微生物檢驗的質量控制實驗室的質量管理體系

微生物檢測實驗室的質量控制不僅僅是對檢測過程本身簡單的控制，而是貫穿于實驗室全部質量活動的始終。要獲得可靠的檢測結果，實驗室必須建立一套全面的質量管理體系。實驗室建立質量管理體系的依據食品微生物檢測實驗室質量控制規范

CNALAC23-2003食品微生物檢測實驗室認可準則GB19489-2004實驗室生物安全通用要求GB/T15481—2000檢測和校準實驗室能力的通用要求全國疾病預防控制機構工作規范2001版省、地、縣級疾病預防控制中心實驗室建設指導意見省、地、縣級疾病預防控制中心實驗室建設指導意見

縣級：血清學檢測實驗室，食源性病原菌及腸道菌分離鑒定實驗室，HIV初篩實驗室，結核病實驗室，地方病實驗室，寄生蟲病實驗室，食品、化妝品、水質、涉水產品等健康相關產品微生物實驗室，職業衛生和放射防護檢測室，理化實驗室，生化實驗室。

省、地、縣級疾病預防控制中心實驗室建設指導意見

縣級：開展免疫學、生物化學實驗，細菌培養分離鑒定，常見中毒事件微生物培養初步分離，食品、水、空氣、涉水產品、化妝品等的微生物檢測，寄生蟲病原學檢測，寄生蟲病中間宿主的種群鑒定和密度測定，作業場所、公共場所、生活居住環境有毒有害因素的相關實驗，飲用水和水源水質分析，常見毒物和化學污染因素的初步分析。

縣級疾控機構涉水微生物

主要儀器裝備標準空氣微生物采樣器1+2生化培養箱1+2水微生物膜過濾裝置1恒溫水浴箱4+5超凈工作臺2+3純水處理器1生物安全柜1+2紫外線強度分析儀1+1生物顯微鏡2+5恒溫培養箱5+10概念質量控制（Qualitycontrol）

實驗室為了保證檢驗結果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。食品微生物檢測實驗室

foodmicrobiologicallaboratory以質量管理、衛生以及監控HACCP計劃的有效性進行評價為目的，進行檢測、鑒定或描述食品中致病微生物存在與否的實驗室。實驗室可以提供其檢查范圍內的咨詢性和技術性服務，包括結果解釋和為進一步適當檢查提供建議以及相應的措施。

微生物實驗室質控的重要性

產品微生物檢驗，在預防疾病及研究工作中發揮越來越重要的作用，為了保障檢驗結果的準確性和可靠性，日常工作中應注意開展質量控制。微生物檢驗的質控

微生物學檢驗的質量控制也分為室內質量控制和室間質量評價兩個組成部分。

微生物學檢驗的質量控制是保證微生物檢驗的直接涂片染色、培養、鑒定、藥敏試驗及血清學分析等的準確性，避免因操作變化導致檢驗結果錯誤，造成經濟損失。內容室內質量控制實驗室內部質量保證的核心和基礎。室間質量控制評價外部組織或機構質量評價。實驗室質量控制

實驗室內質控自我控制發現隨機誤差和新出現的系統誤差評價檢驗質量的穩定性是檢驗的基礎、必需、常規

實驗室間質控外部質控發現系統誤差和實驗室間數據的可比性評價實驗室的測試系統和分析能力有效的校核是參加與標準實驗室的比對實驗室質量控制示意圖內部質量控制外部質量評估能力驗證實驗室間比對計量認證/審查認可（驗收）評審表

2007年12月31日廢止-人員-設施和環境-設備和標準物質

-量值溯源和校準

-校準和檢測方法-樣品管理-記錄-證書和報告-校準或檢測的分包

-外部供給驗收實驗室資質認定評審準則

2007年1月1日實施-人員-設施和環境條件-校準和檢測方法-設備和標準物質

-量值溯源-抽樣和樣品處置-結果質量控制-結果報告第一部分內部質量控制（IQC）

實驗室內為達到質量要求的操作技術和活動。其目的在于監測實驗室分析測試過程，以評價檢驗結果是否可靠，并查找和排除質量環節中所有階段中導致不滿意的原因。實驗室的內部質量控制適用于整個檢測過程的所有活動，包括收集樣品、檢測直至報告檢測結果。室內質量控制

做好室內質控直接關系到日常檢驗工作的質量。室內質控主要包括幾個方面：實驗前的質量控制（主要是操作人員、常用儀器設備、實驗材料如培養基、試劑、診斷血清、染色液、標準菌株等）、樣本檢驗過程的質量控制（主要是環境條件和監督），及發報告前的質量控制。都要保證量值溯源。內部質量體系包括以下所有的環節：選擇樣本；收集樣本；將樣本送到試驗室；試驗室接受樣本；試驗室測試樣本；樣本測試報告 解釋樣本的報告結果。從第一步到第三步，必須按照將樣本送到試驗室的正確步驟進行操作。從第四步到第七步，為了保證好的有效結果，必須按照良好的、規范的試驗室操作！

人員

良好的管理完整、有效、適應的質量體系訓練有素遵守規程,職責分工明確使實驗室的質量活動處于受控具有與從事工作相關部門銜接協調狀態，而不是隨意而為相符合的素質和技能

設備校準和檢定

實驗室質量控制的目的設備、量具、標準物質常年處于受控狀態是獲得有把握的可靠結果溯源到國家基準

設施和環境校準和檢測方法文件化符合檢測要求處于完全受控狀態樣品管理保證樣品數據處理、記錄、外部服務質量的完整性和安全性證書、報告正確采購物品的質量質量手冊的規定各級人員的職責和權限實驗室生物安全措施樣品采集和處理指南微生物學檢驗項目培養基和試劑的配制方法室內和室間質量控制參考數據室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制對微生物檢驗人員的要求特別強調高度的主觀判斷力

個人的技能、經驗微生物學的專業水平培訓班專業實驗室進修學術會議交流專業期刊檢驗人員的培養

檢驗質量可以通過正確的操作來體現，例如革蘭氏染色，可以通過對標準菌株的染色來反映操作和試劑的質量，這是有形的、看得見的。檢驗人員的培養

然而，質量保證更依賴檢驗者的認知能力。一個能夠嚴謹地分析實驗結果的檢驗者，不僅僅忠實地記錄實驗數據，而是可以實施更加嚴格的標準。配有一名經嚴格訓練并長期從事于微生物檢驗的技術人員，全面負責實驗室的工作。檢驗人員的培養

當遇到一些不常見檢驗結果或一些散發的錯誤，例如，試驗中發現的少見菌、從未見過的藥敏表型、污染率的增加等，往往通過一些質控方法難以檢查出來，但具有質量意識的微生物技術人員能對這些現象質疑，及時糾正，保證結果的準確可靠。

檢驗人員的培養1.定期進行新理論、新技術和新方法的業務學習。尤其是對于最新的檢驗方法標準的培訓。2.定期進行理論考核和操作技能考核。3.相互監督檢驗工作。4.編寫原始記錄表格、操作規程、作業指導書的過程，就是一次重新學習的過程。檢驗人員能力的確認

檢驗人員應考核后按檢驗項目上崗。上崗證上面應該寫明具體項目，而非“微生物檢驗”。校核者應為從事該工作五年以上的同科室檢驗人員。保密原則。室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制參考資料GB/T4789－2003食品衛生微生物學檢驗GB/T8538－1995飲用天然礦泉水檢驗方法生活飲用水衛生規范2001年版消毒技術規范2002年版化妝品衛生規范2002年版伯杰氏細菌學手冊……操作規程、作業指導書國家標準、規范中沒有明確說明的步驟，或者不夠明確的判斷指標。國家標準、規范中出現錯誤的部分。本實驗室改進的、獨特的處理方法。比如新儀器的應用，其實這是一種偏離。不過，通過驗證，完全可以使用。沒有標準、規范可以參照的。新的檢驗方法的確認

開展一項新的檢驗項目，必須進行相應的確認。全部參加該檢驗項目的人員共同仔細學習試驗步驟，統一操作程序和實驗結果的判斷指標。按要求的步驟進行實驗，詳細記錄每一步結果，同時用已知陽性對照進行參比。實驗結果綜合分析，組織專家評價。室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存生物安全的質量控制常用儀器質量控制

通常包括對冰箱、恒溫培養箱、生化培養箱、電熱恒溫水浴箱、厭氧培養箱等基本設備溫度的監控記錄。每日（多少次？）觀測記錄溫度，可繪制溫度曲線圖。如超出規定范圍馬上找原因，及時糾正。在儀器的旁邊置一記錄本，每次使用、保養、維修都要記錄，便于出現故障時尋找原因。這些儀器設備都必須檢定并進行期間核查。常用儀器質量控制

為避免偶然發生的交叉污染，實驗室的儀器不應頻繁移動。

已經移動了儀器，應記錄。常用儀器質量控制

對于箱式設備還要定期清理消毒，冰箱定期化霜。厭氧培養箱或厭氧罐必須進行厭氧環境監控。可以使用美蘭指示條或者刃天青指示劑（化學法）。也可以使用銅綠假單胞菌培養（生物法）。如果是CO2培養箱，還需要每天檢查、記錄箱內的CO2含量。儀器設備的質量控制標準

設備

控制標準

允許范圍高壓滅菌器121℃

≥121℃培養箱

36℃

±1℃水浴箱

46℃

±0.5℃冰箱

4℃

±2℃低溫冰箱－20℃

±5℃CO2培養箱5%～10%＜10%高壓滅菌鍋的質量控制

對于消毒滅菌器械，首先要求檢定。對于日常的滅菌效果定期監測（每月一次）或者期間核查，可以使用化學指示劑膠帶或者嗜熱脂肪芽胞桿菌生物指示菌片，選擇較低的滅菌溫度時，采用枯草桿菌芽胞指示菌片。這些產品，除了美國3M公司，還有一些國產貨。高壓滅菌鍋的質量控制高壓滅菌鍋由專人按作業指導書操作，并做好每一次的作業記錄。應包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌指示膠帶的顏色變化（常用無菌培養代替）。高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。干熱滅菌器的質量控制干燥滅菌箱日常工作記錄中應包括以下信息：開始的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關閉時間）。干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進行溫度測試。干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5℃滅菌2h。干燥滅菌箱校準時間一般為一年。培養基配制用純凈水的控制對于純凈水器來說：按設備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。檢測要求：按照國家標準飲用純凈水GB17323－1998電導率為≤

10ms/cm。檢測頻率：每次出水。購買定點供應蒸餾水，應做好相應的質量控制，記錄檢測結果。天平的管理天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。天平要有使用及運行檢查記錄。天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。運行檢查頻率按運行計劃或按產品（天平生產廠家）給出的標準重量單位進行對照。pH計pH計使用前應用標準液進行校準。緩沖液使用有效期：pH4.00約1年。pH7.00，約6個月。pH9.00，約6個月。pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復。專用儀器設備的質量控制

專用微生物生化鑒定儀等儀器的使用、保養、維修也都必須記錄。使用細菌鑒定儀要注意維持環境清潔，制作懸濁液、從鑒定儀中取、放鑒定條都要小心，以免打翻溢出。專用儀器的質量控制舉例全自動微生物生化鑒定儀：

a.及時更新系統操作軟件。

b.定期請工程師對儀器的探測部位進行清潔。c.校對比色、比濁系統，也可用標準菌株對每批號的鑒定卡、條和板作質控對照。為了保證鑒定結果準確，可在全自動細菌鑒定儀自動鑒定后，再用肉眼核對一次每個比色反應結果。專用儀器的質量控制

目測看看鑒定板上各個生化反應的判斷是否妥當。比如單核細胞增生李斯特菌在API鑒定條上的生化反應結果多半是相同的，區別主要在第1組，所以，我們要特別留意這3組生化反應的判斷。室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制衛生檢驗中常用的培養基水質檢測用培養基：7種化妝品檢驗用培養基：8種食品檢驗用培養基：常用的有37種，110種被列入了GB/T4789中，其中生化試驗培養基23種，一般和專用培養基89種。食品、化妝品及涉水產品等產品微生物檢驗常規項目中所用的增菌分離培養基有所不同。對于菌種鑒定所用的培養基，各類產品分離的菌種其鑒定所用的培養基基本相同。培養基質量控制培養基質量控制包括三方面。

一是原料選擇；

二是配制方法；

三是質量檢查。培養基質量控制

原料選擇：

基礎培養基一定要挑選優質品牌，如Oxoid、Difco

、生物梅里埃產品等。即使在國內的產品中，也有明顯的差異。可以用好的產品作為比對材料。培養基質量控制

配制方法：每次配制均按生產廠家提供的說明書上的方法與分量，記錄品名、干粉的批號、稱取份量、加水量、配制規格、使用的天平、高壓鍋、滅菌時間、pH計與最初最終的pH、操作者、操作日期，并于包裝上標明品名、使用期限。培養基質量控制實驗室要確保所有的試劑（包括儲存溶液）、培養基、稀釋劑和其它的懸浮液都貼上標簽，標明其適用性、特性、濃度、儲存條件、準備日期、有效期和（或）推薦的儲存時期。負責微生物檢驗準備的試驗人員可以從記錄中確認。

培養基質量控制制作過程必須固定統一。不得隨意變化。嚴格遵守并執行產品說明書上標明的培養基或添加劑的劑量、pH值、滅菌處理時間及溫度。培養基名稱、批號、配制量、規格、配方、配制日期和配制人員姓名都必須詳細記錄。培養基外觀檢查新配制或新購入的培養基必須先以肉眼檢查其外觀，顏色、透明度等等，無開裂和皺褶。培養基應測pH值，不得超過所預期值的±0.2。平板培養基最易脫水，應放在嚴密的有蓋容器內或塑料袋內。這樣平板內培養基可在4℃冰箱內避光保存兩周左右，試管內培養基可保存1～2個月。我們使用橡膠塞的生理鹽水瓶包裝的瓊脂，可以維持更長的時間。培養基的使用量平板培養基厚度一般3mm（90mm平皿＋15～20mL培養基）。藥敏試驗用2mm（90mm平皿＋10mL培養基）斜面不超過試管的2/3。以免產氣的時候涌出試管。培養基的有效性試驗的判斷指針

檢查實驗室內制備的培養基、稀釋劑和其它懸浮液的性質是否合適，可參照以下幾項進行：

a)目標微生物的恢復或生活力的維持；

b)非目標微生物的抑制；

c)生化（區別的和診斷的）性質；

d)理化性質（例如pH，體積）。

培養基的有效性試驗

每一批新制或新購的培養基，使用前均須取已知性質的標準菌株試驗是否能支持，區分或選擇某類細菌的生長。常用培養基的質量控制生長率測試適用于液體培養基：將菌培養液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數，同時以按相關的培養基配方新鮮配制的培養基進行對照。不低于10%。常用培養基的質量控制菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養基無統計學差異。培養基的有效性試驗

培養基的試驗結果需要加以記錄，項目包括試驗日期、試驗結果以及實驗者的簽名等。此記錄本需便于檢驗室人員的查看，以便能隨時解決任何發生的難題。培養基的有效期

配制好的培養基有效期的長短，應參考相應的書籍。若購買現用的培養基，均應注意有效期的標示是否正確。如血平板的有效期為3星期，厭氧菌分離培養基為1～2星期等。培養基的無菌試驗

每批配好的培養基須進行無菌試驗。可結合空白檢驗進行。隨機選取5～10%的量，如果配制大量的培養基，則任意選取10個平板或管裝培養基，35℃過夜培養，證明無菌生長為合格。培養基質量控制1.日常檢驗時進行的空白對照，可以證明培養基已經達到滅菌效果。2.用標準菌株接種，以保證各種培養基能培養分離出相應的致病菌，提高分離率。3.玻璃器具：注意殘留消毒劑或者其他抑菌物質對微生物生長的影響。培養基質量控制a.基礎培養基：要求微生物生長良好，并表現其典型的特征。如血瓊脂平板接種金黃色葡萄球菌和溶血鏈球菌。b.選擇性培養基：要求被抑制的細菌不生長或生長較弱，而被選擇生長的細菌生長良好。同時看其長勢是否符合規定，如SS平板接種沙門氏菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌。c.生化反應培養基：要求用標準陽性和陰性菌株進行質量控制。培養基質量控制

可以按照衛生部的WS/T232－2002《商品性微生物培養基質量檢驗規程》進行培養基的質量控制。

如果有條件可參照國際食品微生物與食品衛生委員會（ICFMH）提供的關于培養基質控方法進行質控。培養基名稱菌株名稱預期結果普通瓊脂大腸埃希氏菌生長表皮葡萄球菌生長血瓊脂平板乙型溶血性鏈球菌生長、乙型溶血甲型溶血性鏈球菌生長、甲型溶血伊紅美藍瓊脂大腸埃希氏菌生長、發酵乳糖鼠傷寒沙門氏菌生長、不發酵乳糖金黃色葡萄球菌不生長SS瓊脂大腸埃希氏菌生長不良鼠傷寒沙門氏菌生長金黃色葡萄球菌不生長尿素培養基普通變形桿菌陽性（紅色）志賀氏菌陰性（不變色）培養基的質量控制沒有列在WS/T232－2002《商品性微生物培養基質量檢驗規程》中的培養基，必須自行制定質量控制作業指導書。注意必須區分定性培養基或者定量培養基的質控要求不同。培養基的質量控制

購置培養基時，要求供應商提供產品質控證書，選擇通過ISO9001的生產廠家。培養基使用前必須用對照菌株進行評估。按照培養基和試劑標簽說明的貯藏條件保存。培養基的質量控制

Oxoid出產質量控制標準菌株Quanti-Cult，含有指定數目的微生物，用于質量控制工作。在定義的程序和生長條件下，形成指定數目的菌落單位；如果在其它條件下，或者培養基含有更多的抑制劑（選擇劑），或者培養基的營養不良，則不能保證形成指定數目的菌落單位。培養基的質量控制

2006年，國家質檢總局批準49種國家標準物質，其中包括用作食品微生物菌落總數標準物質。

培養基的質量控制

此次批準的食品微生物菌落總數標準物質，一種是以模擬食品實物，添加芽胞桿菌、腸桿菌、沙雷氏菌等菌株經冷凍干燥制成，另一種是以魚粉為基質與細菌混合經冷凍干燥制成。這類標準物質在控制食品中細菌總數的測量中起著測量標準的作用，有利于食品中細菌數量測量方法的核準和量值統一，更有利于保證檢驗質量。

室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制試劑的質量控制注意有效期。監控貯存條件，并定時記錄。用陽性和陰性標準菌株進行核查。血漿凝固酶—金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌氧化酶試劑—銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌靛基質試劑—大腸埃希氏菌、產氣腸桿菌常用試劑的陽性、陰性對照菌株常用試劑陽性對照菌株陰性對照菌株血漿凝固酶試劑金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌觸酶試驗用試劑金黃色葡萄球菌化膿鏈球菌V-P試驗用試劑陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌靛基質試劑大腸埃希氏菌陰溝腸桿菌氧化酶試劑銅綠假單胞菌大腸埃希氏菌

試劑的質量控制各類試劑，在配制或購入后均應進行“有效”試驗，用已知陽性及陰性菌株進行試驗。試劑須根據標示的配制要領或制造者的要求適當的儲存。對較穩定的試劑，如靛基質試劑應在配制時及每周予以檢測核對，凡不穩定的試劑每天使用時均應檢測，合格后才能使用。染色液質量控制

染色液必須按標準方法與分量配制，過濾后使用，每次記錄并且標明配制量、操作者以及購入或者配制日期。染色方法質量控制

染色方法也必須進行染色步驟質控。如革蘭氏染色在一張玻片上同時涂有金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌等等，每次質控與檢品同步進行，以保證染色性判斷準確無誤。購買現成的試劑盒，則使用標準菌株作為參照。各種常用染色液的質控菌株——————————————————————————染色液陽性對照菌陰性對照菌監控頻度——————————————————————————革蘭氏染色液金黃色葡萄球菌大腸埃希氏菌每批莢膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志賀氏菌每次——————————————————————————診斷血清的質控

對待診斷血清，因為容易變質，所以需要經常進行質量控制。原理與培養基的質量控制相同。在購入新的批號或者期間核查的時候，必須記錄日期、觀察澄清度、顏色和是否有沉淀物，然后置4℃冰箱保存。診斷血清的質控

使用標準菌株來核查血清的凝集情況，測試其敏感性和特異性。注意有效期和效價的變化，尤其是接近保質期的時候。每次使用前應注意檢查診斷血清的批號、有效期，如發現渾濁或有絮狀沉淀物時，很可能系污染所致，不能再繼續使用。微生物實驗室診斷血清質控記錄表

名稱檢測頻率質控物質控鑒定記錄日期操作者沙門氏菌屬診斷血清每月傷寒沙門氏菌大腸埃希氏菌（ATCC25922）鼠傷寒沙門氏菌無菌鹽水

傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌ATCC25922無菌鹽水

A-F多價（）（）（）（）Vi（）（）（）（）Hd（）（）（）（）

Hi（）（）（）（）O4（）（）（）（）O9（）（）（）（）

志賀氏菌屬診斷血清

每月福氏志賀菌宋內志賀菌大腸埃希氏菌（ATCC25922）無菌鹽水

福氏志賀菌宋內志賀菌ATCC25922無菌鹽水

多價血清（）（）（）（）福氏志賀氏菌血清（）（）（）（）宋內志賀氏菌血清（）（）（）（）

致病性大腸埃希氏菌診斷血清每月EPECO126B16大腸埃希氏菌（ATCC25922）

EPECO126B16ATCC25922OK1（）（）OK2（）（）OK3（）（）

室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制樣本檢驗過程的質量控制培養前選擇合理的檢驗項目。樣本采集、運送（早期采集、無菌采集、即時送檢）。樣本的合理保存。送檢樣本的登記：三查、三對。不符合檢驗要求的樣本登記：注明原因退回。樣本檢驗過程的質量控制培養中：直接診斷：直接涂片非常必要和重要。分離培養：使用多種適合于可疑病原菌生長的培養基和培養條件。鑒定：按鑒定程序執行，正確引導下一步鑒定。樣本檢驗過程的質量控制

在檢驗過程中還要注意三點：（1）做平行樣，以保證結果的可比性；（2）設立空白對照，以防止其他污染而導致的結果不準確；（3）設計合適的質控頻率，進行質控試驗。將質控菌株與常規工作一起進行，不能為質控菌株設計單獨操作程序，更不能專人專做。當質控標準菌株的內在敏感性發生改變時，要更換新的菌種。

樣本檢驗過程的質量控制培養后：結果復核：計算是否正確。確定病原菌的證據是否充足。報告單的原始信息復核。陽性結果及時通知受檢單位。特別結果提示。重視樣品的運輸

樣品采集后，應盡量減少運輸和儲存時間，盡快處理并檢測，時間耽擱得越少，檢驗結果的可靠性就越高。因為標本儲存時，微生物的各種代謝活動均直接影響標本的質量。因此，檢測非定型包裝產品時，應在采樣后立刻送到微生物實驗室，檢驗工作在4h內完成。重視樣品的儲存

短期內置于室溫不影響細菌檢出，無需冷藏。如果不能及時檢測，在送往實驗室之前不得已需放置一段時間，應置于2～8℃冰箱中保存。室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制標準菌株的來源標準菌株要求必須是形態、染色反應、生理生化及血清學特性典型而穩定的菌株。實驗結果重復性好，極少發生變異。國際社會認可。來源于專門的菌種保藏機構。標準菌株的來源標準菌株的主要來源：美國典型菌種保藏中心ATCC（AmericanTypeCultureCollection）中科院微生物研究所衛生部藥品生物制品檢定所標準菌株的保存法之冷凍干燥法

最理想的保存方法，不改變菌種性狀，保存時間長。手續繁瑣，需專門的冷凍干燥設備。再放在液氮罐或－80度低溫冰箱。菌種保存中心均采用此法。標準菌株保存法之冰凍保存法

此法較簡單，將細菌混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中，置液氮或－20℃冰箱保存。但細菌最終經多次轉種，性狀可能發生變異。標準菌株保存法之培養基保存法簡便易行的方法，適用于一般實驗室。（1）普通瓊脂斜面保存法：適于一般細菌的保存，置4℃冰箱可保存1～3個月。（2）血瓊脂斜面保存法：適于鏈球菌，可半月轉種一次。腦膜炎奈瑟氏菌應用巧克力斜面，若加液體石蠟，可延長保存期。（3）半固體穿刺法：配合液體石蠟，置4℃冰箱可保存3～6個月，適用于腸桿菌科細菌。標準菌株的應用用于實驗室的內部控制用于實驗室間的質量控制（外部質量評價）用于評價檢測方法的準確度實施合作項目時使用標準物質用于評價和仲裁用于制備實驗室的內質控樣品實驗室必備質控菌株大腸埃希氏菌ATCC25922銅綠假單胞菌ATCC27853金黃色葡萄球菌ATCC25923糞腸球菌ATCC29212腸炎沙門氏菌志賀氏菌溶血性鏈球菌室內質量控制對微生物檢驗人員的要求操作規程、作業指導書、質量手冊儀器設備的質量控制培養基的質量控制試劑、染色液及診斷血清的質控樣本檢驗過程的質量控制標準菌株的來源和保存環境條件（生物安全）的質量控制檢驗環境的質量控制

微生物檢驗實驗室重點控制的是空氣污染。實際上，光照、風速等等也有限制。近年對于清潔區、污染區的標識也有明確的要求。檢驗環境的質量控制

由于受經濟和技術條件限制，目前不少微生物實驗室仍將實驗用房分隔成操作間和緩沖間，操作間又分隔成許多小隔離區，并依靠數盞紫外燈，以達到隔離的目的。這種實驗室格局在大部分檢驗單位還在使用，并以沉降菌數參數為控制指標。在檢驗標準沒有明確限制的時候，仍可以使用。檢驗環境的質量控制

較完善的微生物實驗室具備無菌實驗室、凈化實驗室、生物安全實驗室等，凈化實驗室應采用封閉過濾除菌，通風方式、吊頂、隔墻、圍護全部采用彩鋼板，地面作環氧樹脂自流平處理，并設置非凈化區、更衣區、凈化區。凈化實驗室應定期進行風速監測和及時更換過濾層罩。

環境設施的相關技術指標凈化室、凈化工作區域、潔凈環境按國家及部頒標準進行檢測。空氣潔凈度指標：檢測頻率及方法。2次/月；空氣細菌檢測（沉降法）。有條件的，增加浮游菌。級別≥0.5mm塵粒(個/L)≥5mm塵粒(個/L)活菌顆粒平均數(cfu/平板)100≤3.5≤0.0≤1.010000≤350.0≤2.5≤3.0檢驗環境的質量控制

條件有限的實驗室可使用超凈工作臺；無菌室應配臭氧/紫外線消毒裝置，在使用前后都應開啟紫外線燈消毒，并定期進行紫外線強度和空氣質量監測；生物安全實驗室除了正常管理、維護之外，要注意空氣過濾的質量和工作人員的隔離防護。

凈化工作臺的控制水平流凈化工作臺工作區域，要求潔凈度為100級。空氣沉降30min，沉降菌數＜1cfu/皿。垂直流凈化工作臺，沉降菌數＜0.49cfu/皿.凈化工作臺運行檢查頻次：2次/月，主要是細菌沉降檢測。凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。實驗室環境的控制

1.防塵源性污染措施：定期進行實驗室的熏蒸消毒，工作前后消毒液噴霧降塵，擦拭工作臺面。超凈工作臺、生物安全柜應根據其功能定期檢測其工作能力，清洗更換濾網。紫外燈的控制儀器測試法：紫外線燈每三月檢查紫外線強度。通過專用儀器檢測紫外燈管發射的紫外光強度。消毒技術規范中規定在距離1m處，要求其強度為90。生物測試法：殺菌效果的檢查采用大腸桿菌培養物，經一定比例稀釋，菌量控制在200～250個/0.5mL，涂布平板在紫外燈下照射2min，同時設置普通光源的對照組，培養48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。實驗室環境的控制

2.防人源性污染措施：換鞋、帶口罩、帽子、手套，穿隔離衣。這些材料的消毒措施。3.防實驗動物和實驗材料自身的污染：注意無菌操作，要防止動物體表和體內正常存在的微生物污染樣本，干擾病原微生物的檢出。實驗室內部質量控制措施

系統使用一式雙份的細菌總數測定；系統使用接種了某種培養物(標準菌株)的樣品，用于定性測定，用于培養基、配套試劑、血清的性能確認；同時使用陽性對照、陰性對照、基質對照、空白對照；由同幾個檢驗人員同時平行地進行一次以上的平板計數；系統使用盲樣。菌落總數測定質控方法菌落計數精密度控制直接計數選擇同一標本，要求多名檢驗人員進行菌落計數。將大腸桿菌ATCC25922或經檢定標化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數實驗操作。36±1℃培養24h進行菌落計數。菌落總數測定質控方法計數精密度控制重復計數法選擇十個平板，每個平板具有合適的菌落數（100以內）。將平板編號，由實驗人員進行計數并記錄結果。去掉平板編號，將平板置冰箱保存過夜，次日取出，重新給予編號，由實驗人員重復計數并記錄。計算每位實驗人員每對結果的平均數（X）。菌種、毒種的管理生物安全管理制度定期核查——相當于標準物質。病原微生物危害等級及對應防護水平級別病原微生物危害等級操作準則安全防護(一級屏障)設施(二級屏障)1（低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子標準微生物學操作不要求要求有開放的實驗臺面和洗手池2（中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。生物安全1級加限制進入、生物危險警示標志；“銳器”安全操作策略；有關廢棄物凈化處理及醫學監測政策的生物安全手冊一級屏障：Ⅰ型或Ⅱ型BSCs或其它用于操作可能產生感染性氣溶膠或飛濺物的個人防護裝備或物理防護設施；個人防護裝置：實驗服、手套、面罩生物安全1級加高壓滅菌設備生物安全水平分級

根據所操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施，將生物安全防護水平（biosafetylevel，BSL）分為4級，I級防護水平最低，IV級防護水平最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示醫學或生物實驗室的相應生物安全防護水平；以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示動物實驗室的相應生物安全防護水平。一級生物安全防護水平（BSL－1）

BSL－1適合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、對實驗室工作人員和環境危害性最小的生物因子（對應于我國的第四類危害的微生物）的工作。BSL－1不需要特殊的一級和二級屏障、除需要洗手池外，依靠標準的微生物操作即可獲得基本的防護水平。BSL－1實驗室無需特殊選址，普通建筑物即可，但應有防止節肢動物和嚙齒動物進入的設計。每個實驗室應設洗手池，宜設置在靠近出口處（？）。在實驗室門口處應設掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開放置。實驗室的墻壁、天花板和地面應平整、易清潔、不滲水、耐腐蝕。地面應防滑，不得鋪設地毯。實驗臺面應防水，耐腐蝕、耐熱。實驗室中的廚柜和實驗臺應牢固。廚柜、實驗臺彼此之間應保持一定距離，以便于清潔。實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗。實驗室內應保證工作照明，避免不必要的反光和強光。應有適當的消毒設備（高壓、浸泡或煮沸）。BSL－1實驗室設施(二級屏障)BSL-1個人防護二級生物安全防護水平（BSL－2）二級生物安全防護水平是指實驗室的操作、安全設備、和設施適用于操作我國的第三類（少量二類）危害的致病微生物。二級生物安全防護水平適合于從未知病原的人身上取血、體液和組織的檢測和研究（可能含有高致病微生物）。BSL-2實驗室設施要求滿足BSL-1的要求，如有緩沖區更好。實驗室門應帶鎖并可自動關閉。實驗室的門應有可視窗。應有足夠的存儲空間擺放物品以方便使用。在實驗室工作區域外還應當有供長期使用的存儲空間。在實驗室內應使用專門的工作服；應戴乳膠手套。在實驗室的工作區域外應有存放個人衣物的條件。應通風，如使用窗戶自然通風，應有防蟲紗窗。有可靠的電力供應和應急照明。實驗室出口應有在黑暗中可明確辨認的標識。BSL-2實驗室設備要求實驗室內必須配備生物安全柜（一級或二級）。根據需要（切片或離心）設置負壓罩。應設洗眼設施，必要時應有應急噴淋裝置。有紫外消毒設備。在實驗室所在的建筑內應配備高壓蒸汽滅菌器。BSL－2：實驗室設施(二級屏障)生物安全柜（BSC）生物安全柜作用：①樣品的保護；②操作者保護；③環境保護。II級生物安全柜設備、器材的布置BSL-2必要時加面部防護BSL－3：實驗室設施(二級屏障)BSL-3特殊防護BSL－4實驗室（正壓型）BSL－4正壓防護服實驗室安全防護培訓與告知實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關工作有關的危險。對招收新職工、工作開始發生變化或使用新方法，啟用新的設備時，這點尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務人員都要知道。需要進行口頭和書面兩種方式的通知。有關儀器必須要有字跡清楚的其安全使用的書面說明。實驗室安全防護標志在進行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標志。實驗室的房間必須以使與微生物有關的危險得以過免的方式裝置，以使微生物的傳播得到限制，房間還應便于清潔和消除污染．工作臺必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應盡可能地避免污染。檢驗質量失控后的處理1.分析原始數據及初步估計失控原因。2.對具體檢測過程進行回顧性分析。3.通過選擇性復查，進一步分析判斷失控原因和決定處理方法。分析原始數據及推測失控原因

原始數據指未經計算或換算的檢測數據。這些數據是最直接、最真實地反映檢測情況的第一手資料。當發生失控時，對同批實驗檢測的全部原始數據結合近期室內質量控制情況和平時經驗進行分析，往往有助于推測失控原因的大體方向，提示誤差類型和失控原因，使查找原因的工作更有重點。回顧分析具體檢測過程

發現檢驗質量失控后，應對該次實驗的全過程進行迅速、仔細的回顧，分析有無特殊情況出現。當暴露問題后，檢驗責任人往往急于出具“正確”的結論，早早結束調查，但這時更應該控制進度，避免矯枉過正。失控原因的分析實驗室有無新的變化如儀器和試劑有無針對性檢查這些變化對檢測的影響重測同一質控樣品開一瓶新的質控重測重測原因找到沒找到檢查儀器狀態和試劑是否過期進行選擇性復查

選擇性復查時應包括下述材料，以便快速找出原因，及時進入正常的檢驗。監督員的重要性。

⑴失控時使用的全部培養材料。

⑵重新開啟相同批號的檢驗材料。

⑶包括已知陽性、陰性菌株，近期曾做過該項目檢測的陽性、陰性樣本。進一步分析判斷，決定處理方法

通過對復查結果的分析，查明失控原因，制訂相應解決方案，使實驗室工作重新在控。并將失控情況、具體原因和解決方案在記錄表格中作詳細記錄。室內質控失控報告單日期：年月日編號：□□□□項目：儀器型號：質控依據：質控菌株：ATCC25923ATCC25922ATCC27853失控原因：1）試劑□2）診斷血清□3）環境條件□4）儀器□5）檢驗標準6）人員操作過程7）8）其它（請詳述）：失控判斷及處理建議：失控前測定數據：處理后測定數據：操作者：監督員：質量負責人：實驗室外部質量評估（EQA）實驗室外部質量評估(EQA)：由第三方機構采取一系列的方式連續地、客觀地評價各實驗室的檢驗結果，并發現實驗室本身不易發現的不準確性；了解實驗室之間結果的差異，幫助其校正，使其結果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結果的可接受性。室間質量控制

室間質量控制是各地實驗室之間進行質量控制的一種方式，也是上一級實驗室對下級各實驗室進行質量管理的手段。參加室間質控，常常會遇見一些平時罕見或未見過的菌株，對它們的生長條件、菌落形態、染色、顯微形態等有了較深的感性認識。以后倘若再遇見這些微生物，就會心中有數。各級實驗室可同時接受國內、國際多個質量控制機構或參考實驗室的質量評價。室間質量控制目的

按照全國疾病預防控制工作規范（微生物學檢驗）進行實驗室間的質量控制的目的，就是使各實驗室之間能達到一致的質量水平，保證各實驗室間的微生物檢驗質量，獲得具有可比性的檢驗結果。室間質量控制的內容

按照全國疾病預防控制工作規范（微生物學檢驗）進行實驗室間質量控制的內容：a．逐級對檢驗人員進行培訓，統一檢驗方法和操作規程，培訓結束時進行考核。b．各實驗室所使用的各種試劑、培養基以及各種診斷用品等應標準化。c．建立質量控制考核制度。各級疾病預防控制機構每年對下級機構的微生物檢驗工作進行考核。d．每年進行一次質量控制樣品的考核，評定實驗室間的偏差、尋找原因，加以糾正。室間質量控制的內容

按照全國疾病預防控制工作規范（微生物學檢驗）進行實驗室間的質量控制的結果與評價：

a．培訓及其考核的資料；

b．質量控制樣品考核的結果和評價；

c．檢查中發現的問題及整改措施。

按照預先規定的條件，由兩個或多個實驗室對相同或類似檢測物品進行檢測的組織、實施和評價。

實驗室間比對的概念實驗室間比對目的A、確定某各實驗室進行某項特定檢測的能力，以及監測實驗室的持續能力；B、識別實驗室的問題并制定相應的糾正措施，可能與人員的能力或一起的校準有關；C、向實驗室的客戶提供根高的可信度；D、確定和監控新方法的有效性和可比性；E、確定某種方法的性能特征，通常成為共同試驗；F、為標準物質賦值，并評估其適用性；G、鑒別實驗室間的差異。

能力驗證的概念

能力驗證是為確定某個實驗室進行某項特定檢測的能力而進行的實驗室間比對，以及監控實驗室的持續能力的實驗室間比對。

GB/T15483－1999利用實驗室間比對的能力驗證第1部分：能力驗證計劃的建立和運作和第2部分：實驗室認可機構對能力驗證計劃的選擇和使用

CNAL規定：獲得其認可前參加一次能力驗證活動；已認可實驗室在其認可范圍內的每個主要領域每4年至少參加一次能力驗證活動；當認可實驗室的關鍵技術人員或認可范圍發生變化時，認可委員會將縮短實驗室參加能力驗證的時間間隔。能力驗證類型a)定性計劃：如要求實驗室識別檢測物品的某個組分；

b)數據轉換演練：如提供給實驗室多組數據要求進行處理，以獲得進一步的信息；c)單件物品檢測：一件物品按順序送往若干個實驗室，并按時返還組織者；d)單項演練：就單一事件向實驗室發送一個檢測物品：e