我國HBV感染概況一般人群HBsAg攜帶率高達7.18%；現有慢性HBV感染者約9300萬人，占全世界的1/4；其中慢性乙型病毒性肝炎患者超過

2000萬例，占全世界慢性乙肝患者的1/3；15歲以下兒童HBsAg攜帶率下降顯著，1-4歲組僅為0.96%；1~4歲組HBsAb陽性率由1992年15.75%升至72.25%;抗HBcAb陽性率由1992年30.08%降至3.76%；12021/8/121HBV基因組HBVDNA是由長鏈L(負鏈)

和短鏈S(正鏈)

組成的不完全雙鏈環狀DNA，短鏈的長度相當于長鏈的50%～85%。HBVDNA長鏈載有病毒蛋白質的全部密碼，有4個開放讀碼框架(ORF)，分別稱為S、C、P和X區。編碼7個蛋白質。HBVDNA易發生變異，特別是前S或S區基因較易突變。嗜肝DNA病毒的共同特點：內含3~3.3kb松散環狀、部分雙鏈DNA基因組及DNA聚合酶；病毒的復制需逆轉錄過程。32021/8/122HBV抗原和抗體系統表面抗原(HBsAg)：HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白

S蛋白：狹義的HBsAg指S蛋白。HBsAg陽性說明機體有HBV感染。中分子蛋白：preS2+S

大分子蛋白：preS1+preS2+SS蛋白中分子蛋白大分子蛋白PreS1PreS2S1.HBsAg和抗-HBs2021/8/123e抗原(HBeAg)：是可溶性蛋白質只存在于血液中是病毒復制和傳染性的標志e抗體(抗-HBe)：對HBV感染有一定的保護作用其出現標志著病毒復制減少、傳染性降低前C區C區前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達切割、加工HBeAg只存在于血清中HBVC基因分泌到細胞外2.HBeAg和抗-HBe52021/8/124HBV的三種形態1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere62021/8/1256HBV自然復制周期2021/8/1267生物化學檢測1HBV血清標志物的檢測2HBV分子生物學診斷3HBV臨床藥物療效檢測4HBV感染的實驗室檢查2021/8/1271.乙型肝炎的生物化學檢測主要指標：ALT,AST,ASTm，血清白蛋白，血清膽紅素，膽堿酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原時間(PT)及部分凝血因子；82021/8/128方法學的發展ELISA：靈敏性高，成本低，適用于普通病人篩查；膠體金免疫層析法(金標法)：簡便易行，可用于急診病人快速檢測；化學發光法定量檢測：價格昂貴，可用于HBVMs為臨界值的病人的確證；可間接反映宿主HBV的復制水平，在評價抗病毒治療的病毒學應答、療效和判斷預后方面有重要意義。新增檢測指標Pre–S1、Pre–S2及其相應抗體對乙肝兩對半的新認識92.HBV血清標志物檢測2021/8/12910HBV血清標志物檢測方法的成本效果分析(1)2021/8/121011HBV血清標志物檢測方法的成本效果分析(2)Back2021/8/121112Terminal

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Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344preS1preS2Ss1s266HBsAg2021/8/1212XMutationofS&Pre-SS基因“a”決定簇

G145R

變異，與抗-HBs的親和力降低S基因變異可導致隱匿性HBV感染(occultHBVinfection)，表現為血清HBsAg陰性，但仍可有HBV低水平復制(血清HBVDNA常<104拷貝/ml)獻血員人群，隱匿性HBV感染的檢出率可達0.19%142021/8/1213142021/8/121415Pre–S1檢測的臨床價值前S1蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆粒上，在HBV感染宿主細胞過程及在病毒復制和刺激機體產生免疫反應中起重要作用;前S1抗原與HBeAg之間有高度相關性，并可區別因變異種及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假陰性，可作為HBeAg假陰性補充，從而準確反映患者體內病毒復制情況；可作為HBV感染及復制的標注，與其它血清標志物聯合檢測，相互補充。Back2021/8/121516大三陽小三陽vs2021/8/1216HBV血清學標志檢測結果分析162021/8/121718類型HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb樣本數(n)構成比(%)1＋－－－＋40.212＋－＋－＋231.203＋－－＋＋985.114－－－－＋462.405－－－＋＋683.556－＋－＋＋1849.607－＋－－＋633.298－＋－－－47024.539－－－－－96050.10合計1257172335048619161001916例HBV血清標志物陽性類型分布模式2021/8/1218192021/8/1219202021/8/122021HBVDNA定量檢測病毒復制水平最可靠，最直接的證據，與傳染性和疾病進展密切相關；主要用于HBV感染的判斷，治療適應癥的選擇及抗病毒療效的判斷。HBV基因分型基因分型的必要性；基因分型的主要方法；HBV耐藥突變的檢測3.HBV分子生物學診斷2021/8/1221慢性HBV感染治療適應癥的選擇HBeAg陽性，HBVDNA載量>105copies/ml,ALT>2×ULN;HBeAg陰性，HBVDNA載量>104copies/ml,ALT>2×ULN;HBVDNA持續陽性，年齡>40歲，ALT大于正常上限，也可給予抗病毒治療；HBVDNA持續陽性，年齡>40歲，ALT持續正常，應密切隨訪，動態觀察疾病進展，必要時行肝組織檢測，有病變證據時，可以給予抗病毒治療；222021/8/1222HBV感染抗病毒治療的療效評估治療終點：HBVDNA明顯下降或低于檢測下限，并伴有ALT正常；HBVDNA水平治療開始后3個月內持續下降1log以上才說明治療有效；每日0.5mg恩替卡韋治療1年時,HBeAg陽性和陰性慢性乙型肝炎患者HBVDNA檢測不到率分別為67%和90%,恩替卡韋的HBeAg轉換率為21%,與其他口服抗病毒藥相似。并不以HBeAg轉陰或HBsAg轉陰為治療終點或目標。232021/8/1223HBVDNA定量檢測試劑盒的性能對比242021/8/122425同時可以實現對HCV,HIV-1,衣原體，及淋病的一體化檢測Back2021/8/1225病毒基因突變疾病進展臨床表現對干擾素應答耐藥變異生化學改善HBeAg血清學轉換HBVDNA清除急性乙型肝炎慢性乙型肝炎肝硬化(LC)肝細胞癌(HCC)26HBV基因型/基因亞型2021/8/1226分型方法優缺點序列測定法最直接，最可信，是HBV基因分型的金標準，但繁瑣費時而且價格昂貴，混合型檢測能力差，不適于大樣本檢測。聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析法(PCR-RFLP)較測序法簡便，適于大樣本檢測，但由于需要進行酶切，所以操作仍較為繁瑣，成本較高，并存在酶切不徹底等問題。pre-S2單克隆抗體酶聯免疫測定(mAbsEIA法)簡單、快速，已商品化，適于大樣本檢測，但檢測費用較高并不能有效鑒別有些混合型感染和HBsAg低表達及某些表位表達不充分的標本。分子探針雜交法簡單、快速，對混合型檢測非常敏感，已商品化，適于大樣本檢測，但檢測費用較高而且靈敏度和特異度還有待提高。型特異性引物PCR法簡單、快速，成本低，具有較高的靈敏度，適于流行病學研究和臨床大樣本檢測。但特異度還有待提高。常用HBV基因分型方法比較272021/8/1227B型特異性“引物對”的特異度分析B型特異性引物HB（正義鏈）：5’-ACCGTGAACGCCCACMGGAA-3’28Back2021/8/12284.HBV臨床藥物治療監測乙肝病毒的耐藥性檢測，是精準治療乙肝的關鍵！！目前由于治療不夠規范，造成我國目前超過95%的乙肝患者發生耐藥、病毒變異、病毒耐藥，變異檢測勢在必行！拉米夫定是第一個被批準治療慢性乙型肝炎的口服抗病毒藥,已在全世界廣泛應用。但其耐藥發生率高,治療1年時耐藥發生率為23%,2年為46%,3年為55%,4和5年分別為65%和71%。292021/8/1229耐藥---核苷(酸)類似物(NA)治療失敗最重要原因30拉米夫定LMV阿德福韋酯ADV替比夫定LdT恩替卡韋ETVHBV替諾福韋TDVNAs：抑制病毒復制長期使用耐藥變異2021/8/1230臨床耐藥表型耐藥基因耐藥耐藥研究312021/8/1231322021/8/123233PolymeraseTerminal

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(RT)RNaseHrt1rt344逆轉錄酶(RT)區某些位點變異與耐藥相關preS1preS2HBsAgs1s266可同時分析：耐藥變異，HBsAg變異，基因型，血清型2021/8/1233全長RT區分析技術路線HBVDNA提取snPCR擴增RT區PCR產物直接測序生物信息學