的制備性分離d1是分析柱的直徑d2是制備柱的直徑L1是分析型柱的長度L2是制備柱的長度17制備高效液相色譜儀高壓輸液泵一般流量需要30