實驗診斷學病原微生物檢查第1頁/共47頁

臨床病原體檢測P441第2頁/共47頁臨床病原體檢查目的明確感染是否發(fā)生以及病原體的類型。提供體外微生物藥物敏感實驗的結(jié)果。密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，及時向行政主管部門報告。配合相關(guān)機構(gòu)進行流行病學調(diào)查。第3頁/共47頁

本章主要內(nèi)容一、標本采集、運送和檢測方法二、細菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染第4頁/共47頁一、細菌檢驗標本采集與送檢的基本原則

1.注明被檢人姓名、性別、年齡、臨床診斷、標本來源及檢驗?zāi)康摹⒖股厥褂们闆r。2.盡量在抗生素使用前采集標本。3.在采集血液、腦脊液、穿刺液等標本時，應(yīng)嚴格執(zhí)行無菌操作，避免雜菌污染。4.立即送到實驗室，某些細菌還應(yīng)注意保溫、保濕。5.盛標本容器須經(jīng)滅菌處理，勿用消毒劑。

參考P463第5頁/共47頁二、常見標本的采集：血液與骨髓

1.采血部位多為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采集血標本，無菌操作。2.每瓶采血量為5～10ml左右，培養(yǎng)基與血液之比以10:1為宜，以稀釋血液中的抗生素、抗體等殺菌物質(zhì)。3.選擇寒戰(zhàn)發(fā)熱之初采血。對已用抗菌藥物而又不能停藥者，應(yīng)在下次用藥前采血。4.每例建議不同時間不同部位采血3次，注意區(qū)別感染菌和皮膚污染菌。第6頁/共47頁尿液標本的采集

1.中段尿采集：最常用的方法。采樣前須消毒尿道口將中段或近后段的尿液留于無菌容器中。2.導(dǎo)尿管采集尿液：可減少污染，但易引起逆行感染。不可從集尿袋下端管口留取標本。3.膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮膚消毒后，以無菌針筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厭氧菌培養(yǎng)或嬰幼兒。第7頁/共47頁糞便標本的采集1.挑取有膿血粘液部分的新鮮糞便約2～3克盛于滅菌容器中送檢，也可用拭子挑取糞便插入Cary-Blair運送培養(yǎng)基中送檢。2.對不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用直腸拭子采集送檢。第8頁/共47頁呼吸道標本的采集

1.自然咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳嗽，從呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰為好。2.氣管鏡下采集法、氣管穿刺法：下呼吸道病原學的理想標本，可減少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推廣。3.應(yīng)及時送檢和處理(<1小時)，放置時間長可導(dǎo)致肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等的檢出率明顯下降。

第9頁/共47頁腦脊液等無菌體液標本的采集

1.嚴格無菌條件下采集標本。2.盡量采集多的標本送檢。3.盡快送檢或床旁接種可提高陽性率，特殊標本需保溫送檢。如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等。第10頁/共47頁其它標本的采集

(傷口、燒傷創(chuàng)面、膿腫等)1.無菌生理鹽水清洗病灶表面后，用無菌拭子取病灶深部的膿液和分泌物，立即送檢。2.對未潰破的膿腫直接用碘酒、酒精消毒皮膚后，以無菌注射器抽取膿液送檢，也可以切開排膿時用無菌拭子采樣。3.生殖道標本包括尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸口分泌物、前列腺液等，應(yīng)注意保溫。第11頁/共47頁三、檢查方法1.直接涂片、鏡檢：初步診斷但陽性率低。如抗酸染色找結(jié)核桿菌。陰道毛滴蟲革蘭氏染色第12頁/共47頁2.分離、培養(yǎng)、鑒定：金標準較費時（3天）,同時可進行藥物敏感試驗。3.血清學檢查：如肥達氏試驗、軍團菌抗體檢查等。抗體檢測應(yīng)進行雙份血清檢測，兩次抗體效價相差4倍以上有現(xiàn)癥診斷價值，但無早期診斷意義。（但IgM有早期診斷意義）第13頁/共47頁

主要內(nèi)容一、標本采集、運送和檢測方法二、細菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染第14頁/共47頁耐藥性及發(fā)生機制

1.當前臨床分離的常見細菌

(1)革蘭陰性菌大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、陰溝腸桿菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌等，占70%。

(2)革蘭陽性菌葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌等，占30%。濫用抗生素的后果→耐藥第15頁/共47頁2.耐藥機制(1)耐藥基因的整合子系統(tǒng)(2)產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶或鈍化酶(3)改變抗生素作用的靶位(4)細菌膜的外排泵出系統(tǒng)(5)生物膜的形成，提高耐藥性第16頁/共47頁3、藥物敏感試驗

(1)K-B紙片瓊脂擴散法：最常用，操作相對方便(2)稀釋法

包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法

可獲得最小抑菌濃度（MIC），但較麻煩(3)E試驗：結(jié)合稀釋法和擴散法，價格昂貴第17頁/共47頁4.重點耐藥菌株監(jiān)測試驗☆

(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的篩選(2)氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌(HLAR)篩選(3)耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)篩選(4)染色體Ι型β-內(nèi)酰胺酶AmpC酶的檢測☆(5)超廣譜?內(nèi)酰胺酶(ESBL)檢測第18頁/共47頁5.病原菌耐藥基因的檢測(1)適全生長緩慢的細菌如結(jié)核分枝桿菌(2)對病原菌的耐藥具有確證意義(3)考核其它耐藥性檢查方法的金標準,可能成為未來耐藥性檢查的主導(dǎo)方法。第19頁/共47頁

本章主要內(nèi)容一、標本采集、運送和檢測方法二、細菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染第20頁/共47頁

一、流行病學和臨床類型流行病學特征新的病原體不斷被發(fā)現(xiàn)，如SARS病毒、禽流感染病毒等。老傳染病死灰復(fù)燃如結(jié)核、梅毒、霍亂等

多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)器官移植、放/化療、侵入性醫(yī)療檢查或治療導(dǎo)致醫(yī)院感染發(fā)生率不斷增加第21頁/共47頁二、檢查項目和臨床應(yīng)用1.細菌感染：細菌培養(yǎng)是最重要的確診方法2.病毒感染：常用血清學檢查，如HIV3.真菌和寄生蟲感染：形態(tài)學檢查第22頁/共47頁

本章主要內(nèi)容一、標本采集、運送和檢測方法二、細菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染第23頁/共47頁病毒性肝炎檢測P452甲型肝炎(糞口途徑)：

IgM抗體：特異性早期診斷指標,提示HAV現(xiàn)癥感染

IgG抗體：出現(xiàn)于恢復(fù)期且長期存在,提示既往感染甲、乙、丙、丁、戊、庚、輸血傳播病毒肝炎第24頁/共47頁乙型肝炎

1.最常用的定性檢測乙肝兩對半常用測定方法：ELISA法

2.乙肝DNA定量PCR檢測：病毒復(fù)制的指標正常:HBVDNA<103Copies/ml拉米夫定(賀普丁）、干擾素治療效果的主要指標。第25頁/共47頁丙肝病毒標志物

RNA病毒血液傳播

1.抗HCV-IgM近期感染指標

2.抗HCV-IgG已有感染，不作為感染早期指標

3.HCV-RNA：陽性提示HCV復(fù)制活躍,直接指標其它丁肝為缺陷病毒，依賴HBV

第26頁/共47頁

本章主要內(nèi)容一、標本采集、運送和檢測方法二、細菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測五、院內(nèi)感染第27頁/共47頁醫(yī)院感染常見病原體檢測院內(nèi)感染的概念：入院時無癥狀，在入院48小時后發(fā)生的感染，或出院后48小時發(fā)生的感染。患者或陪護人員醫(yī)護人員環(huán)境或醫(yī)療器械三大環(huán)節(jié)：傳染源，傳播途徑，易感人群第28頁/共47頁醫(yī)院感染的特點①感染源和病原體：感染源主要是患者、醫(yī)務(wù)人員、醫(yī)院環(huán)境、醫(yī)療器械等。最常見病原體是細菌，以革蘭陰性桿菌為主②易感人群：常見于免疫力低下的住院患者。多發(fā)生于具有基礎(chǔ)性疾病或接受侵入性治療的患者。③常見臨床類型：下呼吸道感染（機械通氣）為最常見醫(yī)院感染類型，其它如尿路感染（插管）、手術(shù)切口感染、胃腸道感染、血液感染（靜脈留置和透析常見）、皮膚和軟組織感染等。④病原體：條件致病菌和機會致病菌⑤傳播方式：接觸傳播多見第29頁/共47頁醫(yī)院感染的常見細菌1.鮑曼不動桿菌呼吸道感染常見2.大腸埃希菌泌尿道感染常見3.銅綠假單胞菌呼吸道和燒傷常見4.金黃色葡萄球菌皮膚和軟組織化膿5.肺炎克雷伯菌呼吸道感染第30頁/共47頁掌握臨床常見病原體檢測標本的采集運送原則、要求及方法；熟悉病原體耐藥性發(fā)生機制、藥敏試驗及耐藥菌監(jiān)測試驗；掌握乙肝兩對半的意義及常見模式；掌握院內(nèi)感染。本章重點第31頁/共47頁考試時間：12年12月28日晚18:30考試題型：判斷題10分（10道題），單選題70分（70道題），不定項選擇題9分（6道題）。名解6分（2道題），簡答5分（1道題）。考試內(nèi)容：平時上課老師PPT的內(nèi)容，課本中沒講到的內(nèi)容不作為考試要求。期末考試注意事項第32頁/共47頁K-B法第33頁/共47頁back第34頁/共47頁E-試驗第35頁/共47頁1.測定方法

OX紙片法：苯唑西林FOX紙片法：頭孢西丁2.MRS對所有β內(nèi)酰胺類耐藥OXOXFOXFOXOXMRS篩選試驗FOX第36頁/共47頁HLAR的篩選CN120AMP1.測定方法紙片法2.CN120：高濃度慶大霉素AMP：氨芐西林第37頁/共47頁ESBLs雙紙片確證試驗1.CTX/CA比CTX抑菌圈或CAZ/CA比CAZ>5mm即為陽性2.若ESBLs陽性,對青霉素類、所有頭孢菌素類及單環(huán)類抗菌素耐藥

CTXCTX/CACAZCAZ/CA注:CTX為頭孢噻肟;CTX/CA為頭孢噻肟/棒酸CAZ為頭孢他啶;CAZ/CA為頭孢他啶/棒酸第38頁/共47頁AmpC酶檢測FOXFOX：頭孢西丁2.若AmpC酶陽性，對青霉素類、第一、二、三代頭孢菌素、單環(huán)類及頭霉類抗菌素耐藥第39頁/共47頁乙肝的傳播途徑我國HBSAg陽性率約為8％。經(jīng)血傳播胎源性傳播醫(yī)源性傳播性接觸傳播生活密切接觸傳播(共用剃須刀、牙刷等)第40頁/共47頁乙肝兩對半

HBsAg：感染HBV后1～2月出現(xiàn)，若急性發(fā)病后3個月不轉(zhuǎn)陰，易轉(zhuǎn)為慢性。是乙肝病毒感染的標志。

HBsAb：為保護性抗體，表明患者已產(chǎn)生了一定的免疫力。

HBeAg：表明乙肝處于活動期，肝細胞受損狀態(tài)，有較強傳染性。

HBeAb：抗-HBe的出現(xiàn)意味著大部分乙肝病毒被消除，傳染性顯著降低，病情出現(xiàn)好轉(zhuǎn)。

HBcAb：陽性者代表正在感染或以往感染過乙肝病毒。

第41頁/共47頁HBcAg(核心抗原)存在于肝細胞內(nèi)，血中不易檢測。當肝細胞破壞，HBcAg釋放出來，被酶水解成HBeAg，所以HBeAg提示肝細胞損傷。第42頁/共47頁第43頁/共47頁第44頁/共47頁常見模式

HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb

大三陽

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