第四節

黃酮類化合物的檢識與結構測定一、與標準品或與文獻對照PPC或TLC得到的Rf二、分析對比樣品在甲醇溶液中及加入酸、堿或金屬鹽類試劑后得到的UV光譜三、1H-NMR四、13C-NMR五、MS一、層析在黃酮類鑒定中的作用1.雙相紙層析(PPC)

苷類成分可采用雙向展開，

第一相展開采用醇性溶劑，如BAW系統；第二相展開用水性溶劑，如酸水

苷元則多采用醇性溶劑。

花色苷及其苷元，可用含鹽酸或醋酸的溶劑。黃酮類化合物的檢識和結構鑒定第一相展開采用醇性展開劑如:BAWn-BuOH:HOAc:H2O=4:1:5上層

TBAt-BuOH:HOAc:H2O=3:1:1

水飽和n-BuOH層析行為:Rf值:苷元>單糖苷>雙糖苷一般:苷元在0.70以上，而苷則小于0.7。分配作用第二相展開采用水性展開劑如：2~6%HOAc水溶液

3%NaCl水溶液

HOAc:濃HCl:H2O=30:3:10層析行為:連接糖鏈越長,Rf

越大(>0.5);

苷元Rf較小，有的留在原點。吸附作用ABCDABCD苷元苷元雙向PC

第I向醇性展開劑第II向水性展開劑（BAW、TBA、水飽和正丁醇）（2~8%HAc、3%NaCl、1%HCl）

正相色譜

反相色譜固定相（水）極性>流動相（**有認為是吸附原理）？？

Rf規律：極性小的化合物Rf大極性大的化合物Rf大

苷元（0.7以上）>單糖苷>雙糖苷（0.7以下）苷元中，平面型分子>非平面型分子Rf規律與左邊相反母核相同，2-OH>3-OH>4-OH>5-OH黃酮

苷元的分離鑒別黃酮苷及花色素類黃酮類化合物的檢識和結構鑒定紙層析（PC）：采用雙向紙層析。

苷元:若用水性展開劑

平面型分子:

黃酮(醇)、查耳酮的Rf小,幾乎留在原點不動(Rf<0.02);

非平面型分子:

二氫黃酮(醇)、二氫查耳酮的Rf大,因親水性較強(Rf0.10-0.30)。

層析檢查方法：

①觀察熒光,用紫外光燈照射看到有色斑點，NH3處理產生明顯的色變。

②用2%AlCl3甲醇液噴霧,UV燈下呈亮黃色熒光斑點。色譜鑒別何為雙相紙層析雙相紙層析在黃酮鑒別中的應用分析不同黃酮結構Rf值的大小復習還原反應金屬絡合反應硼酸絡合反應堿液中反應結構紫外光譜二、UV光譜在黃酮結構鑒定中應用二、紫外光譜在黃酮類鑒定中的應用確定黃酮母核類型及羥基位置。一般程序：

①測定樣品在甲醇中的UV譜以了解母核類型；②在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測UV譜和可見光譜

以了解3,5,7,3’,4’有無羥基及鄰二酚羥基；③苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測苷元的

UV譜以了解糖的連接位置。（一）黃酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜

苯甲酰基帶II：220~280nm桂皮酰基帶I：300~400nmOO不同類型黃酮的UV基本特征兩者UV光譜圖形相似，但帶I位置不同。整個母核上氧取代程度越高，則帶I將向長波方向位移（紅移）。

黃酮黃酮醇不同類型黃酮的UV基本特征帶II吸收峰為主峰，

帶I很弱，常在主峰的長波方向有一肩峰。c.

d.245-270nm270-295nm異黃酮、二氫黃酮二氫黃酮醇不同類型黃酮的UV基本特征共同特征是帶I很強，為主峰而帶II則較弱，為次強峰。帶I的位置不同。查耳酮橙酮類峰形帶II（240~285nm，苯甲酰系統）帶I（300~400nm，桂皮酰系統）類型240-285304-350黃酮類328-385黃酮醇類（3-OR）352-385黃酮醇類（3-OH）245-270300-400異黃酮類270-295二氫黃酮220-270340-390查耳酮類370-430橙酮類不同類型黃酮的UV基本特征加入診斷試劑后引起的位移及結構測定常用的診斷試劑：甲醇鈉(NaOCH3)

醋酸鈉(NaOCOCH3)

醋酸鈉/硼酸(NaOCOCH3/H3BO3)

三氯化鋁(AlCl3)

三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl)（1）甲醇鈉：（2）醋酸鈉：（3）醋酸鈉/硼酸：醋酸鈉/硼酸譜帶Ⅰ紅移12～30nm，示B環有鄰二酚羥基；帶Ⅱ紅移5～10nm，示A環有鄰二酚羥基。（4）三氯化鋁/鹽酸4.AlCl35.AlCl3/HCl：

3-OH，5-OH，鄰二酚OH時，可與Al3+絡合，引起吸收峰紅移。鋁絡合物穩定性：

黃酮醇3-OH＞黃酮5-OH＞鄰二酚OH（4）三氯化鋁/鹽酸（4）三氯化鋁/鹽酸（4）三氯化鋁/鹽酸診斷試劑對黃酮類化合物UV譜圖的影響及結構的關系診斷試劑帶II帶I歸屬NaOCH3紅移40-60nm,強度不降示有4’-OH紅移50-60nm,強度下降示有3-OH,

但無4’-OH吸收譜隨時間延長而衰退示有對堿敏感的取代方式NaOAc（未熔融）紅移5-20nm示有7-OHNaOAc（熔融）紅移40-65nm強度下降示有4’-OH吸收譜隨時間延長而衰退示有對堿敏感的取代方式NaOAc/H3BO3紅移5-10nm示A環有鄰二酚羥基，但不包括5,6-二羥基紅移12-30nm示B環有鄰二酚羥基診斷試劑帶II帶I歸屬AlCl3及AlCl3/HClAlCl3/HCl譜圖

=AlCl3譜圖

示結構中無鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖

≠AlCl3譜圖

示結構中可能有鄰二酚羥基帶I或Ia紫移30-40nm示B環有鄰二酚羥基帶I或Ia紫移50-65nm示A、B環上均有鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖

=CH3OH譜圖

示無3-或5-OHAlCl3/HCl譜圖

≠CH3OH譜圖

示可能有3-或5-OH帶I紅移35-55nm示只有5-OH帶I紅移60nm示只有3-OH帶I紅移50-60nm示可能同時有3-和5-OH帶I紅移17-20nm除5-OH外，還有6-含氧取代診斷試劑對黃酮類化合物UV譜圖的影響及結構的關系實例

從中藥柴胡中得到山奈苷，酸水解PPC檢查出鼠李糖，該苷及苷元的UV[λmax(nm)]譜如下，解析結構。山奈苷

帶II帶IMeOH265345NaOMe265388Δ43，4′-OH，無3-OHAlCl3275399Δ54，5-OHAlCl3/HCl275399AlCl3=AlCl3/HCl：無鄰二酚羥基NaOAc265399帶II無紅移，無7-OH山奈苷元

帶II帶IMeOH265367NaOMe276424（分解）

帶IⅡ紅移，且分解，有3，4’-OHAlCl3270424Δ54，5-OHAlCl3/HCl269424AlCl3=AlCl3/HCl：無