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文檔簡介
緒論一、組織學與胚胎學的研究內容二、組織學與胚胎學的發展簡史三、組織學與胚胎學的研究技術四、組織學與胚胎學的常用術語五、組織學與胚胎學的學習方法一、組織學與胚胎學的研究內容組織學(histology):研究機體微細結構及其相關功能的科學。胚胎學(embryology):研究個體發生、生長、發育機制的科學。了解內容自學二、組織學與胚胎學的發展簡史三、組織學與胚胎學研究技術
問題
解決方法
觀察對象太小
放大
顯微鏡
觀察對象無色,無反差
染色(HE染色)
觀察對象生化成分不同
細胞化學、免疫組織化學
觀察對象是活體
培養1、組織切片技術
石蠟切片制作技術:取材和固定脫水和透明浸蠟和包埋切片和貼片染色與封固H&Estaining
Hematoxylin蘇木精:basicdye,purple-blueEosin伊紅:aciddye,pink二甲苯1二甲苯2100%酒精100%酒精95%酒精95%酒精85%酒精75%酒精二甲苯2二甲苯1100%酒精100%酒精95%酒精95%酒精85%酒精75%酒精蘇木精染色液鹽酸酒精伊紅染色液水洗水洗在染色缸中2、組織化學技術
(1)、一般組織化學技術:PAS反應:
糖,紫紅色油紅O:脂滴,紅色甲基綠-焦寧:DNA,藍紫色
RNA,紅色PSA反應:
過碘酸雪夫氏反應(periodicacidSchiffreaction):簡稱PAS反應,是確定組織或細胞中有無多糖存在的一種方法。
原理:多糖PA氧化醛Schiff試劑(亞硫品紅)紫紅色沉淀貓小腸PAS染色示杯狀細胞(復旦大學上海醫學院組織胚胎學教研室供圖)(辣根過氧化物酶)(過氧化物酶-抗過氧化物酶復合法,簡稱PAP法)(peroxidase-antiperoxidasecomplexmethod,PAP)(抗生物素(卵白素)-生物素法,簡稱ABC法)(avidinbiotincomplexmethod,ABC)3、活體組織研究技術
組織培養(體外實驗invitro)活體染色細胞電泳細胞融合細胞分離低溫生物學4、放射自顯影術亦稱“同位素示蹤術”是應用某種具有放射性的同位素標記物,注入動物體內或加入細胞的培養基中,該物質被細胞攝取后,將組織或細胞制成切片或涂片,并在暗室中將切片或涂片表面涂一層感光乳膠,這時細胞中的放射性同位素產生的射線就會慢慢地使乳膠感光,經顯影、定影處理后,在顯微鏡下觀察標記物的分布和數量情況,就會細胞對某種物質的吸收、合成、分泌和代謝過程。
eg.用3H標記的亮氨酸,注入動物體內,3-5min在RER出現,20min在G,1-4h后聚集于酶原顆粒。5、細胞形態結構測量術細胞形態計量術:應用“圖像分析儀”計算細胞內各微細結構的體積、周長、表面積、數量及分布等數值。流式細胞術:應用“流式細胞儀”對單個細胞生物化學和物理特征進行快速定量測定。顯微分光光度測量術:應用“顯微分光光度計”對標本中微細結構的化學成分及其含量進行測定。6、顯微鏡技術據光源不同分為:光學顯微鏡和電子顯微鏡光學顯微鏡(LM)電子顯微鏡(EM)光源:放大倍數:分辨率:觀察結構:光電子流幾十、上千倍幾萬、幾十萬,上百萬倍0.2um0.2nm光鏡結構電鏡結構(1)、光學顯微鏡一般光學顯微鏡(生物顯微鏡)特殊光學顯微鏡熒光顯微鏡相差顯微鏡暗視野顯微鏡偏光顯微鏡倒置顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡TransmissionElectronMicroscope,TEMScanningElectronMicroscope,SEMScanningElectronMicroscope,SEM1、HE染色:是用堿性染料蘇木精和酸性伊紅染色方法。2、嗜堿性:組織或細胞內的酸性物質被堿性染料蘇木精染成藍色,組織或細胞內的這種物質所具有染色特性。3、嗜酸性:組織或細胞內的堿性物質被酸性染料伊紅染成紅色,組織或細胞內的這種物質所具有染色特性。4、嗜中性:組織或細胞內的某些物質都不被堿性染料蘇木精和酸性染料伊紅染色,該物質所具有染色特性。5、異嗜性:組織或細胞內的物質染色時,會出現與染料完全不同的顏色,該物質所具有染色特性。四、組織學與胚胎學的常用術語6、PAS反應:過碘酸-雪夫氏反應。7、Wright和Giemsa染色:瑞特和姬姆薩染色,用正甲藍、伊紅、天青染料,對血涂片進行染色的方法。8、銀染法:又稱鍍銀法,染液內含硝酸銀溶液,浸染切片后,銀
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