第二 分子生物學技PCR過程一般分為變性、退火、延伸三大步, A.94℃、55℃、72 B.72℃、55℃、94C.55℃、94℃、72 D.80℃、55℃、72解析:94℃(90~96℃)以上時,DNA解聚為單鏈,稱之為變性;當溫度50℃(40~60℃)左右時,DNA結(jié)合;當溫72℃(70~75℃)左右時,溶液中的四種脫氧核苷酸(A、T、C、G)TaqDNA聚合酶的作用下,DNA鏈,稱為延伸。答案DNA的需要引物,其主要原因是 可加快DNA的速DNA5'DNADNA解析:DNA的兩條鏈是反向平行的,DNA的方向,DNA的羥基(—OH)3'端,5'端。DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,而只能從3'端延伸DNA鏈。因此,DNA需要引物。當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結(jié)合后,DNA3'DNA鏈,DNA的合成方5'3'端延伸。答案下列有關(guān)PCR反應(yīng)的敘述正確的是( A.PCR反應(yīng)所需要的引物只是RNAB.PCR反應(yīng)所需要的材料是核糖核苷酸C.PCR60℃會變性解析:PCRDNARNA,反應(yīng)所需要的材料是脫氧核苷酸,PCR所需要的酶是耐高溫的,60℃不會變性。答案有關(guān)PCR技術(shù),下列敘述不正確的是 PCR15~40在用PCR技術(shù)擴增DNA時,DNA的過程與細胞內(nèi)DNA的類PCR反應(yīng)只需一定的緩沖溶液、DNAPCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán),解析:PCR反應(yīng)中需要的條件有模板(DNA分子)、原料(4種脫氧核苷酸)、酶(TaqDNA聚合酶)、引物(DNARNA)答案 ①目的②引 ③四種脫氧核苷 ④DNA聚合酶等 ⑥核糖 B.①②③⑥ 解析:PCR技術(shù)需要目的作為擴增的模板,耐高溫DNA聚合酶催化反應(yīng)的進行,而引DNA聚合酶起作用的需要,四種脫氧核苷酸是該過程的原料。答案多聚酶鏈式反應(yīng)(PCR)是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷下述三十多次循環(huán);94℃下使模板DNA變性、解鏈→55℃下退火(引物與DNA模板鏈結(jié)合)→72℃下引物鏈延伸(形成新的脫氧核苷酸鏈)。下列有關(guān)PCR過程的敘述中不正確 變性過破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵,也可利用解旋酶實復性過引物與DNA模板鏈的結(jié)合依靠互補配對原則完延伸過需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷PCR與細胞內(nèi)DNA相比,所需要酶的最適溫度較解析:變性過破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵,也可利用解旋酶實現(xiàn);復性過引物與DNA模板鏈的結(jié)合依靠互補配對原則完成;延伸過需要DNA聚合酶、ATP、四種脫氧核糖核苷酸;PCR與細胞內(nèi)DNA相比,所需要酶的最適溫度較高。下面關(guān)于DNA對高溫的耐受性的說法,不正確的是( A.DNA對高溫的耐受性一般要比蛋白質(zhì)強B.80DNA將變性,即使恢復到常溫,解析:蛋白質(zhì)一般受80℃以上的高溫,一旦達到此溫度,其結(jié)構(gòu)往往會發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的破壞,DNA80℃以上情況下才會變性,一旦溫度降低,其在高溫下解開的答案關(guān)于PCR的說法不正確的是( A.PCR是體外DNA的技術(shù)B.TaqDNAC.DNAD.PCR利用的是DNA雙鏈原解析:DNA既可來源于動物、植物、微生物,答案PCR操作中,從第二輪循環(huán)開始擴增的DNA片段( 解析:R擴增產(chǎn)物可分為長產(chǎn)物片段和短產(chǎn)物片段兩部分。短產(chǎn)物片段的長度嚴格地5端之間,是需要擴增的特定片段。進入第二輪循環(huán)后,模板結(jié)合外,還要同新合成的鏈(即“長產(chǎn)物片段”)結(jié)合引物在與新鏈結(jié)合時,由于新鏈模5端序列是固定的,3端被固定了終點,保證了新片段的起點和終點都限定于引物擴增序列以內(nèi),形成長短一致的“短產(chǎn)物片段”。答案使用PCR儀的具體實驗操作順序應(yīng)為 PCR儀的循環(huán)程序③用微量移液器在微量離心管中依次加入各組分④進行PCR反應(yīng) A.②③⑤④①B.①⑤③④②C.②③⑤①④解析:使用PCR儀進行DNA擴增前,首先按照PCR體系配方,依次將各組分加入微量離心管離心,使反應(yīng)液集中于試管底部,然后再設(shè)計好PCR儀的循環(huán)程序進行PCR反應(yīng)。11.(2014·山東高考理綜)玉米是重要的糧食作物,經(jīng)深加工可生產(chǎn)、玉米胚芽油和果玉米秸稈中的纖維素經(jīng)充分水解后的產(chǎn)物可被酵母菌利用發(fā)酵生產(chǎn)。培養(yǎng)酵母 。發(fā)酵過檢測酵母菌數(shù)量可采用 利用PCR技術(shù)擴增葡萄糖異構(gòu)酶時,需用耐高溫的 解析:PCR技術(shù)中,DNA分解成單鏈,因而需耐熱的(Taq)DNA聚合酶;PCR技術(shù)中的每次循環(huán)都包括三個步驟:變性→復性→延伸。答案:(1)碳源(2)壓榨萃取(注:兩空可顛倒) 復性(或退火 延DNA的兩條鏈是反向平行的,通常將 過堿基互補配對結(jié)合后,DNA聚合酶就能從引物的 開始延伸DNA鏈。PCRDNADNA雙鏈的問題,DNA聚合酶2080年代,Taq細菌中分離 假設(shè)在PCR反應(yīng)中,只有一個DNA片段作為模板,請計算在5次循環(huán)后,反應(yīng)物中大 個這樣的DNA片段。PCR。解析:(1)DNA3'羥基上,DNA母鏈RNA引物就提供這個羥基。(2)PCRDNA的熱變性原理解決了打開DNA雙鏈的問題,所以用于催化DNA過程的DNA聚合酶要具有耐高溫的特性。在高溫環(huán)境中培養(yǎng)微生物,只有耐高溫的微生物才能生存,Taq細菌從其他普通的微生物中分離出來。(3)DNA復制兩條鏈均作為模板,進行半保留,所以5次后得到的子代DNA分子數(shù)為25=32個。(4)PCRDNA分子進行擴增,所以可用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學、克隆和DNA序列測定等方面。答案:(1)磷酸基團3'耐高溫的TaqDNA聚合 選擇培養(yǎng)病原體鑒定、遺傳學診斷、免疫學研究、癌探索及治療、刑偵破案、古生物學、克隆和DNA序列測定等定量測定;從原先只能擴增幾個kb(千堿基對)的到目前已能擴增長達幾十個kb的DNA片段。現(xiàn)在PCR技術(shù)已有十幾種之多。它不僅可用于分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病的診斷等。PCRDNA、引物、脫氧核糖核DNA聚合酶、ATP等條件,其簡要過程如圖所示。請分析回答下列有關(guān)問題。PCR技術(shù)能把某一DNA片段進行擴增,依據(jù)的原理 。PCR與體內(nèi)的不同之處主要表現(xiàn)在環(huán)境溫度的不同,在PCR中先用94℃高溫處理的目的 ,而這一過在細胞內(nèi)是通過 若將1個DNA分子拷貝10次,則需要在緩沖液中至少加 個引物DNA子鏈的方向 ,這是由。PCR技術(shù)不僅為遺傳病的診斷帶來了便利,而且改進了檢測細菌和的方法。若要檢測一個人是否了,你認為可以用PCR擴增血液中的 解析:PCR技術(shù)又稱多聚酶鏈式反應(yīng),擴增過遵循的原理就是DNA;分析得出新合成的DNA分子中,A=T,C=G,這個事實說明DNA分子的合成遵循堿基互補配對原則;在PCR中選用94℃高溫處理的目的是在解旋酶的催化下將DNA分子中的氫鍵斷裂,兩條鏈解開,使DNA分子變性。引物是一種單鏈DNA或RNA分子,它能與解開的DNA母鏈的3'端結(jié)合,為DNA聚合酶提供吸附位點,使DNA聚合酶從引物的3'端開始連接脫氧核糖核苷酸,從而決定了DNA子鏈的方向是從5'端到3'端。在DNA分子擴增時,需要兩種引物,由于新合成的子鏈都需要