專題2微生物的培養與應用選修1生物技術實踐1（一）培養基1、概念：根據微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。2、種類：①按物理性質劃分種類是否含凝固劑用途固體培養基是(0.5%~1%瓊脂)用于微生物的分離、計數等半固體培養基是(0.2%~0.5%瓊脂)主要用于觀察微生物的運動、鑒定菌種等液體培養基否主要用于工業生產考點1：微生物的培養與應用2②按化學性質劃分種類化學成分是否明確用途天然培養基否常用于工業生產合成培養基是常用于微生物的分類、鑒定3③按培養基用途劃分種類用途原理制備方法例子選擇培養基從眾多微生物中分離所需的微生物依據某些微生物對某些物質的抗性而設計培養基中加入某種化學物質加入青霉素分離得到酵母菌等鑒別培養基鑒別不同種類微生物依據微生物產生的某種代謝產物與培養基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計培養基中加入某種指示劑或化學藥品伊紅和美藍培養基可以鑒別大腸桿菌4水、碳源、氮源、生長因子、無機鹽。3、營養要求5消毒——用較溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌——使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（二）無菌技術6(1)消毒方法消毒種類主要方法應用范圍煮沸法100℃煮沸5~6min日常生活的用品巴氏消毒法70~75℃煮30min或80℃煮15min牛奶、啤酒、果醬、醬油等不宜進行高溫滅菌的液體化學藥劑消毒用體積75%的乙醇、碘酒涂抹、氯氣消毒水源用于皮膚、傷口、動植物組織表面消毒，空氣、手術器械或玻璃器皿等紫外線消毒30W紫外燈照射30min接種室、超凈工作臺7(2)滅菌方法消毒種類主要方法應用范圍灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒接種工具如接種環、接種針或其他金屬用具，接種過程中試管口等干熱滅菌電熱鼓風干燥箱160~170℃加熱1~2h玻璃器皿(如吸管、培養皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品高壓蒸汽滅菌121℃維持15~30min培養基及多種器材、物品81、甲、乙、丙是三種微生物，下表①、②、③是用來培養微生物的三種培養基。甲、乙、丙都能在③中正常生長繁殖；甲能在①中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在②中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是：粉狀硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g（NH）2SO40.4gH2O100mLMgSO49.25gCaCI20.5g①++++-+++②+++-++++③++++++++A、甲乙丙都是異養微生物B、甲乙都是自養微生物、丙是異養微生物C、甲是固氮微生物、乙是自養微生物、丙是異養微生物D、甲是異養微生物、乙是固氮微生物、丙是自養微生物C92、培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是：①化學消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線滅菌⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法

A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥

C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤A101、配制培養基計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板（三）實驗操作112、純化大腸桿菌①平板劃線：通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線后培養，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。②稀釋涂布平板：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面。當稀釋倍數足夠高時，即可獲得單個細菌形成的標準菌落。12①平板劃線：13梯度稀釋②稀釋涂布平板：14涂布平板153、菌種培養將接種后的培養基倒置放入37℃的恒溫箱中培養24小時。4、實驗結果觀察觀察不同的菌落，看顏色、菌落的形態等。5、菌株的保存方法①臨時保藏：斜面培養基，4℃保存；②長期保存：甘油管藏法，-20℃冷凍箱中保存。163、有關倒平板操作錯誤的是(

)A.將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上B.使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C.將培養皿打開，培養皿蓋倒放在桌面上D.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置解析：整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此，滅過菌的培養皿放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰，培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不能將培養皿完全打開，等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置。C4、有關稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是(

)A.首先將菌懸液進行一系列的梯度稀釋B.然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面C.適宜條件下培養D.結果都可在培養基表面形成單個的菌落D17例．右表是某微生物培養基成分，請據此回答：（1）右表培養基可培養的微生物類型是

。自養型微生物

（2）若除去成分②，加入（CH2O），該培養基可用于培養

。（3）表中營養成分共有

類。（4）不論何種培養基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是

。（5）右表中各成分重量確定的原則是

。（6）若右表培養基用于菌種鑒定，應該增加的成分是

。固氮微生物

3調整pH

依微生物的生長需要確定

瓊脂（或凝固劑）

18微生物與人類關系密切。雖然有些微生物能使動植物患病，但多數微生物對人類是有益的。請回答下列問題。(1)培養微生物的培養基配方中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽。從土壤中分離分解尿素的細菌時，培養基中加的惟一氮源為_______，這種培養基稱為________培養基。(2)在制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的倒平板操作時，平板冷凝后，為什么要將平板倒置？____________________________________________________。(3)微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和______________法。在用平板劃線法接種時，為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種杯？____________________________________________________。(4)在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？__________________________________________________。尿素選擇培養皿蓋上會凝有水珠，防止水珠落入培養皿造成污染，還可使培養基表面的水分更好地蒸發稀釋涂布平板第一次灼燒接種環是防止接種環上有其他微生物而污染培基。每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次接種時留下的菌種，使下一次劃線時接種環上的菌種直接來自上次劃線的末端，以便通過多次劃線后，得到單個的菌落。需要，避免菌種對環境造成污染和感染操作者191．篩選原理配制選擇培養基，把尿素作為培養基中的惟一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長，其他微生物則不能在此培養基上生長。202．統計菌落數目(1)理論依據：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數。(2)計算方法：每克樣品中的菌株數＝(C÷V)×M其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數：V代表涂布平板時所用稀釋液的體積(mL)；M代表稀釋倍數。(3)統計的菌落往往比活菌的實際數目低。因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。(4)為使結果接近真實值，要設置重復組，取其平均值。可將同一稀釋度的樣品加到三個或三個以上的平板上，經涂布、培養計算出菌落平均數。213．設置對照

可排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實

驗結果的可信度。4．實驗流程(1)以尿素為惟一氮源的培養基作為實驗組，制備牛肉膏蛋

白胨培養基作為對照組，用來判斷選擇培養基是否具有

選擇作用。(2)以培養基加土壤樣品進行培養為實驗組，培養基不加土壤樣品進行培養為對照組，判斷培養基是否被污染。225．課題延伸由于分離分解尿素的細菌的選擇培養基上可能生長著以尿素細菌代謝產物為氮源的其他微生物，因此還需借助生物化學方法對分離細菌作進一步鑒定。(1)原理：細菌合成的脲酶將尿素分解成NH3，使培養基堿性增強，pH升高，因此，可通過檢測pH的變化來判斷該化學反應是否發生。(2)方法：在以尿素為惟一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，培養某種細菌，若指示劑變紅，則pH升高，說明該種菌能分解尿素。23(2009·安徽高考)下列是關于“檢測土壤中細菌總數”實驗操作的敘述，其中錯誤的是(

)A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養基，經高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養24～48小時D．確定對照組無菌后，選擇菌落數在300以上的實驗組平板進行計數選擇菌落在30～300的平板進行計數D241．篩選原理252．實驗流程26[特別提醒]

①為確定得到的是纖維素分解菌，還需進行發酵產纖維素酶的實驗。纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶的分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。②流程中的“選擇培養”是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定。27現在大力提倡無紙化辦公，但是每年仍然不可避免地產生大量的廢紙，其主要成分是木質纖維，人類正努力將其轉化為一種新的資源—乙醇。如圖是工業上利用微生物由纖維素生產乙醇的基本工藝流程，請回答相關問題：(1)自然界中①環節需要的微生物大多分布在

的環境中。將從土壤中獲得的微生物培養在以

為碳源、并加入________的培養基上，篩選周圍有________的菌落。(2)在如上所述的篩選過程中獲得了三個菌落，對它們分別培養，并完成環節②，且三種等量酶液中酶的濃度相同，則你認為三種酶液的活性____________(一定相同、不一定相同、一定不同)，可以通過_____________________________________進行定量測定。纖維素剛果紅透明圈富含纖維素不一定相同對纖維素酶分解纖維素后所產生的葡萄糖28(3)生產中可以滿足④環節