研究生實驗技能培訓

－－分子生物學實驗常用儀器介紹實驗中心PH計種類臺式（實驗室用）PH計便攜式（實驗室用）PH計工業用PH計多功能（實驗室用）PH計pH計的校正生產廠家一般提供兩瓶標準溶液一瓶pH值等于6.86（混合磷酸鹽的標準緩沖溶液），用于標定儀表零點。一瓶pH等于4（鄰苯二甲酸氫鉀標準緩沖溶液），用于標定儀表的信號輸出斜率。pH計的使用注意事項測試前，用蒸餾水沖洗電極，洗去保護液。測量電極上的玻璃探頭，小心碰撞，避免破碎。完成測試后，用蒸餾水沖洗電極，吸干，套上套管，關閉電源。METTLERTOLEDOAG285天平工作原理

天平是稱量物體質量的衡器。常用天平都采用單杠桿結構，運用“杠桿平衡時加在等力臂上的力相等”這一原理制成。電子天平是用電磁力平衡被稱物體重力的天平。基本概念全稱量天平所能稱量的最大質量值（滿載值），常以“克”（g）為單位表示。

感量使天平指針從平衡位置轉到刻度盤一分度所需的最大質量。因此，感量也叫做“分度值”，常以“毫克”（mg）為單位表示。（e,d)這一數值愈小，天平就愈靈敏。Max:81g/210gd=0.01mg/0.1mg

如何選擇天平用一臺實際標尺分度值d為1mg，檢定標尺分度值e為10mg，最大稱量為200g的Mettler電子天平，用來稱量7mg的物體，這樣是不能得出準確結果的。在《JJG98-90非自動天平試行檢定規程》中規定，最大允許誤差與檢定標尺分度值“e”為同一數量級，此臺天平的最大允許誤差為1e，顯然不能稱量7mg的物體。按其觀察對象和光路結構可分為正立、倒置和體視顯微鏡按其光學性質可分為明場和暗場暗場又包含相差、霍夫曼、熒光和偏光顯微鏡的分類暗視野顯微鏡在培養細胞活體觀察中以倒置暗場為主一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結構，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動等。細胞培養中顯微鏡的運用細胞數量記錄細胞形態觀察細胞動力學記錄NIKONTE2000-U

倒置熒光顯微鏡工作原理

熒光顯微鏡是利用一個高發光效率的點光源，經過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發光，激發標本內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。基本構造由普通光學顯微鏡加上一些附件：熒光光源激發濾片雙色束分離器阻斷濾片等熒光顯微鏡內部構造1觀察標本中的自發熒光物質或以熒光素染色或標記的細胞和結構2標本中的熒光物質在紫外線激發下產生各種顏色的熒光，借以研究該熒光物質在細胞和組織內的分布。3細胞內的某些成分可與熒光素結合而顯熒光，如溴化乙錠與吖啶橙可與DNA綜合，進行細胞內DNA含量測定。4熒光顯微鏡更廣泛用于免疫細胞化學研究，即以異硫氰酸或羅丹明等熒光素標記抗體（一抗或二抗），用該標記抗體直接或間接地與細胞內的相應抗原結合，以檢測該抗原的存在與分布。免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。主要用途熒光的種類自發熒光（固有熒光）二次熒光Fluorescenceimage,DNAinblueandMicrotubulesingreen細胞增殖試劑盒Cy5-連接的抗-BrdU來檢測細胞增殖綠熒光目標蛋白測定

---監測細胞內蛋白位移RAC-1AKT-1細胞存活，細胞增殖SMAD-2TGF-b信號傳導STAT-3細胞因子傳導,leptinsignalingNFAT-C1免疫反應,前列腺素信號傳導途徑FYVEdomainPI(3)P傳感途徑Rac-1胞質分裂，遷移，轉換Cytokinesis,migration,transformationPLCδ-PHPI(4,5)P2信號傳導途徑,adrenoreceptorfunctionMAPKAP-k2p38途徑

WU

WIBDUAL

BANDWIBAWIGWIBDAPI+FITCFITC+PI雙重染色標本的單色和雙色觀察

1．打開燈源，超高壓汞燈要預熱幾分鐘才能達到最亮點。2．使用中應注意：末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷。3．高壓汞燈關閉后不能立即重新打開，需經5分鐘后才能再啟動，否則會不穩定，影響汞燈壽命。使用注意事項GenepulserXcell電穿孔系統工作原理電穿孔是功能強大的將核酸、蛋白及其它分子導入多種細胞的高效技術。通過高強度的電場作用，瞬時提高細胞膜的通透性，從而吸收周圍介質中的外源分子。這種技術可以將核苷酸、DNA與RNA、蛋白、糖類、染料及病毒顆粒等導入原核和真核細胞內。系統的組成由一個主單元、2個附屬模塊（CE與PC模塊）及ShockPod電擊槽組成CE模塊（電容擴增器模塊）與主單元配合使用可電轉化多數真核細胞（包括哺乳動物細胞和植物原生質體）。PC模塊（脈沖增強控制器模塊）建議用于細菌和真菌的電轉化，或其它需要在小體積和高電阻樣品上施加高電壓脈沖的應用。系統有3種組合。

電擊杯選擇指南0.4cm間距電擊杯寬間距、低場強、應用于哺乳動物細胞和其它真核細胞0.2cm間距電擊杯窄間距、高場強、應用于酵母、細菌和其它真核細胞0.1cm間距電擊杯最窄間距、極高的場強，淺底用于小體積樣品(40–80μl)應用于酵母和細菌轉化主要用途用于哺乳動物細胞、胚胎細胞或植物原生質體的穿孔，可有效轉移任何大小或復雜度的DNA、蛋白質，適用于原核細胞和真核細胞的轉染，細菌和酵母的轉化。超低溫冷藏柜生物材料的凍存（1）0—8℃疫苗保存箱可用于儲存疫苗、藥劑、血液等

2—8℃藥品保存箱藥品保存箱是醫療行業冷藏藥品的專業設備，也可用于儲存生物制品

4℃血液保存箱醫療行業冷藏血液（全血）的專業冷藏設備，也可以用于冷藏藥物，生物制品

—25℃~—40℃低溫保存箱可用于保存血漿，生物材料，疫苗、試劑等

生物材料的凍存（2）—40℃低溫保存箱可用于特殊材料的低溫實驗、凍存血漿、生物材料、疫苗等

—60℃~—70℃超低溫保存箱保存生物材料、血漿以及特殊材料的低溫試驗

—86℃超低溫保存箱用于保存病毒、病菌、紅細胞、白細胞、皮膚、骨骼、細菌、精液、生物制品，遠洋制品，特殊材料的低溫試驗等

—156℃深低溫保存箱用于保存病毒、病菌、紅細胞、白細胞、DNA/RNA、皮膚、骨骼、細菌、精液、生物制品臨床試驗品等。

ELX800酶標儀主要用途用于讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果，可進行單克隆抗體篩分、抗生素靈敏度檢驗(食品安全藥物殘留快速檢測)以及其它需要進行比色的分析。酶標儀測定原理

在特定波長下，檢測被測物的吸光值。在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

主要性能說明

速度：30秒/96孔板

儲存：儲存55種測試項目，并能儲存最近的8個測試結果，可儲存25條標準曲線

濾光片：濾光輪可放5塊濾光片，儀器配405、450、490、630nm4塊濾光片線性：405nm，0-2.000Abs±1%

450nm，0-2.000Abs±1%

外接口：電腦接口（RS232）、打印機接口

波長范圍：400-750nm具有單、雙波長設定

吸光度范圍：0.000-3.000Abs

分辨率：0.001Abs

操作注意事項

A.使用移液器加液，移液槍頭不能混用。

B.洗板要干凈，避免交叉污染。

C.嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確。

D.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成注意做好清潔工作。

E.不要在測量過程中關閉電源。

F.對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以達到最佳效果。

G.使用后蓋好防塵罩。

熒光定量PCR儀應用定量檢測絕對定量：基因表達研究、轉基因食品檢測、病原體檢測相對定量：基因在不同組織中的表達差異、藥物療效考核點突變檢測與疾病相關的等位基因點突變檢測SNP檢測RealTimePCR原理

在PCR反應體系中加入熒光物質，并實時監測熒光信號積累的整個PCR進程，最后通過已知濃度的標準品制作的標準曲線對未知濃度的樣品進行定量分析。RealTimePCR檢測方法

熒光染料嵌合法(SYBRGreenI)

熒光探針法

TaqManprobeCyclingprobe

MolecularBeaconprobeHybridizationprobeScorpionsprobe

AmplifluorprobeAgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio熒光染料嵌合法原理SYBRGreenI

SYBRGreenI是具有綠色激發波長的染料，能結合于任意dsDNA雙螺旋小溝區域的。AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio熱變性引物退火延伸反應熒光染料嵌合法原理

RayGeneBioAgentofTaKaRaTaqMan探針法原理AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio

TaqManprobe為一寡核苷酸(20-24bp)5’端標記一個熒光報告基團(Reporter)3’端標記一個熒光淬滅基團(Quencher)熱變性引物和探針與模板退火延伸反應探針報告基團淬滅基團探針DNA聚合酶引物RRRRTaqMan探針法原理信號強度與結合探針的DNA分子數成正比生產廠商儀器名稱TaKaRa公司TP800AppliedBiosystems公司ABIPRISM7700、7000、7300、7900HT、

7500FastRoche公司LightCycler?2.0、LightCycler?480

Cepheid公司SmartCycler、SmartCyclerII、SmartCycler?TD

Bio-Rad公司iCycleriQ、iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

CorbettResearch公司Rotor-gene2000、Rotor-gene3000、Rotor-gene6000

MJResearch公司Opticon、MJMiniCycler、MiniOpticonStratagene公司Mx4000?、Mx3000P?、Mx3005PTM杭州博日LINE-GENEFQD-33A、LINE-GENEFQD-66ARealTimePCR檢測系統

瑞真生物

RayGeneBioAgentofTaKaRaLightCycler?480

Rotor-gene6000MiniOpticonMx3005PTM

LINE-GENEFQD-66A

ABIPRISM7500iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

TaKaRaTP800開、關機順序開機：先便宜，后貴的。關機：先貴的，后便宜。選擇生物安全柜的理由工作對象具有生物危害原代培養物、菌毒種以及診斷性標本等-------具有潛在感染性的實驗材料屬于《人間傳染的病原微生物名錄》中第一、二、三和四類微生物選擇生物安全柜的理由容易產生氣溶膠的工作行為

對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時，將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時，在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細胞培養瓶，采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉移到微量培養板中，對感染性物質進行勻漿及渦旋振蕩，對感染性液體進行離心，進行動物操作時。