微生物知識交流要點提綱微生物與人類、大自然的關(guān)系什么是微生物細菌的結(jié)構(gòu)、生長繁殖、新陳代謝如何檢測微生物無菌操作消毒和滅菌微生物與人類、大自然的關(guān)系當我們清晨喝著可口的酸奶，品嘗著香甜的面包時，就已經(jīng)開始享受微生物帶來的美味；當我們患病躺在病床上時，可能是有害的微生物侵入了我們身體；當抗生素使我們恢復(fù)健康時，我們得感謝微生物帶來的益處。可以說，微生物與人類關(guān)系的重要性，怎么強調(diào)都不過分。微生物與人類、大自然的關(guān)系自然界中的N、C、S等元素的循環(huán)需要微生物的代謝活動來進行。例如土壤中的微生物能將動植物的有機氮化物轉(zhuǎn)化為無機氮化物，以供植物生長的需要，而植物又為人類和動物所食用。人體內(nèi)的正常菌群的生理學(xué)意義：生物拮抗、營養(yǎng)作用、促進宿主免疫器官的發(fā)育成熟和持續(xù)刺激宿主免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答。醫(yī)藥工業(yè)方面，利用微生物制造一些維生素、輔酶、ATP等微生物與人類、大自然的關(guān)系空氣中的微生物：一個感冒病人一聲咳嗽可散播10萬個病菌，一個噴嚏含有1500萬個病菌。生活污水、工業(yè)廢水中的微生物大多是腐生型細菌和原生動物，有時含有傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌等病原體，若污染了水源水，不經(jīng)消毒處理，不能飲用，也不能養(yǎng)殖。土壤中含有炭疽桿菌、破傷風(fēng)桿菌、梭狀芽胞桿菌、霉菌、酵母菌等，可通過傷口等方式直接接觸而感染發(fā)病。花生、玉米等農(nóng)作物易被黃曲霉菌污染，部分菌株產(chǎn)生的黃曲霉毒素是一種強烈的致癌毒物。什么是微生物微生物的定義微生物的分類各類微生物的形狀、結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性、鑒定方法微生物是存在于自然界的一群體形微小（微米為其常用測量單位）、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須借助顯微鏡放大數(shù)百倍以上才能觀察到的生物。非細胞型微生物：病毒原核細胞型微生物：細菌、放線菌、支原體、立克次體、衣原體、螺旋體真核細胞型微生物：真菌微生物的特點體積小，面積大（比表面積大）80個桿菌肩并肩排列成橫隊，只有一根頭發(fā)的寬度吸收多，轉(zhuǎn)化快大腸桿菌在合適條件下，每小時可以消耗相當于自身重量2000倍的糖生長旺，繁殖快每小時分裂3次，由1個變成8個，48小時后可產(chǎn)生2.2×1043個后代適應(yīng)強，易變異繁殖快、數(shù)量多，即使變異頻率只有10-10~10-5，也可在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量變異后代分布廣，種類多形狀非細胞型細胞型原核細胞型真核細胞型種類病毒細菌、放線菌、支原體、立克次體、衣原體、螺旋體真菌大小（微米）0.02~0.300.2~2.06.0~15.0核酸DNA或RNADNA+RNADNA+RNA核膜--+核仁--+組蛋白--+內(nèi)質(zhì)網(wǎng)--+線粒體--+核蛋白體-+（70s）+（80s）溶酶體--+活細胞培養(yǎng)需需（立克次體、衣原體）不需細菌按照形態(tài)分類：球菌：雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌桿菌：大腸桿菌、棒狀桿菌、白喉桿菌異形菌：霍亂弧菌細菌的結(jié)構(gòu)細胞壁細胞膜細胞質(zhì)莢膜鞭毛菌毛細胞壁作用：承受胞內(nèi)高滲透壓、支持細胞膜、維持細菌形狀主要成分：肽聚糖分類：革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌細胞壁革蘭陽性菌革蘭陰性菌強度較堅韌較疏松厚度20~80nm10~15nm肽聚糖層數(shù)可多達50層1~2層肽聚糖含量占細胞壁干重50~80%占細胞干重5~20%糖類含量約45%15~20%脂類含量1~4%11~22%磷壁酸有無外膜無有細胞膜又稱為胞質(zhì)膜，位于細胞壁內(nèi)側(cè)，包被著細胞質(zhì)，是質(zhì)地柔韌、富有彈性的液性膜狀結(jié)構(gòu)。功能：物質(zhì)納泄：細胞膜具有選擇性通透作用，攝取營養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝產(chǎn)物生物合成：細胞膜具有多種合成酶，合成肽聚糖、磷壁酸、磷脂、脂多糖等多種菌體成分呼吸作用：有多種呼吸酶，可以轉(zhuǎn)運電子完成氧化磷酸化，與能量的產(chǎn)生、貯存和利用密切相關(guān)形成中介體：細胞膜內(nèi)陷、折疊、卷曲形成的囊狀結(jié)構(gòu)，擴大了細胞膜面積，使酶含量增加，有真核細胞線粒體的作用。細胞質(zhì)由細胞膜包裹著的溶膠性物質(zhì)。含有各種酶系統(tǒng)，用光學(xué)和電鏡顯微鏡觀察，可見到各種顆粒。1.核糖體：蛋白質(zhì)合成場所2.核質(zhì)（擬核）：裸露的雙股DNA松散網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)3.質(zhì)粒：核質(zhì)之外的雙股環(huán)狀DNA，攜帶遺傳信息，控制非細菌存活所必需的某些特定形狀4.胞質(zhì)顆粒：貯存的營養(yǎng)物質(zhì)細菌的特殊結(jié)構(gòu)莢膜：某些細菌生長過程中，合成并分泌粘稠性物質(zhì)堆積于細胞壁外，形成一定外形，界限清晰，性質(zhì)穩(wěn)定。莢膜的主要功能：抗吞噬（因其親水性及其空間占位、屏障作用，可有效抵抗寄主吞噬細胞的吞噬作用。）細菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛：細菌的運動器官，有鞭毛的細菌能活潑運動。具有抗原性，稱為H抗原，可用于鑒別細菌和進行細菌分類。菌毛：與細菌的運動無關(guān)。普通菌毛：細菌的粘附器官。性菌毛：粘附雌性細菌，傳遞遺傳物質(zhì)，使受體菌獲得某些形狀。細菌的芽孢某些細菌（梭狀芽孢桿菌，少數(shù)球菌等）在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)形成的一個圓形或橢圓形，厚壁，含水量低，抗逆性強的休眠體構(gòu)造，稱為芽孢。迄今所知的抵抗力最強的生命單位。芽孢本身不直接致病，轉(zhuǎn)化成繁殖體之后引起疾病。炭疽桿菌引起的炭疽菌病，肉毒桿菌引起的肉毒素中毒，氣性壞疽病原菌（常見為產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌）引起的氣性壞疽，破傷風(fēng)桿菌引起的破傷風(fēng)。細菌的芽孢細菌L型在某些因素影響下細菌可以失去細胞壁，形成細菌的細胞壁缺陷型，即細菌的L型。高滲透壓培養(yǎng)基培養(yǎng)三種類型菌落：L型，油煎蛋樣，中心致密，透光性差，周邊透明。G型。F型。細菌的營養(yǎng)物質(zhì)水：細菌濕重的80~90%碳源：合成菌體的原料，代謝的能量來源氮源：合成細胞質(zhì)及其他結(jié)構(gòu)成分無機鹽：構(gòu)成菌體；調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外滲透壓；促進酶的活性；與細菌的生長繁殖和致病性密切相關(guān)生長因子：自身不能合成但是生長必需的物質(zhì)。維生素、某些氨基酸、脂類、嘌呤、嘧啶等細菌的營養(yǎng)類型自養(yǎng)菌：以簡單的無機物為原料合成復(fù)雜的菌體成分。光能營養(yǎng)菌和化能營養(yǎng)菌異養(yǎng)菌：必需以多種有機物為原料，合成菌體原生質(zhì)及獲得能量。腐生菌和寄生菌營養(yǎng)物質(zhì)的吸收簡單擴散（易化擴散）：順濃度差，不需能量主動轉(zhuǎn)運：逆濃度差，需能量，需要透性酶基團移位：細菌對糖的吸收，需要磷酸轉(zhuǎn)運系統(tǒng)細菌生長繁殖的條件充足的營養(yǎng)適宜的溫度：病原菌均為嗜溫菌，最適溫度為37℃。合適的酸堿度：致病菌多為中性或弱堿性（pH7.2~7.6）合適的氣體環(huán)境：專性需氧菌、專性厭氧菌、兼性厭氧菌（在有氧和無氧條件下均能生長）細菌的生長方式和速度二分裂方式無性繁殖。分裂倍增的時間稱為代時，一般為20~30分鐘。遲緩期指數(shù)期（對數(shù)期）：以恒定的幾何級數(shù)增長，持續(xù)幾小時至幾天不等。此期形態(tài)、染色、生物活性最典型，對環(huán)境因素最敏感穩(wěn)定期衰亡期細菌的新陳代謝細菌分泌胞外酶將多糖、蛋白質(zhì)等大分子營養(yǎng)物質(zhì)分解為單糖、小肽或氨基酸，此為細菌的分解反應(yīng)吸收進入菌體，再經(jīng)氧化或胞內(nèi)酶分解形成菌體可利用的成分，此為細菌的合成反應(yīng)。細菌的新陳代謝產(chǎn)物熱原質(zhì)：菌體中的脂多糖毒素和酶：內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶色素：水溶性色素，能彌散至培養(yǎng)基及周圍組織脂溶性色素，僅保持在菌落內(nèi)呈色而培養(yǎng)基顏色不變，如金黃色葡萄球菌。抗生素：抑制或殺死其他微生物或癌細胞的物質(zhì)細菌素：作用于有近緣關(guān)系細菌的物質(zhì)細菌的突變、致病原理、致病過程等因時間和業(yè)務(wù)不需要的關(guān)系在此不討論交流。如何檢測微生物分離、培養(yǎng)及觀察形態(tài)染色及鏡檢生化鑒定血清分型特異性核酸片段鑒定計數(shù)、結(jié)果判斷細菌的人工培養(yǎng)分離培養(yǎng)：一般利用固體培養(yǎng)基（如選擇培養(yǎng)基）通過畫線方法接種，使標本中的細菌分散為單個菌落而獲得。純培養(yǎng)：取一個菌落接種于適當?shù)呐囵B(yǎng)基中獲得大量純種細菌。常規(guī)培養(yǎng)注意：選用適當?shù)呐囵B(yǎng)基；氣體環(huán)境；培養(yǎng)溫度一般為37℃；培養(yǎng)時間多為18~24小時；為獲取大量細菌或其代謝產(chǎn)物，可采用連續(xù)培養(yǎng)法。平板劃線分離形態(tài)觀察：生長速度、大小、形狀、色澤、表面特征等染色一般程序：制片、固定、媒染、染色、脫色、復(fù)染、水洗、干燥、鏡檢單染色革蘭氏染色：結(jié)晶紫初染、碘液媒染、酒精脫色、番茄紅復(fù)染抗酸染色芽孢染色莢膜染色鞭毛染色革蘭陰性革蘭陽性細菌的生化反應(yīng)細菌的分解和合成代謝中產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，因各種細菌具備的酶不完全相同，而使代謝產(chǎn)物有所差異，可以通過生化試驗的方法檢測，稱為細菌的生化反應(yīng)。比如鑒定嗜肺軍團菌的生化反應(yīng)：氧化酶、硝酸鹽還原、尿素酶、明膠液化、水解馬尿酸細菌的生化鑒定明膠液化試驗：某些細菌可產(chǎn)生一種胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸，從而失去凝固力，半固體的明膠培養(yǎng)基成為流動的液體，利用這樣的原理進行的試驗方法。

細菌的生化鑒定甘露醇發(fā)酵試驗吲哚試驗甲基紅試驗血清分型凝集試驗：顆粒狀抗原（如細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法是一種定性試驗方法。可用已知抗體來檢測未知抗原。若鑒定新分離的菌種時，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。該法簡便快速，除鑒定菌種外，尚可用于菌種分型、測定人類紅細胞的ABO血型等。

特異性核酸片段鑒定聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR方法）探針雜交基因芯片雜交檢測PCR梯度儀DNA聚合酶無菌操作采樣：視頻示例運輸：培養(yǎng)基和試劑應(yīng)用牛皮紙、紗布、或密封袋包裝好，放入裝有冰袋的保溫箱，生理鹽水管需要固定防止傾倒泄露實驗室檢測消毒與滅菌消毒：殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達到無害化的處理滅菌：殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的處理。常用的物理消毒方法干烤滅菌：遠紅外或普通電加熱器160℃，2小時；170℃

，1小時；180℃

，30分鐘煮沸滅菌：煮沸后15~30分鐘，加1~2%小蘇打或0.5%肥皂液可增強滅菌效果壓力蒸汽滅菌：121℃

，102.9kPa,維持20~30分鐘紫外線消毒：普通紫外線燈，30W新燈管，輻射強度應(yīng)≥90μW/cm2,使用中的應(yīng)≥70μW/cm2其他：微波消毒、電離輻射滅菌、過濾除菌、等離子體滅菌常用的化學(xué)消毒方法含氯消毒劑：液氯、次氯酸鈉、漂白粉、