實驗11植物多倍體的誘發和鑒定

實驗目的：

2鑒定誘導后染色體數目的變化。

1了解人工誘導植物多倍體的原理、方法及其在植物育種上的意義；實驗原理：

各種生物染色體的數目、形態和結構都是恒定的。絕大多數的生物是二倍體，在植物界多倍體普遍存在，已知被子植物中有1/3或更多的物種是多倍體。除了自然界存在的多倍體物種以外，可以采用高溫、低溫、射線照射、等物理化學方法人工誘發多倍體植物。其中，以應用化學試劑更為有效和方便，如秋水仙素、異生長素、富民農等，使用最廣泛、效果最好的是秋水仙素。實驗用品：

用具：顯微鏡、剪刀、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、酒精燈、鉛筆、吸水紙等。

藥品：蒸餾水、卡諾氏固定液、45%醋酸、秋水仙素、改良苯酚品紅染液等。實驗材料：

洋蔥、大蒜等。本實驗選用大蒜。實驗步驟：

1培養根尖：將大蒜瓣放在盛有清水的培養皿中，讓根部接觸水，在20~25℃光照下培養，待根尖長到0.5~1cm時備用。

8鏡檢：先在低倍鏡下找到細胞，再換成高倍鏡仔細觀察。請注意比較該實驗結果與有絲分裂實驗結果有何不同？實驗報告：

1說明秋水仙素誘發多倍體的原理是什么？

2畫出在顯微鏡下看到的多倍體細胞的圖像；

3了解誘發多倍體在育種方面的意義。實驗9植物原生質體的分離與純化

實驗目的：

2了解原生質體在細胞工程中的應用。

1學習植物原生質體的分離和純化技術；實驗原理：

原生質體是指去除了細胞壁的植物細胞。原生質體是植物體細胞遺傳學研究的一重要實驗系統，無論在理論方面還是在實踐方面都有重要的研究價值。去除細胞壁一般通過酶解的方法，植物細胞壁是由纖維素、半纖維素、果膠質和少量的蛋白質和脂類組成的。由于這些不同物質的化學鍵，必須使用混合酶液以降解細胞壁。通常混合使用纖維素酶和果膠酶分離原生質體。

3酶解：在培養皿中放入混合酶液，將去掉下表皮的葉片剪成小塊，去下表皮面向下鋪于酶液中，充分接觸酶液。25~30℃，酶解2~3小時。

4過濾：酶解后的混合物用雙層漏斗進行過濾，只允許單細胞和原生質體通過。

2撕下表皮：用鐘表鑷子將葉子的下表皮撕掉，注意不要損傷葉肉細胞。

5純化：用比原生質體比重大的20%蔗糖溶液，離心后原生質體漂浮在溶液的表面。

過濾后的混合液，500rpm,3min離心

吸出上清液，沉淀用2ml8%甘露醇鹽溶液懸浮在新的離心管中加入約8ml20%蔗糖鹽溶液，將上面的原生質體懸浮液用滴管輕輕地加載蔗糖溶液上1000rpm，3min離心后，原生質體漂浮在蔗糖溶液上，吸取原生質體于一新的離心管中加入8ml8%甘露醇鹽溶液，500rpm，3min離心后，棄上清，用甘露醇鹽溶液懸浮沉淀。

6鏡檢：將原生質體懸浮液滴在載玻片上，輕輕蓋上蓋玻片，先在低倍鏡下找到原生質體，再換成高倍鏡仔細觀察。實驗報告：

1畫出在顯微鏡下看到的原生質體的圖像；